生物途徑合成的甘油三酯（TAG）是重要的生物能源前體。�；�-酰基載體蛋白（acyl-ACP）作為其合成途徑中的重要底物,與甘油三磷酸（G-3-P）在甘油三磷酸�；D移酶（GPAT）的催化下生成的溶血磷脂酸（LPA）是TAG合成路徑中第一個反應,對于TAG的合成起著重要的調(diào)控作用。因此對于acyl-ACP與GPAT的反應研究具有重要意義。在ACP作為acyl-ACP底物的部分參與到GPAT催化酰基轉移反應時,通常僅視為�；湠镚PAT的催化選擇性,而忽略了ACP在其中的貢獻,這種選擇機制的誤解存在于很多催化ACP反應的酶中。因此為了能夠研究acyl-ACP的ACP部分對GPAT的選擇性貢獻,獲得不同鏈長acyl-ACP及其突變體,并對其與GPAT的反應活性進行分析研究是深入了解ACP的結構和功能,并認識ACP參與酶反應動力學分子機制的重要前提。本研究根據(jù)野生型ACP的氨基酸序列及三維結構信息,設計了涉及11個氨基酸位點共12株ACP突變體。體外構建12株ACP突變體的表達質粒并在大腸桿菌中可溶表達。在acyl-ACP合成酶的作用下將結合了4’-磷酸泛酰巰基乙胺基團（4’-PPT）的活性A... 

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻綜述
    1.1 微藻與生物柴油
        1.1.1 微藻的介紹
        1.1.2 生物柴油的概念
        1.1.3 微藻生物柴油的獨特優(yōu)勢
        1.1.4 微藻生物柴油的機遇
    1.2 甘油三酯的合成
        1.2.1 脂肪酸合成途徑
        1.2.2 TAG合成途徑
    1.3 �；d體蛋白概述
        1.3.1 酰基載體蛋白的研究概況
        1.3.2 ACP的結構研究
    1.4 �；d體蛋白的工業(yè)應用
    1.5 甘油-3-磷酸�；D移酶的概述
    1.6 acyl-ACP與 GPAT相互作用研究進展
    1.7 本論文的研究內(nèi)容和研究思路
    1.8 本論文立題目的和意義
2 不同acyl-ACP突變體的制備
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 主要儀器
        2.2.2 主要實驗材料
        2.2.3 培養(yǎng)基
        2.2.4 主要溶液
    2.3 實驗方法
        2.3.1 感受態(tài)細胞的制備
        2.3.2 熱激法轉化質粒
        2.3.3 ACP突變體的設計及構建
        2.3.4 holo-ACP不同突變體的誘導表達
        2.3.5 holo-ACP的純化
        2.3.6 acyl-ACP合成酶AasS的表達純化
        2.3.7 不同鏈長acyl-ACP及其突變體的合成
        2.3.8 SDS-PAGE檢測重組蛋白表達純化
        2.3.9 Bradford法測定蛋白濃度
        2.3.10 HPLC定量檢測holo-ACP、acyl-ACP含量
    2.4 實驗結果與討論
        2.4.1 holo-ACP突變體表達純化性質差異
        2.4.2 HPLC檢測分析acyl-ACP性質差異
        2.4.3 acyl-ACP的穩(wěn)定性差異
    2.5 小結
3 不同鏈長acyl-ACP及其突變體與GPAT的酶活測定
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 主要儀器
        3.2.2 實驗試劑
        3.2.3 主要溶液
    3.3 實驗方法
        3.3.1 LiGPAT的誘導表達
        3.3.2 LiGPAT純化
        3.3.3 acyl-ACP與 Li GPAT的酶活測定
        3.3.4 HPLC檢測GPAT與 acyl-ACP的活性
    3.4 實驗結果與討論
        3.4.1 16 :0-ACP突變體酶活測定反應特性比較
        3.4.2 18 :1-ACP突變體酶活測定反應特性比較
        3.4.3 LiGAPT對酰基鏈長的選擇性
    3.5 小結
結論與展望
參考文獻
附錄A 縮略語表及名稱說明
附錄B E.coli-ACP序列
附錄C ACP質粒圖
附錄D Holo-ACP凝膠過濾色譜圖
攻讀碩士學位期間發(fā)表學術論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]淺談微藻生物柴油[J]. 劉婷.  生物化工. 2018(04)
[4]能源微藻的應用[J]. 宋瑞雪.  生物化工. 2018(04)
[5]微藻制備生物柴油技術綜述[J]. 張萌,賈文川.  當代化工. 2018(04)
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博士論文
[1]三角褐指藻甘油三酯合成及累積途徑相關重要節(jié)點的研究[D]. 汪翔.暨南大學 2018

碩士論文
[1]海洋產(chǎn)油微生物篩選及�；d體蛋白基因克隆[D]. 陶永佳.大連工業(yè)大學 2017
[2]花生酰基載體蛋白基因的克隆與功能分析[D]. 魏麗奇.山東師范大學 2009



本文編號：3661261