本文關(guān)鍵詞：生防菌NEAU-Da4對(duì)大豆內(nèi)生放線菌的影響及特異放線菌鑒定

  更多相關(guān)文章： 生防菌NEAU-Da4 植物內(nèi)生放線菌 高溫放線菌科 Baia soyae 多相分類學(xué)

【摘要】：大豆疫霉可引發(fā)大豆疫霉根腐病,該病害廣泛分布于全球大部分產(chǎn)大豆地區(qū),是大豆主要病害之一。生防菌NEAU-Da4是一株產(chǎn)勃利霉素的大豆內(nèi)生放線菌,對(duì)大豆疫霉病菌具有較高抑制活性。本研究以大豆內(nèi)生放線菌微生態(tài)角度出發(fā),分別以健康大豆,NEAU-Da4和大豆疫霉同時(shí)施用大豆(處理1)以及NEAU-Da4單獨(dú)施用大豆(處理2)作為分離對(duì)象,通過(guò)對(duì)傳統(tǒng)篩選方法改良,采用七種分離培養(yǎng)基、兩種研磨方法,分別對(duì)三組植株樣本的根、葉、豆莢、豆四個(gè)部位進(jìn)行內(nèi)生放線菌的分離。明確不同處理大豆內(nèi)生放線菌群組成及差異,并對(duì)其進(jìn)行抗大豆疫霉、大豆菌核和大豆根腐活性檢測(cè)及特異微生物鑒定。結(jié)果如下:(1)健康株及處理大豆樣本中共分離得到280株內(nèi)生放線菌,其中健康植株分離102株、處理1分離89株、處理2分離89株。通過(guò)對(duì)菌株形態(tài)和培養(yǎng)特征觀察以及部分菌株16S r RNA分析,分離得到的菌株大多屬于鏈霉菌屬(Streptomyces)和小單孢菌屬(Micromonospora),其中鏈霉菌占分離菌株的80%左右,是大豆內(nèi)生放線菌優(yōu)勢(shì)菌群。同時(shí)也存在少量其他種類的稀有放線菌,包括處理1分離得到的白氏菌屬(Baia)、植物生孢菌屬(Plantactinospora)和處理2分離得到的糖霉菌屬(Glycomyces)。綜合分析不同部位內(nèi)生放線菌,大豆植株根部菌群數(shù)目明顯多于豆莢、豆葉及豆。處理1豆根中篩選稀有菌株所占比例高達(dá)38.6%,處理2達(dá)30%,兩組處理均明顯高于健康植株中稀有放線菌所占比例15.7%。(2)生物活性檢測(cè)結(jié)果顯示,32株活性株均來(lái)源于大豆根部。其中,健康株內(nèi)活性株所占比例為7.1%,處理1、處理2分別為22.8%和21.6%;處理1及處理2中活性株數(shù)目多于健康植株。(3)運(yùn)用多相分類學(xué)方法對(duì)NEAU-gxj18進(jìn)行鑒定。通過(guò)16S r RNA序列分析確定該菌為高溫放線菌科,與其相似性最高的菌株為Geothermomicrobium terrae YIM 77562T(93.35%)。該菌株溫度生長(zhǎng)范圍為20-40℃,最適生長(zhǎng)溫度為37℃。菌株NEAU-gxj18細(xì)胞壁特征氨基酸為內(nèi)消旋二氨基庚二酸,磷酸類脂為雙磷脂酰甘油,磷脂酰乙醇胺,磷脂酰甘油,未知磷脂和未知氨磷脂。細(xì)胞水解糖為半乳糖、核糖和葡萄糖,醌組主要為MK-7,脂肪酸主要為iso-C15:0,C13:0和iso-C17:0,基因組G+C mol%為49.9 mol%。相關(guān)特征的比對(duì)分析確定該菌為高溫放線菌科的一個(gè)新屬,命名為Baia soyae。
【關(guān)鍵詞】：生防菌NEAU-Da4 植物內(nèi)生放線菌 高溫放線菌科 Baia soyae 多相分類學(xué)
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S476.1
【目錄】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 前言11-18
• 1.1 植物內(nèi)生微生物群系研究概況11-13
• 1.1.1 植物內(nèi)生微生物群系變化的影響因素12
• 1.1.2 植物內(nèi)生微生物群系變化與植物的防御12-13
• 1.2 植物內(nèi)生放線菌抗病促生研究13-15
