本文關(guān)鍵詞：朱砂葉螨甲氰菊酯抗性和敏感品系生殖力差異及其相關(guān)機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 朱砂葉螨 甲氰菊酯 抗藥性 卵黃原蛋白 卵黃原蛋白受體 生殖力

【摘要】：朱砂葉螨(Tetranychus cinnabarinus)屬于蛛形綱,蜱螨亞綱,真螨目,葉螨科,是一種世界性害螨。該螨能夠?yàn)楹η炎印⒎�、辣椒、馬鈴薯、黃瓜、豆類等多種蔬菜瓜果,也能為害棉花、花卉等經(jīng)濟(jì)作物,其防治具有十分重要的經(jīng)濟(jì)意義。目前,朱砂葉螨的防治仍以化學(xué)防治為主,但殺蟲殺螨劑的長(zhǎng)期施用在導(dǎo)致朱砂葉螨出現(xiàn)嚴(yán)重抗性問題的同時(shí),還誘發(fā)了害蟲再猖獗現(xiàn)象�？剐员O(jiān)測(cè)表明朱砂葉螨已經(jīng)對(duì)菊酯類藥劑產(chǎn)生嚴(yán)重抗藥性,同時(shí),諸多研究表明菊酯類藥劑在田間降解至亞致死劑量時(shí),對(duì)靶標(biāo)生物有毒物興奮效應(yīng),即對(duì)靶標(biāo)生物的生殖力有積極的刺激作用,反而能夠?qū)е掳袠?biāo)生物種群數(shù)量的擴(kuò)大。本實(shí)驗(yàn)室通過長(zhǎng)期的抗性篩選獲得了朱砂葉螨甲氰菊酯抗性品系(Fe R),在飼養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)其種群發(fā)展速度明顯快于同源敏感品系(SS)。本研究以此為切入點(diǎn),重點(diǎn)研究Fe R相對(duì)SS增強(qiáng)的生殖力背后的機(jī)制,為明確有害生物再猖獗的原因提供參考。卵黃原蛋白(Vitellogenin,vg)與卵黃原蛋白受體(Vitellogenin receptor,vgr)是卵生動(dòng)物在卵黃發(fā)生過程中發(fā)揮重要功能的兩種蛋白,它們對(duì)卵母細(xì)胞和卵巢的發(fā)育成熟具有十分重要的意義。理論上,朱砂葉螨vg及vgr蛋白對(duì)朱砂葉螨產(chǎn)卵量等生殖參數(shù)發(fā)揮著決定性的影響作用。針對(duì)朱砂葉螨Fe R與SS品系之間的產(chǎn)卵能力存在顯著差異的現(xiàn)象,本研究從vg與vgr的角度開展了相關(guān)研究,主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1.Fe R日均產(chǎn)卵量在進(jìn)入成螨期第四天達(dá)到頂峰,日均產(chǎn)卵13.00粒;SS日均產(chǎn)卵量在進(jìn)入成螨期第五天達(dá)到頂峰,日均產(chǎn)卵9.64粒;Fe R日均產(chǎn)卵量始終高于SS。Fe R產(chǎn)卵量為173.25粒,SS產(chǎn)卵量為100.92粒。兩品系的產(chǎn)卵量之間存在顯著性差異,Fe R整個(gè)生命周期的產(chǎn)卵總量顯著高于SS。2.通過檢測(cè)朱砂葉螨不同品系vg和vgr在成螨期的含量差異發(fā)現(xiàn),Fe R中vg及vgr兩種蛋白的含量分別顯著高于SS中相應(yīng)蛋白的含量。vg在Fe R和SS中含量分別為0.1617±0.0146μg/mg和0.0904±0.0038μg/mg;vgr在Fe R和SS中含量分別為0.0455±0.0035μg/mg和0.0231±0.0085μg/mg。3.克隆拼接獲得兩條朱砂葉螨vg基因和一條vgr基因,分別命名為Tcvg1,Tcvg2與Tcvgr。Tcvg1全長(zhǎng)5268bp,編碼1755個(gè)氨基酸,Gen Bank登錄號(hào)為KR090058;Tcvg2全長(zhǎng)5253bp,編碼1750個(gè)氨基酸,Gen Bank登錄號(hào)為KR090059;Tcvgr全長(zhǎng)5559bp,編碼1852個(gè)氨基酸。Gen Bank登錄號(hào)為KT180304。Tcvg1,Tcvg2均含有卵黃原蛋白特征保守域Vitellogenin_N,DUF1943,VWD;Tcvgr含有特征保守域LDLa、EGF_CA、LY domain以及NHL重復(fù)子。4.SS與Fe R的Tcvg1,Tcvg2與Tcvgr三條基因在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的檢測(cè)發(fā)育階段內(nèi)的表達(dá)趨勢(shì)大致一致:發(fā)育為成螨前三條基因表達(dá)量均很低,在3日齡雌成螨時(shí)三條基因表達(dá)量猛增到峰值,隨后在10日齡雌成螨體內(nèi)表達(dá)量下降。在產(chǎn)卵前期(0A)和3日齡雌成螨(3A)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)并比較SS與Fe R兩品系間三條基因的m RNA表達(dá)量,結(jié)果表明Fe R品系的Tcvg1,Tcvg2和Tcvgr表達(dá)量均顯著高于SS。本論文研究結(jié)果表明,長(zhǎng)期藥劑脅迫形成的朱砂葉螨甲氰菊酯抗藥性品系,卵黃原蛋白和卵黃原蛋白受體基因上調(diào)表達(dá),其體內(nèi)卵黃原蛋白和卵黃原蛋白受體含量相應(yīng)顯著上升,導(dǎo)致其生殖力顯著提高。該機(jī)制可能是導(dǎo)致有害生物再猖獗的原因之一。
