本文關(guān)鍵詞：具有促生抗病能力的纖維素降解真菌的篩選及其促生效果研究

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【摘要】：本實(shí)驗(yàn)旨在從土壤中篩選出具有纖維素降解、溶磷、產(chǎn)吲哚乙酸并能拮抗部分植物致病菌的真菌,為研發(fā)新型多功能腐熟劑提供基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)以采集自成都市溫江區(qū)和崇州市等地的土壤為材料,采用稀釋平板法分離出其中的真菌,通過(guò)定性篩選獲得其中具有纖維素降解、促生、拮抗功能的真菌,并進(jìn)一步定量分析了供試真菌的上述功能。應(yīng)用ITS序列的擴(kuò)增測(cè)序、BLAST比對(duì),以及對(duì)真菌菌落形態(tài)和菌體形態(tài)的觀察,最終確定這些供試菌株的種屬。采用秸稈腐熟實(shí)驗(yàn),確定了篩選的菌株秸稈降解能力以及秸稈腐熟物對(duì)作物種子發(fā)芽率的影響,最終篩選出了3個(gè)優(yōu)良菌株,制成混合固體菌劑,盆栽實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了其對(duì)土壤改良效果及對(duì)植物的促生作用。通過(guò)定性實(shí)驗(yàn),從183株真菌中篩選出了9株具有復(fù)合功能的纖維素降解真菌,其編號(hào)分別為WJF17、WJF29、WJF40、WJF43、WJFS17、CZF55、CZF60、CZF63和CZF130。定量實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,這些真菌在液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)時(shí)的CMC酶活性分別為6.19～89.97 U-min-1·mL-1和188.09～～605.32 U·min-1·g-1,濾紙酶活性分別為2.25～10.86 U·min-1·mL-1和32.43～127.81 U·min-1·g-1；在添加相當(dāng)于5.0g-L-1磷酸鈣的培養(yǎng)基中,對(duì)磷酸鈣的溶解能力為194.37-1538.19 mg·L-1·3d-1；在添加0.5g·L-1的L-色氨酸的培養(yǎng)基中IAA產(chǎn)量為3.87-12.50μg·mL-1·3d-1。這些真菌均對(duì)供試的致病真菌具有一定的生長(zhǎng)抑制能力,部分對(duì)指示細(xì)菌具有拮抗能力。采用形態(tài)學(xué)和ITS序列分析研究了9個(gè)菌株的分類地位,WJF17和WJF29為黃曲霉(Aspergillus flavus)、WJF40為煙曲霉(Aspergillus fumigatus)、WJF43為黑曲霉(Aspergillus niger)、CZF55為產(chǎn)黃青霉(Penicillium chrysogenum)、CZF60為圓弧青霉(Penicillium cyclopium)、WJFS17為裸節(jié)菌(Talaromyces purpurogenus)、CZF63為哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、CZF130為米根霉(Rhizopus oryzae),分布于5個(gè)屬8個(gè)種。在秸稈降解試驗(yàn)中,通過(guò)測(cè)定秸稈的拉力強(qiáng)度、纖維素含量和半纖維素含量的變化,確定了30d的處理時(shí)期內(nèi)9株真菌的固體菌劑對(duì)小麥秸稈的降解情況。結(jié)果表明,接種供試真菌后秸稈的拉力強(qiáng)度比對(duì)照組降低了1.90%-47.70%,秸稈纖維素含量由約40%降低至6.83%-15.62%,半纖維素含量變化不明顯,秸稈腐熟物的浸提液,對(duì)蔬菜種子的萌發(fā)率的提升效果分別為-3.67%～11.67%。綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,最終篩選出了3株優(yōu)良菌株,黑曲霉(Aspergillus niger)WJF43、產(chǎn)黃青霉(Penicillium chrysogenum) CZF55和裸節(jié)菌(Talaromyces purpurogenus)WJFS 17,采用盆栽試驗(yàn)驗(yàn)證其功能,試驗(yàn)設(shè)計(jì)了5個(gè)處理,分別為T1：不加秸稈和菌劑的對(duì)照組,T2：小麥秸稈+固體菌劑,T3：小麥秸稈,T4：腐熟秸稈+固體菌劑,T5：腐熟秸稈。結(jié)果表明,T4處理效果最好,可以有效地提升土壤有機(jī)質(zhì)和微生物碳、氮含量,增幅分別達(dá)到22.2%、46.1%、42.41%,瓢兒菜吸收磷量增加了15.56%,產(chǎn)量增加了47.25%。因此,篩選獲得的WJF43、CZF55和WJFS17是具有纖維素降解能力和促生、拮抗功能的優(yōu)良真菌,具有良好的應(yīng)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：纖維素降解 真菌 溶磷 IAA 拮抗 秸稈
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S182
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-20
• 1.1 文獻(xiàn)綜述10-19
• 1.1.1 引言10
• 1.1.2 秸稈還田及纖維素降解真菌研究進(jìn)展10-15
• 1.1.3 真菌促生作用研究現(xiàn)狀15-17
• 1.1.4 真菌鑒定研究方法17-19
• 1.1.5 小結(jié)19
• 1.2 技術(shù)路線圖19-20
• 第二章 纖維素降解兼促生抗病功能真菌篩選及功能研究20-32
• 2.1 材料與方法20-24
• 2.1.1 土壤樣品20
• 2.1.2 試劑與培養(yǎng)基20-21
• 2.1.3 供試菌株分離及纖維素分解、促生真菌的篩選21-22
• 2.1.4 具有拮抗功能真菌的篩選22-23
• 2.1.5 定量測(cè)定供試菌株的功能特性23-24
• 2.2 結(jié)果分析24-29
• 2.2.1 供試菌株分離及纖維素分解、促生真菌的篩選結(jié)果24-27
• 2.2.2 定量實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-29
• 2.3 討論29-32
• 第三章 供試菌株種屬鑒定32-38
• 3.1 材料與方法32-34
• 3.1.1 試劑與培養(yǎng)基32
• 3.1.2 供試真菌菌株形態(tài)學(xué)觀察32-33
• 3.1.3 菌株DNA的提取33
• 3.1.4 ITS擴(kuò)增測(cè)序與供試菌株系統(tǒng)發(fā)育分析33-34
• 3.2 結(jié)果與分析34-37
• 3.2.1 真菌的菌落形態(tài)和菌體形態(tài)34-36
• 3.2.2 分子生物學(xué)鑒定36-37
• 3.3 討論37-38
• 第四章 供試菌株的纖維素降解及促生功能驗(yàn)證38-51
• 4.1 材料與方法38-43
• 4.1.1 供試材料38-39
• 4.1.2 秸稈腐熟實(shí)驗(yàn)39-42
• 4.1.3 秸稈還田實(shí)驗(yàn)42-43
• 4.2 結(jié)果與分析43-49
• 4.2.1 秸稈腐熟情況43-47
• 4.2.2 盆栽實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-49
• 4.3 討論49-51
• 第五章 全文結(jié)論與研究建議51-52
• 5.1 全文結(jié)論51
• 5.2 研究建議51-52
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 致謝58-59

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