• 1.2.1 植物內(nèi)生放線菌調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育14
• 1.2.2 植物內(nèi)生放線菌應(yīng)用于植物病害防治14-15
• 1.3 生防菌15-17
• 1.3.1 生防菌15-16
• 1.3.2 產(chǎn)勃利霉素菌株NEAU-Da416-17
• 1.4 研究的內(nèi)容及課題來(lái)源17-18
• 1.4.1 研究的目的意義及內(nèi)容17
• 1.4.2 課題來(lái)源17-18
• 2 材料與方法18-25
• 2.1 試驗(yàn)材料18
• 2.1.1 供試大豆品種18
• 2.1.2 供試菌株18
• 2.2 試劑與儀器18-19
• 2.2.1 試劑18-19
• 2.2.2 主要儀器19
• 2.3 主要培養(yǎng)基及制備方法19-20
• 2.3.1 分離培養(yǎng)基19-20
• 2.3.2 純化培養(yǎng)基20
• 2.3.3 生測(cè)培養(yǎng)基20
• 2.3.4 生理生化培養(yǎng)基20
• 2.3.5 形態(tài)特征觀察培養(yǎng)基20
• 2.4 NEAU-Da4拮抗研究20-22
• 2.4.1 NEAU-Da4對(duì)大豆疫霉抑菌活性測(cè)定20-21
• 2.4.2 NEAU-Da4對(duì)大豆防病作用測(cè)定21-22
• 2.5 無(wú)菌環(huán)境NEAU-Da4大豆根部定殖試驗(yàn)22
• 2.6 NEAU-Da4對(duì)盆栽大豆內(nèi)生放線菌菌群的影響22-23
• 2.6.1 盆栽試驗(yàn)22-23
• 2.6.2 大豆內(nèi)生放線菌的分離和純化23
• 2.6.3 菌株活性檢測(cè)23
• 2.7 新屬放線菌的分類學(xué)鑒定23-25
• 2.7.1 形態(tài)和培養(yǎng)特征鑒定23-24
• 2.7.2 生理生化特性鑒定24
• 2.7.3 化學(xué)分類學(xué)鑒定24
• 2.7.4 分子水平鑒定24-25
• 3 結(jié)果與分析25-45
• 3.1 NEAU-Da4對(duì)大豆疫霉病菌抑菌活性測(cè)定25
• 3.2 NEAU-Da4對(duì)大豆種子萌發(fā)的影響25-26
• 3.3 NEAU-Da4對(duì)大豆植株影響26
• 3.4 無(wú)菌環(huán)境NEAU-Da4大豆根部定殖試驗(yàn)26-27
• 3.5 NEAU-Da4對(duì)盆栽大豆內(nèi)生放線菌菌群的影響27-34
• 3.5.1 菌株分離27-30
• 3.5.2 NEAU-Da4對(duì)大豆內(nèi)生放線菌的影響30-33
• 3.5.3 不同分離方法分析33-34
• 3.6 NEAU-gxj18的多相分類學(xué)鑒定結(jié)果與分析34-45
• 3.6.1 16S rRNA基因測(cè)序及系統(tǒng)發(fā)育分析34-38
• 3.6.2 形態(tài)及培養(yǎng)特征38-39
• 3.6.3 生理生化特性39-40
• 3.6.4 微生物細(xì)胞化學(xué)組分分析結(jié)果40-43
• 3.6.5 菌株的(G+C)mol%含量43
• 3.6.6 特征性核苷酸分析結(jié)果43-45
• 4 討論45-48
• 4.1 高溫放線菌科Baia soyae研究45
• 4.2 施用生防菌對(duì)大豆內(nèi)生放線菌影響研究45-48
• 4.2.1 NEAU-Da4定殖情況分析45-46
• 4.2.2 NEAU-Da4對(duì)大豆內(nèi)生放線菌的影響46-47
• 4.2.3 不同分離方法分析47-48
• 5 結(jié)論48-49
• 5.1 本研究的主要結(jié)論48
• 5.2 本研究的主要?jiǎng)?chuàng)新48-49
• 致謝49-50
• 參考文獻(xiàn)50-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文57-58

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