本文關(guān)鍵詞：冬青衛(wèi)矛內(nèi)生菌的分離及其活性代謝物研究

  更多相關(guān)文章： 冬青衛(wèi)矛 內(nèi)生菌 抑菌活性 phencomycin 殼二孢氯素

【摘要】：植物內(nèi)生菌作為一種微生物類群,廣泛存在于健康植物組織中且其代謝產(chǎn)物豐富多樣,是尋找具有新穎分子骨架的生物活性化合物的重要來源。冬青衛(wèi)矛是一種高抗污染植物,且具有治療跌打損傷、小便疼痛等功效。本論文以冬青衛(wèi)矛為植物材料,主要研究了內(nèi)生菌的分離、發(fā)酵產(chǎn)物抑菌活性、菌株鑒定、活性物質(zhì)的分離鑒定及發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化等。主要結(jié)果如下:1.分別運(yùn)用組織勻漿法和切塊法從冬青衛(wèi)矛中分離得到42株內(nèi)生放線菌和21株內(nèi)生真菌。通過管碟法和生長速率法對菌株發(fā)酵液進(jìn)行初步活性評價(jià),結(jié)果表明:有5株菌株對供試病原細(xì)菌和真菌均具有良好的抑制作用,綜合抗菌活性及其發(fā)酵狀態(tài)等因素選取內(nèi)生菌株G1和W1進(jìn)行深入研究。2.通過16S rDNA序列分析,基本確定內(nèi)生放線菌G1為Streptomyces flavofuscus G1。從其次生代謝物中分離得到兩個(gè)活性化合物,G13和G19,分別鑒定為Phencomycin和4'-deacetyl-(-)-griseusin A。抑菌活性測定結(jié)果表明:4'-deacetyl-(-)-griseusin A對供試細(xì)菌和病原真菌均表現(xiàn)出抑制活性,其中,對水稻白葉枯病菌、銅綠假單孢菌、蠟狀芽孢桿菌及金黃色葡萄球菌具有強(qiáng)烈的抑制作用,其最低抑菌濃度(MIC)值均為1.56μg/mL;對蘋果樹腐爛病菌和小麥赤霉病菌菌絲生長亦具有顯著的抑制作用,其IC50值分別為14.70和24.35μg/mL。Phencomycin對供試細(xì)菌僅表現(xiàn)出微弱的抑菌活性,對病原真菌均表現(xiàn)出抑制活性,其中對油菜菌核病菌和蘋果樹腐爛病菌菌絲生長有強(qiáng)烈的抑制作用,其IC50值分別為5.21和4.82μg/mL。3.通過ITS序列分析,基本確定內(nèi)生真菌W1為Cylindrocarpon olidum W1。從其菌絲體中分離得到一個(gè)高產(chǎn)量活性化合物W1-4,鑒定為殼二孢氯素(ascochlorin),并首次對其農(nóng)用抑菌活性進(jìn)行評價(jià)。結(jié)果表明:殼二孢氯素對供試細(xì)菌僅有微弱的活性;對病原真菌均表現(xiàn)出抑制活性,其中,100μg/mL濃度下,對蘋果樹腐爛病菌菌絲生長的抑制率為82.61%。4.采用中心組合設(shè)計(jì)及響應(yīng)面分析法對內(nèi)生真菌Cylindrocarpon olidum W1的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化以提高殼二孢氯素的產(chǎn)量。優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:玉米粉30 g/L、魚粉8.098 g/L、KCl 6.928 g/L。在此最優(yōu)因素水平下,殼二孢氯素含量為1015.32μg/mL,而原始發(fā)酵培養(yǎng)基殼二孢氯素的含量為211.08μg/mL,是原始培養(yǎng)基的4.81倍。
【關(guān)鍵詞】：冬青衛(wèi)矛 內(nèi)生菌 抑菌活性 phencomycin 殼二孢氯素
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S476.1
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-21
• 1.1 植物內(nèi)生菌概述12
• 1.2 植物內(nèi)生菌的多樣性12-13
• 1.3 植物內(nèi)生菌的活性代謝物種類13-17
• 1.3.1 抗菌活性化合物13-14
• 1.3.2 抗腫瘤活性化合物14-15
• 1.3.3 殺蟲活性化合物15-16
• 1.3.4 其他活性化合物16-17
• 1.4 產(chǎn)活性物質(zhì)植物內(nèi)生菌的篩選策略17-18
