本文關(guān)鍵詞：溶血磷脂酸抑制辣椒素受體介導(dǎo)膽汁淤積性瘙癢的研究

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【摘要】：瘙癢是一種能引起立即進(jìn)行搔抓欲望的主觀感覺(jué)。臨床上,能夠引起瘙癢的疾病有很多,包括皮膚病、癌癥和系統(tǒng)性疾病等,心理因素也可導(dǎo)致瘙癢的產(chǎn)生。瘙癢可引起失眠、抑郁,甚至自殺傾向,這種癥狀不可忽視。在國(guó)外,難以治愈的頑固性瘙癢甚至可以成為肝移植手術(shù)的重要指征。在我國(guó),瘙癢是肝膽系統(tǒng)疾病的常見(jiàn)和多發(fā)癥狀,但是膽汁淤積性肝病導(dǎo)致瘙癢的機(jī)制仍不清楚,如何治療膽汁淤積性疾病伴發(fā)的瘙癢也是臨床醫(yī)生的難題。因此,探明膽汁淤積性瘙癢的細(xì)胞和分子機(jī)制將為探索有效的臨床治療方法提供科學(xué)依據(jù)。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),膽汁淤積癥患者除了出現(xiàn)瘙癢外,還有一個(gè)特征即痛閾明顯升高,手術(shù)中嗎啡消耗量明顯減少。另外,研究者對(duì)膽汁淤積動(dòng)物模型和膽汁淤積性瘙癢患者的研究發(fā)現(xiàn),許多介質(zhì)和受體參與并導(dǎo)致了瘙癢行為的發(fā)生。最近的研究發(fā)現(xiàn),膽汁淤積癥患者血清中溶血磷脂酸(lysophosphatidic,LPA)和自分泌運(yùn)動(dòng)因子(autotaxin,ATX)的升高可能是引起瘙癢的的一個(gè)關(guān)鍵因素。目前發(fā)現(xiàn)血清ATX與瘙癢程度相關(guān),阻斷ATX的產(chǎn)生對(duì)減輕瘙癢程度有效應(yīng)。ATX將血清中的磷脂酰膽堿水解成膽堿基團(tuán)和LPA。LPA通過(guò)LPA受體發(fā)揮作用,研究表明,到目前為止,LPA受體至少有6個(gè)亞型。根據(jù)我們以前的工作發(fā)現(xiàn),LPA1受體亞型在正常小鼠和膽汁淤積小鼠的表達(dá)量都是最豐富的;另外,與正常小鼠相比,膽汁淤積小鼠的LPA4受體表達(dá)增加最為顯著。根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn),LPA1受體亞型在痛信號(hào)通路中起到重要作用。LPA4受體在膽汁淤積的情況下表達(dá)明顯增高,提示LPA4受體可能在癢信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的過(guò)程中發(fā)揮重要功能。因此,我們這個(gè)課題著重研究這兩種受體亞型在膽汁淤積性瘙癢中的作用。研究表明,癢神經(jīng)元是脊髓的背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)能表達(dá)胃泌素釋放肽(gastrin-releasing peptide,GRP)的中、小神經(jīng)元,其中樞突起投射到脊髓的后角中的I層,與后角I層中能特異性的表達(dá)胃泌素釋放肽受體的神經(jīng)元形成突觸聯(lián)系,從而能將來(lái)自外周的癢信號(hào)向中樞傳遞,因此可以將脊髓的背根神經(jīng)節(jié)(dosal root ganglia,DRG)中GRP表達(dá)陽(yáng)性的神經(jīng)元視作癢神經(jīng)元。TRPV1是重要的介導(dǎo)疼痛產(chǎn)生的離子通道之一,外周的痛信號(hào)通過(guò)痛信號(hào)通路向中樞傳遞。正常情況下,痛信號(hào)通路占優(yōu)勢(shì),痛信號(hào)通路發(fā)出側(cè)支,通過(guò)中間抑制性神經(jīng)元抑制癢信號(hào)的傳遞;但在膽汁淤積情況下出現(xiàn)痛行為下降而癢行為增多的現(xiàn)象。那么,膽汁淤積癥患者痛閾的升高是否與TRPV1表達(dá)和功能的降低有關(guān),從而成為瘙癢產(chǎn)生的機(jī)制之一是我們接下來(lái)要做的工作。因此,本課題通過(guò)膽總管結(jié)扎的方法建立小鼠膽汁淤積模型,利用“面頰模型”觀察小鼠的擦拭行為和搔抓行為,通過(guò)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方法觀察小鼠LPA1受體在膽汁淤積情況下的功能,以及l(fā)pa4受體在膽汁淤積病理情況下的功能。