發(fā)布時(shí)間：2020-02-03 17:47

【摘要】：制備了一種可用于腺苷檢測(cè)的適體生物傳感器,以羧基磁性微球?yàn)檩d體,在其表面組裝腺苷適體與地高辛修飾之腺苷適體互補(bǔ)的核酸短鏈,先加入一定濃度的腺苷,再連接抗地高辛的堿性磷酸酯酶,用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)發(fā)光值,根據(jù)腺苷加入前后化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)定量檢測(cè)腺苷。實(shí)驗(yàn)考察了羧基磁性微球用量、氨基修飾的腺苷適體用量、地高辛修飾的核酸短鏈用量及抗地高辛的堿性磷酸酯酶用量對(duì)體系組裝和腺苷識(shí)別的影響。結(jié)果顯示,優(yōu)化條件下,在1.0×10~(-7)~1.0×10~(-3)mol/L范圍內(nèi),腺苷濃度的對(duì)數(shù)與發(fā)光信號(hào)呈線性關(guān)系(r~2=0.976 9),定量下限為1.0×10~(-7)mol/L。與其他核苷相比,腺苷的選擇特異性更好,且在稀釋血清中適體對(duì)腺苷有很好的特異性識(shí)別能力。
【圖文】：

第4期嚴(yán)喜鸞等:基于適體生物傳感器的堿性磷酸酯酶化學(xué)發(fā)光檢測(cè)腺苷567也為進(jìn)一步優(yōu)化適體用量以及報(bào)告序列用量研究奠定了基矗隨后詳細(xì)考察了反應(yīng)所用羧基磁性微球、氨基修飾的適體、報(bào)告序列以及抗地高辛－ALP的量對(duì)CL信號(hào)的影響。圖1腺苷的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)示意圖Fig.1Schematicpresentationofadenosinechemiluminescentanalyticalprotocol2.1.1羧基磁性微球的用量考察了羧基磁性微球用量(20，30，40，50，60，80μg)對(duì)CL信號(hào)值的影響。結(jié)果顯示，羧基磁性微球用量為40μg時(shí)，CL信號(hào)值最大，之后信號(hào)隨其用量的增加反而下降，這是由于過(guò)量的磁性微球雖然為氨基適體增加了連接位點(diǎn)，但磁性微球量的增多對(duì)發(fā)光信號(hào)有吸收，反而使CL信號(hào)值降低，故實(shí)驗(yàn)選擇40μg為羧基磁性微球的最佳用量。圖2氨基修飾的腺苷適體量的優(yōu)化選擇(n=3)Fig.2Optimalselectionofamountofaminomodifiedadenosineaptamer(n=3)2.1.2腺苷適體的用量考察了不同的氨基修飾腺苷適體用量(1.0，1.5，3.0，8.0，10pmol)對(duì)CL信號(hào)值的影響，結(jié)果如圖2所示。當(dāng)腺苷適體用量為1.5pmol時(shí)，CL信號(hào)值最大，之后隨其用量增加反而下降，這是由于隨著氨基適體量的增加，羧基磁性微球上連接的適體也增多，增大了空間位阻，導(dǎo)致結(jié)合的報(bào)告序列量減少，降低了CL信號(hào)值，故實(shí)驗(yàn)選擇1.5pmol為腺苷適體的最佳用量。2.1.3報(bào)告序列的用量考察了報(bào)告序列用量(20，30，40，60，80fmol)對(duì)CL信號(hào)值的影響，結(jié)果顯示，在10～60fmol時(shí)，CL信號(hào)隨報(bào)告序列用量的增加而急劇增加，60fmol時(shí)CL信號(hào)值達(dá)到最高值，之后隨著報(bào)告序列用量的增加，CL信號(hào)反而下降。這是由于適體量是固定的，當(dāng)報(bào)告序列的用量達(dá)到與適體結(jié)合的飽和點(diǎn)后，過(guò)多的報(bào)告序列反而會(huì)影響適體與報(bào)告序列的結(jié)合，導(dǎo)致CL信號(hào)值下降，故實(shí)驗(yàn)

