本文關(guān)鍵詞：不同劑量和時間分割電離輻射誘導(dǎo)的P53脈沖動力學特征及其生物學效應(yīng)研究

  更多相關(guān)文章： P53脈沖 脈沖振幅 時間間隔 細胞周期阻滯 凋亡 劑量分割效應(yīng)

【摘要】：目的：在群體細胞水平,量化單次不同劑量和兩次不同時間間隔Y射線照射人乳腺癌細胞株MCF-7、人肺腺癌細胞株A549和正常人成纖維細胞NFC三種細胞后的p53蛋白表達水平、G2/M期細胞百分比變化、凋亡和克隆形成情況,闡明不同劑量和時間分割電離輻射誘導(dǎo)的不同細胞株p53脈沖動力學特征及其生物學效應(yīng)。探討p53衰減脈沖在劑量分割照射方面的價值,為臨床劑量分割模式的優(yōu)化探索新的途徑。方法：以一種可拆卸的8行12列的細胞培養(yǎng)板(coning 9102)為載體,將三種對數(shù)期生長的細胞均勻接種其中培養(yǎng)24h后,分別接受0Gy、2Gy、 8Gy和2*2Gy γ射線照射,采用Cell-Based Colorimetric ELISA法在96孔細胞培養(yǎng)板中檢測輻照后0-30h內(nèi)的p53表達水平；兩次照射的時間間隔為8h、12h和24h。通過流式細胞術(shù)測定三種細胞照射前后不同時間點的細胞周期分布、細胞凋亡率,于照射后10-14天用細胞平板克隆試驗測定細胞克隆集落形成情況。結(jié)果：1.單次電離輻射后p53的動力學、細胞周期、細胞凋亡和存活曲線1.1借助8行12列的可拆卸96孔細胞培養(yǎng)板,采用Cell-Based Colorimetric ELISA法成功檢測到三種細胞的P53蛋白成衰減脈沖表達(0-24h)。1.2在單次Y射線照射后,在群體水平,三種細胞產(chǎn)生的p53脈沖動力學特征為：①相同點：p53脈沖數(shù)目均不依賴于輻射的劑量,檢測范圍內(nèi)持續(xù)存在,大約6個脈沖；p53脈沖的振幅均依賴于輻射的劑量；三種細胞的p53脈沖的周期均在3-4小時左右。②不同點：不同細胞株脈沖的峰值時間不同,NFC細胞株第一個脈沖的峰值時間在照射后1h,MCF-7和A549細胞株均在照射后3h；不同細胞株脈沖振幅不同,振幅從高到低依次為MCF-7A549NFC。1.3在單次Y射線照射后30h內(nèi),三種細胞達到G2/M百分比的峰值時間均在照射后12小時,但正常人成纖維細胞NFC的峰值時間時G2/M百分比較低；MCF-7和A549細胞凋亡峰值時間在照射后24h,NFC細胞凋亡峰值時間在照射后12h。1.4分別給予0、2、4、6、8Gy單次劑量照射三種細胞后培養(yǎng)10-14天,記數(shù)克隆數(shù),計算不同細胞株不同劑量的存活分數(shù),繪制存活曲線,計算三種細胞的SF2.結(jié)果表明,NFC細胞株SF2=0.90,A549細胞株SF2=0.66,MCF-7細胞株SF2=0.34,提示三種細胞的放射敏感性有差異。2.不同時間分割電離輻射后p53的動力學、細胞周期、細胞凋亡和克隆形成2.126y*2次不同間隔時間Y射線照射三種細胞后(8h、12h、24h),再次檢測6h,與單次2Gy相比,P53衰減脈沖振幅、周期時間均未發(fā)生明顯變化(P0.05),與單次4Gy相比,P53衰減脈沖振幅低于相應(yīng)的時間點的振幅,提示劑量分割后p53脈沖依然衰減表達,而周期時間未發(fā)生明顯變化(P0.05)。2.24Gy單次照射和2Gy*2次不同間隔時間(8h、12h、24h)照射三種細胞后12h和24h,NFC細胞株各組G2/M期細胞百分比和凋亡率變化均未見明顯差異(P0.05)。在照射后12h,MCF-7和A549細胞株各劑量組G2/M期細胞百分比變化有差異(P0.001),提示G2/M期阻滯的劑量依賴性；不同時間間隔照射后24h,不同細胞G2/M百分比變化無明顯差異(P0.05)。2Gy*2次不同間隔時間照射細胞凋亡率與單次4Gy相比,在照射后12h凋亡率下降,表現(xiàn)為劑量分割效應(yīng)。2.3不同時間分割照射細胞后,細胞克隆形成率隨分次時間間隔延長逐漸增加。結(jié)論：1.在本實驗條件下,細胞P53脈沖振幅呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性,且與細胞種類明顯相關(guān),乳腺癌MCF-7肺癌A549成纖維細胞NFC。2.P53脈沖峰值時間點在腫瘤和正常細胞之間有顯著不同,前者為照射后3小時,后者為1小時；與細胞凋亡的峰值呈明顯的一致性。3.在本實驗采用的不同時間分割模式下(2Gy*2F),P53脈沖呈現(xiàn)明顯的衰減模式,且細胞凋亡比率和集落形成與細胞種類相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：P53脈沖 脈沖振幅 時間間隔 細胞周期阻滯 凋亡 劑量分割效應(yīng)
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.55
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 引言12-16
• 選題緣由12-13
• 研究背景13-14
• 研究意義14
• 研究內(nèi)容14-16
• 實驗材料16-18
• 實驗方法18-25
• 結(jié)果25-32
• 討論32-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-46
• 附錄46-47
• 綜述47-62
• 參考文獻58-62
• 致謝62-63
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文63

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本文編號：736418