【摘要】：糖尿病是一組以高血糖和糖尿為特征的代謝性疾病。糖尿病患者長期存在的高血糖癥狀會導致各種組織,特別是眼、腎、心臟、血管、神經(jīng)的慢性損害及功能障礙。根據(jù)ADA(美國糖尿病協(xié)會)的數(shù)據(jù),中國有1.14億糖尿病患者和1.4億糖尿病前期人群。1.14億,接近于中國成年人總數(shù)的十分之一,這個數(shù)字同樣占據(jù)了全球糖尿病患者總?cè)藬?shù)的三分之一。自1969年Rahbar首次發(fā)現(xiàn)糖尿病患者的糖化血紅蛋白升高,在余后的四十余年中,糖化血紅蛋白(HbA1c)逐漸成為糖尿病診斷和治療中的一個不可或缺的監(jiān)測指標。目前,臨床上檢測糖化血紅蛋白的多種方法無法同時滿足床旁診斷(POCT)的需求和準確性的要求。因此,需要一種快速且準確的針對HbA1c的檢測方法。本論文主要研究內(nèi)容如下:(1)根據(jù)硼酸親和層析柱法檢測糖化血紅蛋白的原理,設計并構建了一種在側(cè)向?qū)游鲈嚰埳系挠H和層析探針。以牛血清白蛋白(BSA)為載體,通過交聯(lián)的方法將3-氨基苯硼酸與BSA偶聯(lián),構建糖化血紅蛋白親和層析探針。以親和層析探針作為層析試紙中的檢測線,根據(jù)檢測線上糖化血紅蛋白的顏色進行半定量檢測。硼酸親和層析試紙可以區(qū)分4.7%~9.7%的HbA1c全血樣本,且檢測結果一致性較好。(2)以羧基聚苯乙烯微球為原料,通過溶脹、化學偶聯(lián)、靜電吸附等方法,制備熒光微球,包覆核心鏈霉親和素并偶聯(lián)抗體,制備出一種穩(wěn)定、熒光信號強的熒光免疫微球。根據(jù)熒光免疫層析法的基本原理,以該熒光免疫微球為載體,組裝并構建熒光免疫層析試紙條,利用熒光免疫定量分析儀進行定量檢測。糖化血紅蛋白熒光免疫層析試紙保證了良好的檢測準確度、線性度(R~20.97)、變異系數(shù)(CV10%)和區(qū)分度,并且和臨床比對結果十分優(yōu)異(R~20.95)。(3)構建了一種新型側(cè)向?qū)游鲈嚰?基于夾心法,綜合了親和層析柱法和熒光免疫層析法的優(yōu)勢,同時保證了檢測時間在30min左右,滿足POCT的要求。相比于親和層析法中依靠血紅蛋白的顏色作為檢測結果,該試紙以熒光定量信號為結果可以提升準確度并減少干擾。相較于熒光免疫層析試紙,熒光親和免疫層析試紙有較大的線性區(qū)間(3.0%~13.8%),線性相關好(R~20.99),減小了糖化血紅蛋白前體的影響且節(jié)約了所需HbA1c特異性抗體對的成本。不僅如此,試紙保證了良好的準確度(CV15%)和在糖化血紅蛋白cutoff值(6.5%)處的區(qū)分度。在與臨床樣本的比對驗證中,熒光親和免疫層析試紙依舊展現(xiàn)了良好的一致性(R~20.95)。
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：TH789

【參考文獻】

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本文編號：2594473