• 1.5 農(nóng)用抗生素的研究概況18-19
• 1.5.1 農(nóng)用抗生素的發(fā)展18
• 1.5.2 農(nóng)用抗生素的展望18-19
• 1.6 冬青衛(wèi)矛內(nèi)生菌的研究概況19
• 1.7 論文設(shè)計(jì)思路19-21
• 1.7.1 選題依據(jù)及基礎(chǔ)19-20
• 1.7.2 研究內(nèi)容及技術(shù)路線20-21
• 第二章 冬青衛(wèi)矛內(nèi)生菌的分離及活性評價(jià)21-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料21-22
• 2.1.1 植物材料21
• 2.1.2 主要儀器21
• 2.1.3 主要試劑21
• 2.1.4 培養(yǎng)基21-22
• 2.1.5 供試病原菌22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法22-24
• 2.2.1 植物材料表面消毒22-23
• 2.2.2 內(nèi)生菌的分離培養(yǎng)23
• 2.2.3 菌株的純化23
• 2.2.4 菌株的保藏23
• 2.2.5 菌株液體培養(yǎng)23
• 2.2.6 活性篩選23-24
• 2.3 結(jié)果與分析24-25
• 2.3.1 表面消毒效果24
• 2.3.2 內(nèi)生真菌的分離24
• 2.3.3 內(nèi)生放線菌的分離24
• 2.3.4 內(nèi)生菌發(fā)酵液的活性初篩24-25
• 2.4 小結(jié)與討論25-26
• 第三章 內(nèi)生放線菌G1抑菌活性研究26-40
• 3.1 菌株鑒定26-31
• 3.1.1 試驗(yàn)材料26-27
• 3.1.2 試驗(yàn)方法27-29
• 3.1.3 結(jié)果分析29-31
• 3.2 發(fā)酵液抑菌活性成分研究31-39
• 3.2.1 試驗(yàn)材料31-33
• 3.2.2 試驗(yàn)方法33-34
• 3.2.3 結(jié)果分析34-39
• 3.3 小結(jié)與討論39-40
• 第四章 內(nèi)生真菌W1抑菌活性研究40-50
• 4.1 菌株鑒定40-44
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料40
• 4.1.2 試驗(yàn)方法40-42
• 4.1.3 結(jié)果分析42-44
• 4.2 發(fā)酵液抑菌活性成分研究44-49
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料44-45
• 4.2.2 試驗(yàn)方法45-46
• 4.2.3 結(jié)果分析46-49
• 4.3 小結(jié)與討論49-50
• 第五章 Cylindrocarpon olidum W1發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化50-64
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料50-51
• 5.1.1 供試菌株50
• 5.1.2 培養(yǎng)基50-51
• 5.1.3 主要儀器51
• 5.1.4 主要試劑51
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法51-53
• 5.2.1 菌株的液體發(fā)酵51
• 5.2.2 殼二孢氯素含量的檢測51
• 5.2.3 發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化51-53
• 5.3 結(jié)果分析53-62
• 5.3.1 單因素實(shí)驗(yàn)53-55
• 5.3.2 響應(yīng)面分析法確定各因素最佳水平55-62
• 5.4 小結(jié)與討論62-64
• 第六章 結(jié)論64-65
• 參考文獻(xiàn)65-72
• 附錄72-73
• 附錄 菌落形態(tài)72-73
• 縮略詞73-74
• 致謝74-75
• 作者簡介75

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本文編號：989253