美洲斑潛蠅是對(duì)蔬菜和觀賞性植物造成嚴(yán)重危害的一種多食性昆蟲(chóng),為了研究美洲斑潛蠅的氣味結(jié)合蛋白的功能,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)美洲斑潛蠅成蟲(chóng)轉(zhuǎn)錄組的測(cè)序結(jié)果的RACE-PCR擴(kuò)增驗(yàn)證,獲得20個(gè)具有完整cDNA編碼框的LsatOBPs基因,進(jìn)一步研究,獲得的主要結(jié)論如下:1.獲得20個(gè)cDNA全長(zhǎng)序列的氣味結(jié)合蛋白基因,命名為L(zhǎng)satOBP1-15以及LsatPBPRP2-6,其中9個(gè)為Classic OBPs,5個(gè)為Minus-C OBPs,4個(gè)為Plus-C OBPs,2個(gè)為Dimers OBPs。使用熒光定量技術(shù)對(duì)這20個(gè)OBPs基因在美洲斑潛蠅幼蟲(chóng)、蛹以及成蟲(chóng)中的相對(duì)表達(dá)含量分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)4個(gè)LsatOBPs基因在幼蟲(chóng)階段表達(dá)量很高、2個(gè)LsatOBPs在蛹期的表達(dá)量很高;5個(gè)LsatPBPRPs以及其余9個(gè)LsatOBPs在成蟲(chóng)中的表達(dá)量很高,這14個(gè)LsatOBPs基因在美洲斑潛蠅不同日齡的雌雄成蟲(chóng)中表達(dá)量也是存在差異性的,8個(gè)LsatOBPs基因在新羽化的雌雄成蟲(chóng)中表達(dá)量不存在顯著性差異,14個(gè)LsatOBPs在羽化三天后的雄成蟲(chóng)中的表達(dá)量均顯著高于雌成蟲(chóng)中的表達(dá)量,5個(gè)LsatOBP...

【文章頁(yè)數(shù)】：132 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 昆蟲(chóng)化學(xué)通訊中的信息物質(zhì)
        1.1.1 來(lái)自植物的化學(xué)信息物質(zhì)---綠葉揮發(fā)性氣味
        1.1.2 來(lái)自昆蟲(chóng)的化學(xué)信息物質(zhì)---信息素類(lèi)物質(zhì)
        1.1.3 植物化學(xué)信息物質(zhì)和昆蟲(chóng)信息素的關(guān)系
    1.2 昆蟲(chóng)的外周嗅覺(jué)系統(tǒng)
        1.2.1 昆蟲(chóng)嗅覺(jué)感器種類(lèi)
        1.2.2 昆蟲(chóng)外周嗅覺(jué)感受過(guò)程
    1.3 昆蟲(chóng)氣味結(jié)合蛋白研究
        1.3.1 氣味結(jié)合蛋白的分類(lèi)及結(jié)構(gòu)特征
        1.3.2 氣味結(jié)合蛋白生理功能及分布
        1.3.3 氣味結(jié)合蛋白結(jié)合特性研究及其應(yīng)用
    1.4 立題依據(jù)及研究?jī)?nèi)容
        1.4.1 立題依據(jù)
        1.4.2 主要研究?jī)?nèi)容
第二章 美洲斑潛蠅氣味結(jié)合蛋白基因的篩選
    2.1 材料與方法
        2.1.1 美洲斑潛蠅樣品的收集
        2.1.2 主要試劑及儀器設(shè)備
        2.1.3 美洲斑潛蠅轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及序列拼裝
        2.1.4 美洲斑潛蠅LsatOBPs基因的鑒定
        2.1.5 美洲斑潛蠅LsatOBPs基因的生物信息學(xué)分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 轉(zhuǎn)錄組的測(cè)序
        2.2.2 轉(zhuǎn)錄組序列的拼裝
        2.2.3 轉(zhuǎn)錄組序列注釋與分析
        2.2.4 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中美洲斑潛蠅LsatOBPs基因的挖掘
        2.2.5 美洲斑潛蠅LsatOBPs基因RACE-PCR結(jié)果
        2.2.6 美洲斑潛蠅LsatOBPs基因生物信息學(xué)分析
    2.3 討論
第三章 美洲斑潛蠅氣味結(jié)合蛋白基因的表達(dá)譜分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 美洲斑潛蠅樣品收集
        3.1.2 主要試劑及儀器設(shè)備
        3.1.3 總RNA提取
        3.1.4 cDNA反轉(zhuǎn)錄第一條鏈
        3.1.5 qPCR引物設(shè)計(jì)
        3.1.6 qPCR反應(yīng)體系
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 熒光定量各個(gè)樣品總RNA提取
        3.2.2 熒光定量實(shí)驗(yàn)的內(nèi)參基因的選擇
        3.2.3 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中模板濃度的確定
        3.2.4 幼蟲(chóng)和蛹中大量表達(dá)的LsatOBPs基因
        3.2.5 雌雄成蟲(chóng)中大量表達(dá)的LsatOBPs基因的表達(dá)差異
    3.3 討論
第四章 美洲斑潛蠅氣味結(jié)合蛋白的結(jié)合特性研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 供試?yán)ハx(chóng)
        4.1.2 主要儀器和試劑
        4.1.3 引物設(shè)計(jì)
        4.1.4 總RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄
        4.1.5 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.1.6 目的蛋白表達(dá)和純化
        4.1.7 目的蛋白與 1-NPN的結(jié)合常數(shù)測(cè)定
        4.1.8 目的蛋白與特定氣味的結(jié)合特性分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 原核表達(dá)載體構(gòu)建
        4.2.2 目的蛋白表達(dá)形式以及純化結(jié)果
        4.2.3 LsatOBP1、LsatOBP13與氣味物質(zhì)的結(jié)合特性分析
        4.2.4 LsatPBPRPs與氣味物質(zhì)的結(jié)合特性分析
    4.3 討論
第五章 美洲斑潛蠅氣味結(jié)合蛋白的組織免疫熒光共定位
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        5.1.3 美洲斑潛蠅氣味結(jié)合蛋白的免疫抗體制備
        5.1.4 美洲斑潛蠅頭部掃描電鏡的觀察
        5.1.5 美洲斑潛蠅頭部組織冷凍切片
        5.1.6 LsatOPBs在美洲斑潛蠅頭部的熒光免疫定位
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 美洲斑潛蠅七個(gè)LsatOBPs的蛋白相互作用預(yù)測(cè)
        5.2.2 美洲斑潛蠅頭部口器以及下顎須掃描電鏡觀察
        5.2.3 美洲斑潛蠅七個(gè)LsatOBPs在觸角嗅覺(jué)感器上的免疫定位
        5.2.4 美洲斑潛蠅LsatOBPs在口器上的免疫定位
    5.3 結(jié)論與討論
第六章 全文結(jié)論
    6.1 主要結(jié)論
    6.2 本研究的創(chuàng)新
    6.3 本研究的問(wèn)題與不足
    6.4 本研究的展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3776013