本文關(guān)鍵詞：小菜蛾P(guān)GRP-SA的體外表達及介導(dǎo)酚氧化酶活力的研究

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【摘要】：肽聚糖識別蛋白(Peptidoglycan Recognition Proteins,PGRPs)是可以識別肽聚糖和含肽聚糖的細菌的一類模式識別受體,在介導(dǎo)酚氧化酶級聯(lián)反應(yīng)中起著重要的作用。本研究以實驗室克隆的小菜蛾P(guān)x PGRP-SA(Gen Bank No.EU399240)為基礎(chǔ),RT-PCR克隆了其開放閱讀框(ORF),在原核細胞中獲得了高效重組表達,利用GST一步純化的融合蛋白免疫新西蘭大白兔,制備了抗血清,滴定效價為1∶51200。Western blot檢測表明Micrococcus luteus和Serratia marcescens可以顯著提高Px PGRP-SA在小菜蛾血淋巴中的含量。為了檢測Px PGRP-SA與酚氧化酶PO的活力關(guān)系,本研究將Px PGRP-SA連接到真核表達載體p MT/Bip/V5/His A構(gòu)建真核表達質(zhì)粒p MTAPGRP,轉(zhuǎn)染果蠅S2細胞中,獲得穩(wěn)定的細胞系,硫酸銅誘導(dǎo)獲得表達后用anti-V5純化獲得重組蛋白Px PGRP-SA。將重組蛋白Px PGRP-SA與M.luteus和S.marcescens分別溫育后,可以顯著提高小菜蛾血漿中PO的活力。本研究結(jié)果闡明了重組蛋白Px PGRP-SA在小菜蛾體PO級聯(lián)反應(yīng)中的功能,為進一步研究Px PGRP-SA在小菜蛾體內(nèi)免疫信號通路中的功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院昆蟲學(xué)系廣東省生物農(nóng)藥創(chuàng)制與應(yīng)用重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 小菜蛾 肽聚糖識別蛋白 酚氧化酶 細胞表達
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30900943,1071734) 廣州市科技計劃項目(201509010023)
【分類號】：S433.4
【正文快照】： 在昆蟲天然免疫系統(tǒng)中,模式識別受體(Pattern Recognition Receptors,PRRs)識別非己異物是免疫反應(yīng)的第一步。PRRs由有限數(shù)量的胚系基因編碼,進化上十分保守,對生物體的生存極為重要,其與病原微生物表面的病原體相關(guān)分子模式(Pathogen Associated Molecular Patterns,PAMPs)的

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本文編號：647815