本文關(guān)鍵詞：基于鏈置換和Y型納米結(jié)構(gòu)的MicroRNA-377電化學(xué)傳感檢測(cè)新策略　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：臨床樣本復(fù)雜的生物化學(xué)性質(zhì),目標(biāo)檢測(cè)物的低豐度對(duì)檢驗(yàn)技術(shù)提出了越來越高的要求。而電化學(xué)傳感器由于靈敏性高、響應(yīng)快、成本低廉、操作簡(jiǎn)單、可用于微量分析等優(yōu)點(diǎn)極大地適應(yīng)了臨床診斷和藥物檢測(cè)分析的發(fā)展。近年來,研究者們基于電化學(xué)傳感平臺(tái)并結(jié)合各種高效放大策略實(shí)現(xiàn)了對(duì)mi RNA,的檢測(cè)。其中納米結(jié)構(gòu)自組裝所特有的結(jié)構(gòu)、光學(xué)、電學(xué)等性質(zhì)為新型納米電化學(xué)傳感研究提供了新的契機(jī)。同時(shí),隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)得到迅速發(fā)展。本研究基于電化學(xué)平臺(tái)上結(jié)合鏈置換與納米自組裝進(jìn)行mi RNA-377檢測(cè),主要研究?jī)?nèi)容分為兩部分:1.針對(duì)靶物質(zhì)的鏈置換反應(yīng)。模板鏈主要包括三個(gè)區(qū)域:靶物質(zhì)識(shí)別區(qū)域,剪切酶識(shí)別區(qū)域,下游引物區(qū)域,在有剪切酶識(shí)別位點(diǎn)的模板存在條件下,靶物質(zhì)能互補(bǔ)性地與模板鏈進(jìn)行特異性結(jié)合,并在KF聚合酶,d NTP存在的條件下進(jìn)行不斷的聚合,產(chǎn)生的雙鏈暴露出酶切位點(diǎn),并在剪切酶的作用下進(jìn)行剪切,不斷循環(huán)產(chǎn)生大量用于連接TWJ納米結(jié)構(gòu)的連接物。連接物可以分別與捕獲探針和Y型納米結(jié)構(gòu)雜交使兩者結(jié)合在一起。以此進(jìn)行信號(hào)的轉(zhuǎn)移和輸出。2.Y型納米結(jié)構(gòu)自組裝的形成與電化學(xué)傳感檢測(cè)。將三種各自互補(bǔ)配對(duì)的單鏈置于適當(dāng)?shù)碾x子濃度的溶液中,鏈與鏈之間通過雜交結(jié)合形成穩(wěn)定的Y型納米結(jié)構(gòu),其中一條鏈的未互補(bǔ)結(jié)合區(qū)域與鏈置換反應(yīng)產(chǎn)生的連接產(chǎn)物互補(bǔ)并連接到捕獲探針上。通過對(duì)Y型納米結(jié)構(gòu)的生物素修飾,與連接有堿性磷酸酶的鏈霉親和素相結(jié)合,催化底物α-萘酚反應(yīng),以此獲得電化學(xué)信號(hào)。這種電化學(xué)傳感策略對(duì)mi RNA-377的線性檢測(cè)范圍在1 f M到1 n M之間,檢測(cè)限為0.68 f M,通過實(shí)驗(yàn)對(duì)比也獲得了較好的特異性和重復(fù)性,再現(xiàn)性及穩(wěn)定性�；阪溨脫Q和Y型納米結(jié)構(gòu)的電化學(xué)傳感器將兩種放大技術(shù)結(jié)合,實(shí)現(xiàn)了對(duì)靶物質(zhì)的高靈敏高特異性檢測(cè),并成功的將其應(yīng)用于實(shí)際樣本的檢測(cè),為醫(yī)藥領(lǐng)域與早期診斷應(yīng)用方面高靈敏檢測(cè)mi RNA提供了新的技術(shù)支持。
[Abstract]:In recent years , the present study provides a new opportunity for the detection of mi - RNA . In recent years , with the development of molecular biology , the molecular biology has been successfully developed .

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R446

【參考文獻(xiàn)】

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1 ;Identification of circulating miRNA biomarkers based on global quantitative real-time PCR profiling[J];Journal of Animal Science and Biotechnology;2012年02期

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本文編號(hào)：1378971