頡?氨基修飾的適體、報(bào)告序列以及抗地高辛－ALP的量對(duì)CL信號(hào)的影響。圖1腺苷的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)示意圖Fig.1Schematicpresentationofadenosinechemiluminescentanalyticalprotocol2.1.1羧基磁性微球的用量考察了羧基磁性微球用量(20，30，40，50，60，，80μg)對(duì)CL信號(hào)值的影響。結(jié)果顯示，羧基磁性微球用量為40μg時(shí)，CL信號(hào)值最大，之后信號(hào)隨其用量的增加反而下降，這是由于過(guò)量的磁性微球雖然為氨基適體增加了連接位點(diǎn)，但磁性微球量的增多對(duì)發(fā)光信號(hào)有吸收，反而使CL信號(hào)值降低，故實(shí)驗(yàn)選擇40μg為羧基磁性微球的最佳用量。圖2氨基修飾的腺苷適體量的優(yōu)化選擇(n=3)Fig.2Optimalselectionofamountofaminomodifiedadenosineaptamer(n=3)2.1.2腺苷適體的用量考察了不同的氨基修飾腺苷適體用量(1.0，1.5，3.0，8.0，10pmol)對(duì)CL信號(hào)值的影響，結(jié)果如圖2所示。當(dāng)腺苷適體用量為1.5pmol時(shí)，CL信號(hào)值最大，之后隨其用量增加反而下降，這是由于隨著氨基適體量的增加，羧基磁性微球上連接的適體也增多，增大了空間位阻，導(dǎo)致結(jié)合的報(bào)告序列量減少，降低了CL信號(hào)值，故實(shí)驗(yàn)選擇1.5pmol為腺苷適體的最佳用量。2.1.3報(bào)告序列的用量考察了報(bào)告序列用量(20，30，40，60，80fmol)對(duì)CL信號(hào)值的影響，結(jié)果顯示，在10～60fmol時(shí)，CL信號(hào)隨報(bào)告序列用量的增加而急劇增加，60fmol時(shí)CL信號(hào)值達(dá)到最高值，之后隨著報(bào)告序列用量的增加，CL信號(hào)反而下降。這是由于適體量是固定的，當(dāng)報(bào)告序列的用量達(dá)到與適體結(jié)合的飽和點(diǎn)后，過(guò)多的報(bào)告序列反而會(huì)影響適體與報(bào)告序列的結(jié)合，導(dǎo)致CL信號(hào)值下降，故實(shí)驗(yàn)選擇60fmol為報(bào)告序列的最佳用量。2.1.4抗地高辛－ALP酶的稀釋倍數(shù)考察了不同稀釋倍數(shù)的抗地高辛－ALP酶的用量(1∶3000～1∶12000)對(duì)CL信號(hào)值的影響，結(jié)果顯示

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;第十屆世界生物傳感器大會(huì)Biosensors'2008暨納米生物傳感器國(guó)際專題研討會(huì) 轉(zhuǎn)發(fā)第一輪通知及論文征稿[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2007年09期

2 Gronow M;張蔭碧;;生物傳感器[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));1985年06期

3 方蘇華;工業(yè)設(shè)備生物傳感器的研制[J];生物工程進(jìn)展;1987年01期

4 戴毅;;測(cè)量血液和人尿中物質(zhì)的生物傳感器[J];世界研究與開發(fā)報(bào)導(dǎo);1987年10期

5 李向明;彭志英;;生物傳感器及其應(yīng)用前景[J];生命的化學(xué)(中國(guó)生物化學(xué)會(huì)通訊);1988年02期

6 J.H.T.Luong;孫雷心;;生物傳感器的開發(fā)和應(yīng)用[J];生物技術(shù)通報(bào);1989年12期

7 郭麗華;日本研制生物傳感器的最新動(dòng)向[J];生物工程進(jìn)展;1989年04期

8 霍立浦;;國(guó)外生物傳感器發(fā)展動(dòng)向[J];國(guó)際科技交流;1989年10期

9 甘平;生物傳感器在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1990年02期

10 楊源;;開發(fā)測(cè)兒茶酚胺的生物傳感器[J];中國(guó)醫(yī)療器械雜志;1990年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 趙宇先;石慶蘭;;生物傳感器的應(yīng)用研究[A];農(nóng)業(yè)工程科技創(chuàng)新與建設(shè)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)——2005年中國(guó)農(nóng)業(yè)工程學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集第三分冊(cè)[C];2005年

2 溫珍海;次素琴;李景虹;;基于陣列鉑-碳納米管復(fù)合物的葡萄糖生物傳感器[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十五屆全國(guó)有機(jī)分析及生物分析學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

