目的:流式細(xì)胞儀結(jié)合熒光標(biāo)記抗體對(duì)細(xì)胞表面低豐度蛋白的檢測(cè)不如人意。微流控芯片液滴與細(xì)胞尺寸相近,特別適合單細(xì)胞檢測(cè)分析。本工作以微流控芯片液滴為技術(shù)平臺(tái),應(yīng)用酶聯(lián)放大原理,在單細(xì)胞水平上檢測(cè)細(xì)胞表面蛋白的表達(dá)。方法:本實(shí)驗(yàn)屬于方法學(xué)研究,將本文建立方法與已有方法進(jìn)行分析比較,確定方法的可靠性。1、選擇合適的標(biāo)記酶與熒光底物,本實(shí)驗(yàn)選用堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP),熒光底物為熒光素二磷酸酯四銨鹽(Fluorescein diphosphate,tetraammonium salt,FDP)。2、選擇表達(dá)上皮細(xì)胞粘附分子(Epithelial cell adhesion molecule,Ep CAM)的A549細(xì)胞,用Anti-Ep CAM抗體(Biotin標(biāo)記)標(biāo)記,再用標(biāo)記有堿性磷酸酶的鏈霉親和素(Alkaline phosphatase-Streptavidin,ALP-SA)標(biāo)記,將所得細(xì)胞懸液與熒光底物FDP溶液同時(shí)包入液滴,在熒光顯微鏡觀察統(tǒng)計(jì)包含細(xì)胞且有熒光信號(hào)的液滴數(shù)與包裹細(xì)胞的液滴總數(shù),計(jì)算表達(dá)Ep CAM的細(xì)胞比例。3、將A549細(xì)胞...

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1芯片設(shè)計(jì)示意圖設(shè)計(jì)需注意：通道直徑為80μm，液滴生成夾流區(qū)與彎曲通道直徑下游直徑為80μm。設(shè)計(jì)彎曲結(jié)構(gòu)是為了增強(qiáng)液滴內(nèi)部的混合，反應(yīng)，這種混合需要液滴和側(cè)向通道相接觸，通道太寬液滴就觸，無(wú)法起到增強(qiáng)液滴內(nèi)部混合的效果。板制作洗玻璃基片。取干凈基片于燒杯中，加入98....

圖2成型的雙水相通道芯片芯片內(nèi)注入油相與水相反應(yīng)液，調(diào)節(jié)注40μL/min。先打開(kāi)油相排盡油相通道內(nèi)空流區(qū)能穩(wěn)定生成大小均勻的液滴時(shí)收集速的水相1與水相2溶液先在兩水相相相交的夾流區(qū)生成液滴，因此得到的液滴，二者能獨(dú)立在液滴內(nèi)部進(jìn)行反應(yīng)。

圖2成型的雙水相通道芯片芯片內(nèi)注入油相與水相反應(yīng)液，調(diào)節(jié)注40μL/min。先打開(kāi)油相排盡油相通道內(nèi)空流區(qū)能穩(wěn)定生成大小均勻的液滴時(shí)收集速的水相1與水相2溶液先在兩水相相相交的夾流區(qū)生成液滴，因此得到的液滴，二者能獨(dú)立在液滴內(nèi)部進(jìn)行反應(yīng)。

圖4HRP與TMB溶液反應(yīng)物酶HRP溶液稀釋103、104、105、106、107倍與相生成液滴，再進(jìn)行反應(yīng)的結(jié)果，見(jiàn)圖5。圖5HRP與TMB作為水相生成液滴后反應(yīng)RP稀釋103、106倍溶液生成液滴反應(yīng)的結(jié)果置于B

本文編號(hào)：4008799