本文關(guān)鍵詞：變應(yīng)原sIgE的納米磁微�；瘜W(xué)發(fā)光測(cè)定方法研究

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【摘要】：目的建立用于臨床變應(yīng)原檢測(cè)的納米磁微�；瘜W(xué)發(fā)光法,并驗(yàn)證其靈敏度、準(zhǔn)確度、特異性、重復(fù)性以及穩(wěn)定性等性能；為臨床應(yīng)用提供一種準(zhǔn)確、快速、同時(shí)可針對(duì)多種變應(yīng)原檢測(cè)且適合我國(guó)患者應(yīng)用的檢測(cè)方法。方法采用流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果選擇臨床發(fā)病率高且病情較嚴(yán)重的變應(yīng)原作為本次研究對(duì)象；采用信噪比的評(píng)估方式確定化學(xué)發(fā)光底物液試劑的最佳濃度、合適的免疫反應(yīng)條件、合適粒徑的納米磁微粒和鏈霉親和素磁微粒最佳工作濃度以及生物素化變應(yīng)原最佳使用濃度以及HRP標(biāo)記鼠抗人IgE最佳工作濃度；根據(jù)WHO對(duì)變態(tài)反應(yīng)性疾病的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線合適的濃度范圍；根據(jù)“體外診斷試劑分析性能評(píng)估指導(dǎo)原則”對(duì)所建立方法的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)；并依據(jù)“體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則”對(duì)此方法進(jìn)行臨床評(píng)估。結(jié)果1化學(xué)發(fā)光反應(yīng)體系中：發(fā)光底物A液中魯米諾濃度為0.4mg/ml、發(fā)光底物B液中過氧化氫脲濃度為0.2mg/ml。此發(fā)光反應(yīng)體系對(duì)HRP的敏感性很高,可檢測(cè)到HRP的最小量為0.01ng/ml。在免疫反應(yīng)中,加入底物A液和B液后室溫避光反應(yīng)5分鐘檢測(cè),但在5-30分鐘內(nèi)檢測(cè)數(shù)值均有效。2研究課題采用二步法,且每一步最佳的免疫反應(yīng)條件為37℃孵育15分鐘。3納米磁微粒選擇粒徑100nm用于此研究課題效果最好,鏈霉親和素磁微粒的最佳工作濃度為2.5μg/ml；12種生物素化變應(yīng)原分別具有最佳使用濃度；鼠抗人IgE-HRP的最佳工作濃度為0.25μg/ml。4根據(jù)臨床需求研究課題選擇0.35～100IU/ml范圍作為標(biāo)準(zhǔn)曲線。5研究課題所建立的變應(yīng)原檢測(cè)方法的靈敏度、準(zhǔn)確度、特異性、重復(fù)性以及穩(wěn)定性均符合國(guó)家對(duì)體外診斷試劑的要求。6根據(jù)1202例臨床試驗(yàn)結(jié)果,所研究方法與目前Uni-CAP結(jié)果的診斷一致率在90%以上,而且通過本次臨床試驗(yàn)可知蒿屬花粉和戶塵滿是我國(guó)最主要的致敏變應(yīng)原。結(jié)論1建立了納米磁微�；瘜W(xué)發(fā)光法,且其靈敏度、準(zhǔn)確度、特異性、重復(fù)性及穩(wěn)定性均達(dá)到了設(shè)計(jì)的要求,符合國(guó)家規(guī)定,更能滿足臨床需求。2通過臨床試驗(yàn)可知所建立的納米磁微�；瘜W(xué)發(fā)光法可代替昂貴的國(guó)外進(jìn)口產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)臨床應(yīng)用；由于本研究完全使用國(guó)內(nèi)原料,更適合中國(guó)變態(tài)反應(yīng)疾病患者診斷,而且操作簡(jiǎn)單,價(jià)格低廉,反應(yīng)時(shí)間快。3通過臨床試驗(yàn)確定了蒿屬花粉和戶塵螨是我國(guó)變態(tài)反應(yīng)患者中發(fā)病率最高的變應(yīng)原。
【關(guān)鍵詞】：變態(tài)反應(yīng) 納米磁微粒 化學(xué)發(fā)光法 鏈霉親和素 生物素
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R593.1;R446.6
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 引言11-14
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究14-54
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 1.1.1 主要材料14-15
• 1.1.2 儀器設(shè)備15
• 1.2 研究方法15-27
• 1.2.1 生物素標(biāo)記變應(yīng)原及最佳工作濃度研究15-19
• 1.2.2 HRP標(biāo)記鼠抗人IgE最佳工作濃度研究19-20
• 1.2.3 納米磁微粒選擇及最佳工作濃度確定20-21
• 1.2.4 納米磁微�；瘜W(xué)發(fā)光法標(biāo)準(zhǔn)曲線確定21
• 1.2.5 化學(xué)發(fā)光免疫反應(yīng)體系研究21-23
• 1.2.6 免疫反應(yīng)條件研究23-24
• 1.2.7 納米磁微�；瘜W(xué)發(fā)光法性能評(píng)估24-25
• 1.2.8 納米磁微�；瘜W(xué)發(fā)光法臨床評(píng)估25-27
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-47
• 1.3.1 生物素標(biāo)記變應(yīng)原及最佳工作濃度結(jié)果27-30
• 1.3.2 鼠抗人IgE-HRP最佳工作濃度結(jié)果30
• 1.3.3 納米磁微粒選擇及最佳工作濃度實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-31
• 1.3.4 納米磁微�；瘜W(xué)發(fā)光法標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-35
• 1.3.5 化學(xué)發(fā)光免疫反應(yīng)體系研究結(jié)果35-38
• 1.3.6 免疫反應(yīng)溫度和時(shí)間研究結(jié)果38-39
• 1.3.7 性能評(píng)估實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-45
• 1.3.8 臨床樣本統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果45-47
• 1.4 討論47-49
• 1.5 結(jié)論49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 第2章 綜述 變應(yīng)原檢測(cè)方法的研究進(jìn)展54-66
• 2.1 變態(tài)反應(yīng)概述54-56
• 2.1.1 變態(tài)反應(yīng)簡(jiǎn)介54
• 2.1.2 變應(yīng)原簡(jiǎn)介54-55
• 2.1.3 Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)致病機(jī)制55-56
• 2.1.4 Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)引起疾病56
• 2.2 目前國(guó)內(nèi)外變態(tài)反應(yīng)性疾病的研究進(jìn)展56-60
• 2.2.1 體內(nèi)檢測(cè)方法57-58
• 2.2.2 體外檢測(cè)方法58-59
• 2.2.3 目前特異性IgE產(chǎn)品應(yīng)用近況59-60
• 2.3 變應(yīng)原sIgE納米磁微�；瘜W(xué)發(fā)光法概述60-62
• 2.3.1 生物素親和素系統(tǒng)簡(jiǎn)介60
• 2.3.2 納米磁微粒簡(jiǎn)介60-61
• 2.3.3 化學(xué)發(fā)光簡(jiǎn)介61
• 2.3.4 本研究?jī)?yōu)勢(shì)61-62
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 結(jié)論66-67
• 附錄A 檢測(cè)項(xiàng)目中文名稱與編碼對(duì)照表67-68
• 附錄B 溶液配制68-70
• 附錄C 臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)匯總70-72
• 致謝72-73
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介73-74
• 作者簡(jiǎn)介74-75
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集75

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5 曹長(zhǎng)乾;蔡W，

本文編號(hào)：666493