3 曾紅娟;龐曉峰;蔣亞?wèn)|;于軍勝;;電子聚合物固定化的膽堿氧化酶光學(xué)生物傳感器的研究[A];中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程進(jìn)展——2007中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程聯(lián)合學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2007年

4 董之海;劉威;劉娟;劉雁勇;李艷軍;;基因工程乙酰膽堿酯酶及其在生物傳感器中的應(yīng)用[A];第七屆全國(guó)酶學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2004年

5 周健;;蛋白質(zhì)界面吸附的分子模擬研究[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第26屆學(xué)術(shù)年會(huì)膠體與界面化學(xué)分會(huì)場(chǎng)論文集[C];2008年

6 舒勁松;尹文慶;;生物傳感器在農(nóng)業(yè)生物信息測(cè)量中的應(yīng)用[A];農(nóng)業(yè)工程科技創(chuàng)新與建設(shè)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)——2005年中國(guó)農(nóng)業(yè)工程學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集第三分冊(cè)[C];2005年

7 李杜娟;王劍平;;快速檢測(cè)大腸桿菌O157:H7的電化學(xué)阻抗免疫生物傳感器[A];2007年中國(guó)農(nóng)業(yè)工程學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2007年

8 汪慶祥;高鳳;李文琦;焦奎;;殼聚糖鎘配合物對(duì)單雙鏈DNA的識(shí)別作用及其作為雜交指示劑的應(yīng)用[A];第六屆全國(guó)化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

9 蘇延磊;李津如;江龍;;糖酯、磷脂和聚聯(lián)乙炔混合囊泡檢測(cè)大腸桿菌[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十屆膠體與界面化學(xué)會(huì)議論文摘要集[C];2004年

10 劉揚(yáng);范紅;陳超;顧海鷹;;基于“血紅蛋白/金膠-乙二胺修飾電極”的過(guò)氧化氫生物傳感器[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前5條

1 何屹;新生物傳感器可觀測(cè)細(xì)菌生長(zhǎng)[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

2 記者 何永晉;烏生物傳感器研究碩果累累[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

3 張佳星;“火眼金睛”窺測(cè)基因調(diào)控[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

4 陰慧娟;檢測(cè)用新型生物傳感器[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

5 段煦;中科院理化所納米增強(qiáng)酶生物傳感器原理研究獲進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 張迪;幾種生物傳感器表面修飾技術(shù)研究及微型化制備初探[D];南開大學(xué);2014年

2 趙紫霞;用于生物傳感器的氧化還原酶蛋白固定化技術(shù)研究[D];南開大學(xué);2009年

3 孟憲偉;納米顆粒增強(qiáng)的葡萄糖生物傳感器[D];四川大學(xué);2001年

4 張瑩;表面等離子體子共振生物傳感技術(shù)檢測(cè)生物分子的研究[D];浙江大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王默;microRNA的電化學(xué)檢測(cè)方法的建立及其應(yīng)用的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 明華蜜;SPR生物傳感器用于檢測(cè)兩種禽類病毒和轉(zhuǎn)基因蛋白Cry1Ab的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 王明偉;誘導(dǎo)大腸桿菌產(chǎn)甲醛脫氫酶用于生物傳感器的研究[D];天津科技大學(xué);2013年

4 路勇;可控納米間隙生物傳感器用于生物大分子的電化學(xué)靈敏檢測(cè)[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2015年

5 顧萬(wàn)通;城市河流底泥污染物指示性微生物研究及生物傳感器的構(gòu)建[D];哈爾濱師范大學(xué);2016年

6 趙倩;基于生物傳感器的MERS冠狀病毒蛋白酶檢測(cè)模型及其應(yīng)用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

7 章溪;幾種DNA生物傳感器用于微小RNA和真菌毒素的檢測(cè)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

8 梁強(qiáng);人工構(gòu)建一組可激活的啟動(dòng)子以用于在釀酒酵母細(xì)胞中設(shè)計(jì)生物傳感器[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2016年

9 鄧永春;基于電解質(zhì)門控有機(jī)晶體管結(jié)構(gòu)生物傳感器的研究[D];深圳大學(xué);2016年

10 楊鋒;檢測(cè)汞的全細(xì)胞生物傳感器構(gòu)建及其應(yīng)用[D];上海交通大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2576079