發(fā)布時間：2017-08-13 16:02

  本文關(guān)鍵詞：西花薊馬氣味結(jié)合蛋白的cDNA克隆、序列分析及時空表達

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【摘要】：【目的】鑒定西花薊馬(Frankliniella occidentalis)氣味結(jié)合蛋白(odorant binding protein,OBP)并對其序列特征及分布情況進行研究,為闡明該蟲嗅覺識別的機制、利用干擾昆蟲嗅覺識別來進行害蟲防治提供依據(jù)�！痉椒ā坷肦T-PCR和RACE技術(shù)克隆西花薊馬氣味結(jié)合蛋白基因,用DNAMAN軟件進行序列分析,用BLAST進行同源性比較,并用MEGA6.0的鄰接法(neighbor-joining)構(gòu)建系統(tǒng)進化樹,應(yīng)用服務(wù)器ChouFasman預(yù)測蛋白的二級結(jié)構(gòu),通過實時熒光定量PCR檢測該基因在西花薊馬不同發(fā)育期以及成蟲不同組織中的分布情況�！窘Y(jié)果】克隆了一個西花薊馬氣味結(jié)合蛋白基因,命名為Focc OBP1(Gen Bank登錄號:KM527948);該基因c DNA序列全長660 bp,其中開放閱讀框450 bp,編碼149個氨基酸,3′端非編碼區(qū)長172 bp,具有真核生物poly A加尾結(jié)構(gòu),5′末端非編碼區(qū)長38 bp,預(yù)測成熟蛋白分子量為16.39 k D,等電點為7.46,N端有22個氨基酸組成的信號肽序列,具有氣味結(jié)合蛋白典型的6個保守半胱氨酸位點特征,其排列方式為C1-X26-C2-X3-C3-X40-C4-X9-C5-X8-C6,符合典型OBP 6個保守的半胱氨酸位點結(jié)構(gòu)模型。氨基酸序列中有3個親脂性區(qū)域,第74—83位的氨基酸殘基形成的親脂性口袋尤為明顯,可能是脂溶性氣味分子的結(jié)合位點;Focc OBP1氨基酸序列與3個半翅目和10個同翅目昆蟲OBP聚在同一分支,其中與綠盲蝽(Apolygus lucorum)的Aluc OBP8(Gen Bank登錄號為AFJ54049.1)、苜蓿盲蝽(Adelphocoris lineolatus)的Alin OBP5(Gen Bank登錄號為ACZ58031.1)、牧草盲蝽(Lygus lineolaris)的Llin OBP2(Gen Bank登錄號為AHF71029.1)同源相似性最高,其次是棉蚜(Aphis gossypii)的Agos OBP7(Gen Bank登錄號為AGE97637.1)、大豆蚜(Aphis glycines)的Agly OBP7(Gen Bank登錄號為AHJ80893.1)、禾谷縊管蚜(Rhopalosiphum padi)的Rpad OBP7(Gen Bank登錄號為AHL30243.1)等昆蟲OBP,表明Focc OBP1與這些基因的親緣關(guān)系也較近;經(jīng)Focc OBP1蛋白的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測,Focc OBP1以α-螺旋為主,其次是β-折疊,轉(zhuǎn)角含量較少;經(jīng)不同發(fā)育階段檢測發(fā)現(xiàn),Focc OBP1在西花薊馬若蟲期和初羽化成蟲期的表達量較高,且隨成蟲羽化后天數(shù)的延長表達量逐漸降低,在雌雄成蟲間的表達量也有差異;在初羽化成蟲的不同組織檢測發(fā)現(xiàn),Focc OBP1幾乎在初羽化成蟲觸角中特異性表達;構(gòu)建了重組表達質(zhì)粒p ET-30a/Focc OBP1。【結(jié)論】明確了Focc OBP1的核苷酸、氨基酸序列特征,分析了該蛋白的二級結(jié)構(gòu)特征,根據(jù)Focc OBP1在西花薊馬中的時空表達情況,推測該基因可能在西花薊馬嗅覺識別、定位寄主植物、信息素合成或性行為方面扮演重要角色;成功構(gòu)建了重組表達質(zhì)粒p ET-30a/Focc OBP1,為下一步該蛋白表達純化及其功能的深入研究打下了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 寧夏農(nóng)林科學(xué)院植物保護研究所寧夏植物病蟲害防治重點實驗室;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所植物病蟲害生物學(xué)國家重點實驗室;閩臺特色作物病蟲生態(tài)防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【關(guān)鍵詞】： 西花薊馬 氣味結(jié)合蛋白 分子克隆 序列分析 時空表達
【基金】：國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項資金(CARS-25-B-07) 寧夏自然科學(xué)基金(NZ15128) 寧夏農(nóng)林科學(xué)院科技創(chuàng)新先導(dǎo)資金(NKYJ-15-15) 北京韭菜安全生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)研究及科技示范基地建設(shè)(Z151100001215009)
【分類號】：S433.89
【正文快照】： Cloning,Sequence Analysis and Expression Profile of an OdorantBinding Protein Gene in Western Flower Thrips(Frankliniella occidentalis)ZHANG Zhi-ke1,2,WU Sheng-yong2,LEI Zhong-ren2,3 0引言【研究意義】西花薊馬(Frankliniella occidentalis)隸屬纓翅目(Thysano

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本文編號：668108