【摘要】：基于β-環(huán)糊精(β-CD)主客體競(jìng)爭(zhēng)模式,構(gòu)建了開關(guān)型凝血酶適配體電化學(xué)傳感器。將末端修飾了二茂鐵(Fc)的核酸適配體通過(guò)與β-CD的主客體識(shí)別固定在金電極表面,當(dāng)凝血酶存在時(shí),適配體由原來(lái)的直立線狀構(gòu)型變?yōu)?G-四鏈體",遠(yuǎn)離電極表面,適配體探針的氧化還原電流強(qiáng)度減小,即"Signal-off"。利用此效應(yīng)對(duì)凝血酶進(jìn)行了靈敏檢測(cè),結(jié)果表明,在5.0×10~(-13)~5.0×10~(-9)mol/L濃度范圍內(nèi),凝血酶的濃度與電化學(xué)響應(yīng)信號(hào)呈良好的線性關(guān)系,檢出限為2.0×10~(-13)mol/L(3σ)。與其它蛋白分子相比,本方法對(duì)凝血酶蛋白的檢測(cè)具有高特異性。本傳感器構(gòu)建簡(jiǎn)單,再生性好,為生物血清樣本中凝血酶的實(shí)時(shí)高效檢測(cè)提供了方法。
【圖文】：

形的中空?qǐng)A筒腔體結(jié)構(gòu)，內(nèi)部是疏水空腔而外部是親水環(huán)形。其特殊的腔體結(jié)構(gòu)使得環(huán)糊精具有突出的識(shí)別和包絡(luò)客體分子的能力，如有機(jī)分子、無(wú)機(jī)離子等，這種主客體間的識(shí)別作用能使分子形成良好組裝體系，在醫(yī)藥、分析、化工、環(huán)保等研究領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注［25］。本研究利用β-CD與Fc的主客體識(shí)別原理，，構(gòu)建了一種“Signal-off”的開關(guān)型適配體傳感器，用于凝血酶的檢測(cè)。3'標(biāo)記Fc的抗凝血酶適配體利用β-CD與Fc客體的識(shí)別作用組裝到修飾β-CD的電極表面(實(shí)驗(yàn)原理見圖1)，在凝血酶不存在時(shí)，由于Fc在電極表面發(fā)生氧化還原給出電化學(xué)響應(yīng)信號(hào);凝血酶存在時(shí)，與適配體特異性結(jié)合，適配ThrombinDPVe-茁鄄CD3′鄄Fc鄄Anti鄄thrombinaptamerDPVAuAue-圖1基于分子識(shí)別機(jī)理的凝血酶適配體電化學(xué)傳感器示意圖Fig．1Schematicillustrationofthrombinaptamerelectro-chemicalsensorbasedonprincipalofmolecularrecognition體構(gòu)型發(fā)生改變，離開電極表面，電子傳遞受阻，信號(hào)減弱。本方法中，適配體與凝血酶結(jié)合后標(biāo)記物直接脫離電極表面，檢測(cè)信號(hào)不受適配體鏈長(zhǎng)度的影響，因此靈敏度高。2實(shí)驗(yàn)部分2．1儀器與試劑AUTOLAB電化學(xué)工作站(瑞士萬(wàn)通儀器有限公司);采用三電極體系:金電極(直徑1．0mm)為工作電極，Ag/AgCl電極(飽和KCl)為參比電極，鉑電極為對(duì)電極;400MHz核磁共振波譜儀(瑞士Bruker科技有限公司)。β-CD(Sigma-Aldrich公司);凝血酶、牛血清白蛋白(BSA)、溶血酶(生工生物工程(上海)股份有限公司);核酸適配體序列:3'-Fc-GGTTGGTGTGGTTGG-5'(大連寶生物工程有限公司);所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為超純水(美國(guó)Millipore公司超純水系統(tǒng))制備。2．2SH-β-CD的合成參照文獻(xiàn)［26］，將β-CD(1．10g，1．0mmoL)加入含三苯基

SH-β-CD的1HNMＲ圖(400MHz，DMSO-d6)

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本文編號(hào)：2580011