本文關(guān)鍵詞：MALDI-TOF MS和16S rRNA序列分析在快速鑒定臨床細(xì)菌中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分MALDI-TOF MS和16S r RNA序列分析在快速鑒定臨床疑難細(xì)菌中的應(yīng)用目的評價MALDI-TOF MS和16S r RNA序列分析在快速鑒定臨床少見或疑難細(xì)菌中的應(yīng)用,提高臨床少見或疑難細(xì)菌鑒定的準(zhǔn)確性,縮短細(xì)菌鑒定時間。方法收集2014年1月~2015年12月安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院分離自血液、痰液、分泌物、胸水及尿液等標(biāo)本的臨床少見或疑難細(xì)菌90株,以16S r RNA序列分析為金標(biāo)準(zhǔn),比較MALDI-TOF MS與Vitek2 Compact鑒定系統(tǒng)鑒定的準(zhǔn)確性及三種方法的鑒定時間。結(jié)果90株臨床少見或疑難細(xì)菌中,MALDI-TOF MS將78株(86.7%)鑒定到種水平,9株(10.0%)鑒定到屬水平,3株(3.3%)未能鑒定;Vitek2 Compact鑒定系統(tǒng)將61株(67.8%)鑒定到種水平,11株(12.2%)鑒定到屬水平,18株(20.0%)未能鑒定;90株均擴增到16S r RNA目的基因片段并成功測序,86株(95.6%)鑒定到種水平,4株(4.4%)鑒定到屬水平。以16S r RNA序列分析為金標(biāo)準(zhǔn),MALDI-TOF MS和Vitek2 Compact鑒定系統(tǒng)正確鑒定到種水平準(zhǔn)確性分別為85.6%(77/90)和57.8%(52/90),兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=90,P=0.000)。Vitek2Compact系統(tǒng)與MALDI-TOF MS鑒定結(jié)果在屬水平一致的有64株(71.1%),不一致的有26株(28.9%)。MALDI-TOF MS、Vitek2 Compact和16S r RNA序列分析鑒定所需時間分別約為10min/株、8~12 h/株、10 h/株。結(jié)論與Vitek2 Compact鑒定系統(tǒng)相比,MALDI-TOF MS和16S r RNA序列分析對臨床少見或疑難細(xì)菌具有較好的鑒定準(zhǔn)確性。MALDI-TOF MS鑒定時間顯著縮短,可以作為臨床微生物實驗室細(xì)菌鑒定的重要方法之一。第二部分MALDI-TOF MS和熒光定量PCR在快速鑒定腹膜透析相關(guān)性腹膜炎細(xì)菌中的應(yīng)用目的評價菌膜MALDI-TOF MS鑒定法和熒光定量PCR在快速鑒定腹膜透析相關(guān)性腹膜炎細(xì)菌中的應(yīng)用價值。方法收集安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014年4月~2015年8月收治的CAPD腹膜炎患者80例,留取患者初入院經(jīng)驗性抗生素使用之前第一袋腹透液,采取以下方法:(1)將腹透液接種血培養(yǎng)瓶中,置于血培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng),待血培養(yǎng)瓶報警,轉(zhuǎn)種三份哥倫比亞血液瓊脂平板,第一份培養(yǎng)18~24h后,進(jìn)行Vitek2 Compact系統(tǒng)鑒定;第二份培養(yǎng)8h后取菌膜進(jìn)行MALDI-TOF MS鑒定;第三份培養(yǎng)24 h后進(jìn)行MALDI-TOF MS鑒定做為菌膜MALDI-TOF MS鑒定方法的陽性對照。(2)直接提取濃縮腹透液標(biāo)本DNA,應(yīng)用基于16S r RNA基因的熒光定量PCR進(jìn)行細(xì)菌鑒定。比較常規(guī)血培養(yǎng)方法、菌膜MALDI-TOF MS鑒定法和熒光定量PCR從標(biāo)本接收到完成鑒定結(jié)果所需時間。結(jié)果(1)80例腹透液經(jīng)過血培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)后,55例陽性報警,使用Vitek 2 Compact系統(tǒng)能將55例均鑒定到種水平,陽性率為68.8%(55/80);血平板培養(yǎng)8h后,55例標(biāo)本均長出菌膜,MALDI-OF MS將50例成功鑒定到種水平,5例無鑒定結(jié)果,菌膜鑒定成功率為90.9%(50/55)。其中革蘭陽性菌菌膜鑒定成功率為89.7%(35/39),革蘭陰性菌菌膜鑒定成功率為93.8%(15/16)。培養(yǎng)24 h后進(jìn)行MALDI-TOF MS鑒定做為陽性對照,其中55例菌膜均成功鑒定到種水平,鑒定結(jié)果與Vitek2 Compact系統(tǒng)結(jié)果一致。(2)熒光定量PCR鑒定腹透液標(biāo)本陽性率為86.3%(69/80),與腹透液血培養(yǎng)陽性率68.8%(55/80)相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=76,P=0.001)。熒光定量PCR與腹透液血培養(yǎng)鑒定法一致性為82.5%(66/80)。腹透液血培養(yǎng)常規(guī)鑒定法、培養(yǎng)8h菌膜MALDI-TOF MS鑒定方法和熒光定量PCR從標(biāo)本接收到完成鑒定分別需要24~48h/例,10~20h/例,2~3h/例。結(jié)論腹透液血培養(yǎng)后,接種血平板培養(yǎng)8h,刮取菌膜進(jìn)行MALDI-TOF MS鑒定,該方法具有操作簡單、快速且準(zhǔn)確的特點。熒光定量PCR方法與常規(guī)檢測方法相比,可以提高細(xì)菌檢出率,檢測腹膜炎細(xì)菌具有快速、準(zhǔn)確、靈敏的特點,適用于腹膜透析相關(guān)性腹膜炎病因的快速篩查與及時診斷。兩種方法均是實驗室鑒定腹膜炎細(xì)菌的先進(jìn)、快速而準(zhǔn)確的選擇,各有利弊,研究者要根據(jù)實際需要權(quán)衡利弊。
【關(guān)鍵詞】：MALDI-TOF MS 16S rRNA 基因 序列分析 細(xì)菌 鑒定 16Sr RNA 基因 MALDI-TOF MS 序列分析 腹膜透析 腹膜炎 熒光定量 PCR
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R446.5
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-16
• 第一部分 MALDI-TOF MS和 16S rRNA序列分析在快速鑒定臨床疑難細(xì)菌中的應(yīng)用16-33
• 引言16
• 1 材料與方法16-21
• 2 結(jié)果21-28
• 3 討論28-32
• 4 結(jié)論32-33
• 第二部分 MALDI-TOF MS和熒光定量PCR在快速鑒定腹膜透析相關(guān)性腹膜炎細(xì)菌中的應(yīng)用33-50
• 引言33-34
• 1 材料與方法34-39
• 2 結(jié)果39-46
• 3 討論46-49
• 4 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 附一 個人簡歷55-57
• 附二 致謝57-58
• 附三（綜述）58-66
• 參考文獻(xiàn)62-66

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