本文關鍵詞：苜蓿夜蛾絲氨酸蛋白酶基因cDNA序列的克隆與原核表達研究

  更多相關文章： 苜蓿夜蛾 絲氨酸蛋白酶 克隆 原核表達 酶活性

【摘要】：【目的】絲氨酸蛋白酶(Serine protease,SP)是以絲氨酸為活性中心的重要的蛋白水解酶。在昆蟲中,絲氨酸蛋白酶參與消化、發(fā)育、先天免疫反應和組織重建等重要的生理過程。本試驗以苜蓿夜蛾Heliothis viriplaca為材料,克隆其絲氨酸蛋白酶基因的cDNA序列,再對該基因進行原核表達并對表達產物進行活性測定研究�！痉椒ā繌能俎Ｒ苟曛心c中提取總RNA,通過RT-PCR和RACE技術,擴增獲得絲氨酸蛋白酶基因cDNA全長序列,用大腸桿菌E.coli表達系統(tǒng)進行表達;再對表達的重組蛋白進行變性、純化與復性,并以BTEE為底物進行活性測定。【結果】克隆得到的苜蓿夜蛾中腸絲氨酸蛋白酶基因命名為Hv SP,該基因已登錄Gen Bank,登錄號為KT907053。該基因全長1 017 bp,開放閱讀框為886 bp,編碼295個氨基酸,分子量約為30.8 ku,等電點為8.27,推導的氨基酸序列與其他昆蟲絲氨酸蛋白酶氨基酸序列相似性在46%~92%之間。在Tris-HCl緩沖液中,p H為8.5時,復性的重組蛋白活性最高,為28.7 U/m L。熒光定量PCR結果表明,Hv SP基因的m RNA在苜蓿夜蛾的多個組織中特異性表達,且在中腸中表達量最高,但在唾腺中未檢測到Hv SP的m RNA表達�！窘Y論】該研究克隆了一個新的苜蓿夜蛾絲氨酸蛋白酶基因的cDNA序列,且原核表達后的重組蛋白經過變性、純化及復性后具有活性,為進一步探索絲氨酸蛋白酶在昆蟲體內的生理生化功能奠定了基礎。
【作者單位】： 東北農業(yè)大學農學院;
【關鍵詞】： 苜蓿夜蛾 絲氨酸蛋白酶 克隆 原核表達 酶活性
【基金】：國家現(xiàn)代農業(yè)產業(yè)技術體系建設專項基金CARS-04
【分類號】：S433.4
【正文快照】： **第一作者First author,E-mail:leelily201@163.com***通訊作者Corresponding author,E-mail:dnfd@163.com絲氨酸蛋白酶(Serine protease,SP)超家族是一類在C端具有特異性保守催化三聯(lián)體(His、Asp、Ser)結構域的蛋白水解酶,廣泛存在于生物有機體中(Ross et al.,2003)。該家族

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 慕衛(wèi),吳孔明,梁革梅,張文吉;苜蓿夜蛾人工飼養(yǎng)技術[J];農藥學學報;2002年01期

，

本文編號：874322