本文關(guān)鍵詞：玫煙色棒束孢耐熱菌株的篩選及耐熱相關(guān)機(jī)理的初步研究

  更多相關(guān)文章： 玫煙色棒束孢 耐熱性 毒力 超氧化物歧化酶 海藻糖 疏水蛋白 海藻糖水解酶

【摘要】：玫煙色棒束孢(Isaria fumosorosue)是目前開發(fā)應(yīng)用于防治農(nóng)林害蟲的昆蟲病原真菌之一。昆蟲病原真菌的殺蟲效果除與菌種自身的毒力有關(guān)外,還在很大程度上受外界環(huán)境因素的影響,如溫度、濕度、紫外線等。環(huán)境溫度影響真菌制劑貯藏穩(wěn)定性,而菌株的耐熱性與真菌制劑的貯藏時(shí)間相關(guān)。因此生防制劑的有效成分(分生孢子或菌絲體)對(duì)環(huán)境的耐受力是影響制劑貯存時(shí)間和田間應(yīng)用的重要因素。本研究進(jìn)行了玫煙色棒束孢耐熱菌株的篩選,并對(duì)其與耐熱相關(guān)的生理生化作了初步研究,結(jié)果如下：1.將7株玫煙色棒束孢菌株的孢子懸浮液置于48℃恒溫水浴熱脅迫45min后,再滴于單凹玻片上培養(yǎng)36h,以孢子殘存活率作為各菌株耐熱力的指標(biāo)。結(jié)果表明,供試菌株的殘存活孢率相互之間差異顯著,在28.70%-57.28%。其中,502、904和9606菌株熱脅迫后存活率均達(dá)50%以上,表明它們具有較強(qiáng)的耐熱性；14、511和609菌株孢子存活率為34.72%-36.00%,耐熱性居中；而7606菌株孢子存活率僅為28.70%,耐熱力較差。2.采用波特噴霧器測(cè)定玫煙色棒束孢不同耐熱力菌株在同種濃度下對(duì)麥蚜的毒力。結(jié)果表明,耐熱性較強(qiáng)的904菌株對(duì)麥蚜的致病力最高達(dá)90.20%,致死中時(shí)最短為2.67d。3.采用考馬斯亮藍(lán)(BRADFORD)法測(cè)定玫煙色棒束孢不同耐熱力菌株疏水蛋白含量。結(jié)果表明,FAE蛋白含量在供試菌株間差異顯著。耐熱性較強(qiáng)的904菌株其疏水蛋白含量最高,這說明疏水蛋白含量與菌株耐熱力具有相關(guān)性。4.采用氮藍(lán)四唑法測(cè)定了不同耐熱力菌株菌絲在不同溫度熱脅迫后的酶活水平。結(jié)果表明,不同耐熱力的菌株菌絲中SOD酶活存在顯著差異。當(dāng)溫度升高時(shí),不同耐熱力菌株的酶活水平都在提高,常溫下高酶活的904菌株在高溫脅迫后其酶活水平也較高,說明當(dāng)菌株受到外界溫度脅迫時(shí),菌株體內(nèi)SOD酶活提高以保護(hù)機(jī)體細(xì)胞正常的生理活動(dòng)。5.采用Native-PAGE對(duì)不同耐熱力菌株的菌絲粗酶液的活性電泳結(jié)果顯示,不同耐熱力菌株的粗酶提取液有且僅有一條相同的條帶,說明供試菌株SOD為同一種酶型。6.采用蒽酮硫酸法測(cè)定了玫煙色棒束孢904菌株在不同溫度脅迫后其胞內(nèi)海藻糖的含量變化。結(jié)果顯示,在3-6h的熱激過程中,海藻糖含量隨著脅迫溫度的升高逐漸上升,脅迫9h后含量降低。在相同條件下,采用DNS法測(cè)定其海藻糖水解酶活力的變化,海藻糖水解酶的活力水平正好與海藻糖含量的變化相反,由此可知,胞內(nèi)海藻糖和海藻糖水解酶的代謝參與了玫煙色棒束孢的耐熱機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：玫煙色棒束孢 耐熱性 毒力 超氧化物歧化酶 海藻糖 疏水蛋白 海藻糖水解酶
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S476.12
【目錄】：

• 摘要6-8
• 前言8-16
• 1 昆蟲病原真菌的耐熱機(jī)理8-14
• 1.1 超氧化物歧化酶對(duì)熱脅迫的反應(yīng)9-11
• 1.2 海藻糖對(duì)熱激的響應(yīng)11-12
• 1.3 真菌孢壁蛋白12-14
• 2 玫煙色棒束孢抗逆性研究14-15
• 3 本研究的目的與內(nèi)容15-16
• 第一部分 玫煙色棒束孢耐熱菌株的篩選16-21
• 1 材料與方法16-17
• 1.1 供試菌株16
• 1.2 培養(yǎng)基16
• 1.3 儀器與設(shè)備16
• 1.4 耐高溫菌株的篩選16-17
• 1.4.1 孢子懸浮液的制備16-17
• 1.4.2 分生孢子耐熱力測(cè)定17
• 1.5 玫煙色棒束孢不同耐熱力菌株的毒力測(cè)定17
• 1.5.1 玫煙色棒束孢904菌株對(duì)麥蚜的毒力測(cè)定17
• 2 結(jié)果與分析17-20
• 2.1 分生孢子的耐熱力17-18
• 2.2 玫煙色棒束孢不同耐熱力菌株的毒力18-19
• 2.3 玫煙色棒束孢904對(duì)麥蚜的致死率19-20
• 3 討論20-21
• 第二部分 玫煙色棒束孢耐熱相關(guān)機(jī)理的初步研究21-34
• 1 材料與方法21-26
• 1.1 供試材料21
• 1.2 培養(yǎng)基與供試試劑21
• 1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備21-22
• 1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制22
• 1.5 不同耐熱力菌株疏水蛋白含量的測(cè)定22
• 1.6 SOD活性和酶型測(cè)定22-25
• 1.6.1 酶液制備22
• 1.6.2 酶活測(cè)定22-23
• 1.6.3 酶型測(cè)定23-25
• 1.7 玫煙色棒束孢904菌株海藻糖的測(cè)定25-26
• 1.8 玫煙色棒束孢904菌株海藻糖水解酶活力的測(cè)定26
• 2 結(jié)果與分析26-30
• 2.1 不同耐熱力菌株的疏水蛋白含量26-27
• 2.2 玫煙色棒束孢不同耐熱力菌株SOD活性27-28
• 2.3 不同耐熱力菌株的酶型28
• 2.4 玫煙色棒束孢904菌株菌絲高溫脅迫后海藻糖含量28-29
• 2.5 玫煙色棒束孢904菌株高溫處理后海藻糖水解酶活力29-30
• 3 討論30-34
• 參考文獻(xiàn)34-40
• Abstract40-42
• 致謝42

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