另外,我們應(yīng)用westernblot技術(shù)、免疫熒光染色技術(shù)及單細(xì)胞膜片鉗技術(shù)觀察trpv1在膽汁淤積情況下的功能的變化及l(fā)pa對(duì)trpv1的作用。通過(guò)trpv1通道在膽汁淤積情況下的功能和表達(dá)的變化,lpa1受體在膽汁淤積情況下的功能改變,以及l(fā)pa4受體在膽汁淤積病理情況下的功能的研究,明確膽汁淤積時(shí),lpa在瘙癢中發(fā)揮的作用及其發(fā)病機(jī)制。我們的研究不僅為探究lpa在慢性膽汁淤積性瘙癢的作用和機(jī)制提供新的科學(xué)依據(jù),也為尋找治療慢性頑固性膽汁淤積性瘙癢提供新的方法奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:一、膽汁淤積后lpa抑制了trpv1的功能。1、westernblot技術(shù)研究結(jié)果表明,膽汁淤積(bdl)小鼠trpv1的表達(dá)顯著降低。2、單細(xì)胞全細(xì)胞膜片鉗記錄結(jié)果表明,膽汁淤積后背根節(jié)癢神經(jīng)元trpv1激活誘發(fā)的內(nèi)向電流顯著降低。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,膽汁淤積后小鼠對(duì)trpv1激動(dòng)劑辣椒素(capsaicin)誘發(fā)的痛樣行為顯著減少,搔抓行為沒(méi)有明顯的變化,提示膽汁淤積后trpv1的功能降低。3、單細(xì)胞全細(xì)胞膜片鉗記錄結(jié)果表明,在膽汁淤積小鼠,lpa顯著抑制trpv1激動(dòng)劑辣椒素(capsaicin)誘發(fā)的內(nèi)向電流。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,小鼠尾靜脈注射lpa后,trpv1激動(dòng)劑辣椒素(capsaicin)引起的膽汁淤積小鼠痛樣反應(yīng)顯著降低,表明膽汁淤積情況下,lpa抑制了trpv1的功能。二、抑制lpa1受體功能,增強(qiáng)瘙癢反應(yīng)。1、免疫熒光染色技術(shù)研究結(jié)果表明,lpa1受體在癢神經(jīng)元上表達(dá),提示lpa1受體可能與瘙癢的發(fā)生有關(guān)。2、行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,對(duì)sham小鼠應(yīng)用lpa1受體特異性阻斷劑ki16425抑制lpa1受體,可減輕lpa誘發(fā)的疼痛反應(yīng),并增加搔抓反應(yīng),提示抑制lpa1受體的功能可增強(qiáng)瘙癢反應(yīng)。3、行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,對(duì)sham和bdl小鼠應(yīng)用lpa1受體相對(duì)選擇性激動(dòng)劑vpc31143(r)后,發(fā)現(xiàn)與sham組小鼠相比,膽汁淤積小鼠的痛樣行為顯著降低,提示膽汁淤積情況下,lpa1受體功能降低。三、激活lpa4受體功能,增強(qiáng)瘙癢反應(yīng)。1、行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在sham小鼠,lpa主要誘發(fā)疼痛反應(yīng);而lpa4受體選擇性激動(dòng)劑vpc31144(s)誘發(fā)搔抓反應(yīng)。2、行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在膽汁淤積小鼠,選擇性激活lpa4受體引起顯著的搔抓反應(yīng),提示LPA4受體可能介導(dǎo)瘙癢反應(yīng)。3、行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,LPA4受體選擇性激動(dòng)劑VPC31144(S)呈劑量依賴性誘發(fā)SHAM小鼠和BDL小鼠的搔抓反應(yīng)。綜上所述,我們的研究結(jié)果表明,在膽汁淤積的病理情況下,TRPV1的表達(dá)和功能下降,LPA抑制了TRPV1的功能;膽汁淤積后LPA1受體功能受到抑制;選擇性激活LPA4受體誘發(fā)搔抓反應(yīng)而不產(chǎn)生疼痛反應(yīng)。這些結(jié)果提示,在膽汁淤積的情況下,LPA可能通過(guò)抑制TRPV1的功能以及LPA1受體功能的降低從而導(dǎo)致痛閾升高成為瘙癢的機(jī)制之一;此外,LPA4受體功能的增強(qiáng)可能是LPA直接誘發(fā)瘙癢的機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：瘙癢 溶血磷脂酸 痛 膽汁淤積 溶血磷脂酸受體