【關(guān)鍵詞】：朱砂葉螨 甲氰菊酯 抗藥性 卵黃原蛋白 卵黃原蛋白受體 生殖力
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S433.7
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 引言11-13
• 第1章 文獻(xiàn)綜述13-17
• 1.1 朱砂葉螨13-14
• 1.2 抗藥性與生殖力的關(guān)系14-15
• 1.3 卵黃原蛋白及其受體相關(guān)研究15-17
• 第2章 朱砂葉螨甲氰菊酯抗性和敏感品系生殖力比較17-21
• 2.1 材料與方法17-19
• 2.1.1 供試朱砂葉螨與豇豆苗17
• 2.1.2 主要工具與儀器17
• 2.1.3 葉碟的制作方法17-18
• 2.1.4 朱砂葉螨產(chǎn)卵量統(tǒng)計(jì)方法18
• 2.1.5 產(chǎn)卵數(shù)據(jù)分析18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析19-20
• 2.3 討論20-21
• 第3章 朱砂葉螨卵黃原蛋白及其受體蛋白含量測(cè)定與比較21-31
• 3.1 材料與方法21-25
• 3.1.1 供試朱砂葉螨21
• 3.1.2 主要試劑及儀器21
• 3.1.3 試劑配制21-22
• 3.1.4 粗酶液制備22
• 3.1.5 牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線制作與總蛋白含量22-23
• 3.1.6 朱砂葉螨卵黃原蛋白及其受體蛋白含量測(cè)定23-24
• 3.1.7 數(shù)據(jù)分析24-25
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析25-28
• 3.2.1 牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線25
• 3.2.2 朱砂葉螨FeR與SS品系樣本總蛋白含量測(cè)定25-26
• 3.2.3 朱砂葉螨SS與FeR品系卵黃原蛋白及其受體蛋白含量測(cè)定26-28
• 3.3 討論28-31
• 第4章 朱砂葉螨卵黃原蛋白及其受體基因cDNA克隆及分析31-49
• 4.1 材料與方法31-40
• 4.1.1 供試朱砂葉螨31
• 4.1.2 主要試劑及儀器31-32
• 4.1.3 常用儲(chǔ)備液以及培養(yǎng)基的配制32-33
• 4.1.4 朱砂葉螨總RNA的提取方法33-34
• 4.1.4.1 提取RNA實(shí)驗(yàn)材料預(yù)處理33
• 4.1.4.2 RNA提取及質(zhì)量檢測(cè)33-34
• 4.1.5 朱砂葉螨卵黃原蛋白及其受體基因克隆34-40
• 4.1.5.1 引物設(shè)計(jì)35-36
• 4.1.5.2 朱砂葉螨卵黃原蛋白及其受體基因cDNA擴(kuò)增36-37
• 4.1.5.3 目的基因片段的克隆和測(cè)序37-40
• 4.1.6 朱砂葉螨卵黃原蛋白及其受體基因的cDNA序列分析40
• 4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析40-47
• 4.2.1 朱砂葉螨總RNA的提取40-41
• 4.2.2 朱砂葉螨卵黃原蛋白及其受體基因的克隆41-44
• 4.2.3 朱砂葉螨Tcvg1,Tcvg2,Tcvgr基因的生物學(xué)信息分析44-47
• 4.3 討論47-49
• 第5章 朱砂葉螨卵黃原蛋白及其受體基因mRNA的相對(duì)定量表達(dá)研究49-63
• 5.1 材料與方法49-52
• 5.1.1 供試朱砂葉螨49
• 5.1.2 主要試劑和儀器49
• 5.1.3 定量PCR引物設(shè)計(jì)49-50
• 5.1.4 總RNA的提取50-51
• 5.1.5 cDNA的反轉(zhuǎn)錄合成51
• 5.1.6 定量引物測(cè)試51
• 5.1.7 朱砂葉螨卵黃原蛋白及其受體基因mRNA的定量檢測(cè)51-52
• 5.1.8 數(shù)據(jù)分析52
• 5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析52-60
• 5.2.1 朱砂葉螨總RNA提取結(jié)果52-54
• 5.2.2 定量引物測(cè)試結(jié)果54-55
• 5.2.3 朱砂葉螨不同發(fā)育歷期的卵黃原蛋白及其受體基因mRNA表達(dá)量分析55-58
• 5.2.4 朱砂葉螨卵黃原蛋白及其受體基因mRNA表達(dá)量在SS與FeR間的差異分析58-60
• 5.3 討論60-63
• 第6章 展望63-65
• 參考文獻(xiàn)65-71
• 在讀期間發(fā)表文章71-73
• 致謝73

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