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R441
【目錄】：

• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 縮略詞表13-14
• 一、前言14-16
• 二、材料與方法16-27
• （一）實(shí)驗(yàn)材料16-21
• 1、主要試劑16-17
• 2、實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備17-19
• 3、試劑配制19-21
• 4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物21
• （二）實(shí)驗(yàn)方法21-27
• 1、通過(guò)膽總管結(jié)扎(Bile duct ligation，BDL)建立膽汁淤積小鼠模型?21
• 2、區(qū)分痛和癢的"面頰模型"21-22
• 3、癢行為觀察22
• 4、蛋白質(zhì)的提取和Western blot技術(shù)22-23
• 5、小鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分離及培養(yǎng)23-24
• 6、電生理實(shí)驗(yàn)技術(shù)24-25
• 7. 免疫熒光染色技術(shù)25-26
• 8、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理26-27
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-38
• （一） 膽汁淤積后LPA抑制TRPV1功能27-31
• 1、膽汁淤積后TRPV1的表達(dá)降低27-28
• 2、膽汁淤積后TRPV1的功能降低28-30
• 3、LPA抑制TRPV1的功能30-31
• （二） 抑制LPA_1受體功能，增強(qiáng)瘙癢反應(yīng)31-34
• 1、LPA_1在癢神經(jīng)元的表達(dá)31-32
• 2、抑制LPA_1減輕疼痛反應(yīng)，增加搔抓行為32-34
• 3、膽汁淤積后LPA_1受體功能降低34
• （三） 激活LPA_4受體功能，增強(qiáng)瘙癢反應(yīng)34-38
• 1、在正常小鼠，LPA誘發(fā)小鼠疼痛反應(yīng)，，LPA_4受體選擇性激動(dòng)劑誘發(fā)搔抓反應(yīng)34-35
• 2、在膽汁淤積小鼠，選擇性激活LPA_4受體引起搔抓反應(yīng)35-36
• 3、LPA_4選擇性激動(dòng)劑VPC31144(S) 呈劑量依賴性誘發(fā)搔抓反應(yīng)36-38
• 四、討論38-43
• （一） 膽汁淤積后LPA抑制TRPV1功能38-40
• 1、膽汁淤積抑制TRPV1表達(dá)和功能38-39
• 2、LPA對(duì)TRPV1的抑制作用39-40
• （二） 膽汁淤積抑制LPA_1受體功能，增強(qiáng)瘙癢反應(yīng)40-41
• （三） 激活LPA_4受體功能，增強(qiáng)瘙癢反應(yīng)41-43
• 五、結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 綜述 感覺(jué)神經(jīng)元中的溶血磷脂酸及其信號(hào)通路47-63
• 參考文獻(xiàn)56-63
• 發(fā)表論文情況63-64
• 致謝64

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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8 楊杰;葉t

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