本文關(guān)鍵詞：四環(huán)素耐藥基因在禽畜糞便、堆肥和土壤中的歸趨，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：細(xì)菌耐藥性是目前全人類面臨的最緊迫的公共衛(wèi)生問題之一。耐藥基因作為一種新型污染物質(zhì),在環(huán)境中的遷移和歸趨日益受到研究者的關(guān)注。四環(huán)素在我國的禽畜養(yǎng)殖業(yè)中用量較大,是一種典型的廣譜抗生素,對四環(huán)素耐藥基因的分型和耐藥機(jī)制研究的較為透徹,但對耐藥基因在環(huán)境中遷移、歸趨規(guī)律等的研究還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。因此,本研究以四環(huán)素耐藥(tet-R)基因和乳糖發(fā)酵型腸桿菌(LFE)為研究對象,采用傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)技術(shù)和現(xiàn)代分子生物技術(shù),研究了上海市2家養(yǎng)豬場和養(yǎng)雞場的禽畜糞便、糞便堆肥和施用堆肥土壤中耐四環(huán)素乳糖發(fā)酵型腸桿菌(TR-LFE)中四環(huán)素耐藥基因的分布以及禽畜糞便、堆肥和土壤中四環(huán)素耐藥基因的變化,得出以下結(jié)論：(1) TR-LFE/LFE比值在豬糞、豬糞堆肥和施用豬糞堆肥的土壤中呈逐級降低趨勢,在雞糞和雞糞堆肥中也是如此。(2)分別從養(yǎng)豬場樣品中和養(yǎng)雞場樣品分離出540株和340株TR-LFE,選取不同耐藥機(jī)制的10種tet-R基因的特異性引物,采用普通PCR方法對分離菌株進(jìn)行了tet-R基因的檢測,發(fā)現(xiàn)養(yǎng)豬場樣品中的485株和養(yǎng)雞場樣品中289株TR-LFE攜帶有1種或1種以上的被檢測的tet-R基因。(3)養(yǎng)豬場分離的TR-LFE中10種tet-R基因的平均檢出率的順序tet(A) tet(B) tet(M) tet(G) tet(C) tet(D), tet(S) tet(O) tet(X)tet(E)。養(yǎng)雞場分離的TR-LFE中10tet-R基因的平均檢出率的大小順序?yàn)閠et(A) tet(B) tet(M) tet(D) tet(G) tet(O) tet(C) tet(E), tet(S), tet(X)。外輸泵基因tet(A)、tet(B)和核糖體保護(hù)蛋白基因tet(M)是本研究中分離的TR-LFE菌株中最主要的tet-R基因。(4)養(yǎng)豬場分離的TR-LFE中,tet(A)+tet(B)、tet(A)+tet(M)和tet(B)+tet(M)是檢出率最高的雙重tet-R基因型；tet(A)+tet(M)和tet(A)+tet(B)是雞糞和堆肥中分離的TR-LFE菌株中雙重tet-R基因檢出率最高的類型。不同來源的TR-LFE中攜帶單重tet-R基因的檢出率順序?yàn)橛棕i糞成豬糞土壤豬糞堆肥,多重tet-R基因的檢出率的大小順序?yàn)樨i堆肥土壤成豬糞幼豬糞。豬糞堆肥中分離的TR-LFE不僅多重tet-R基因檢出率是最高的,而且多重耐藥基因的種類也是最多的。豬糞堆肥和雞糞堆肥中分離的TR-LFE中的單重tet-R基因的種類也最多。(5)養(yǎng)豬場各樣品抽提獲得的總DNA中tet-R基因的檢出率大小順序?yàn)槌韶i糞幼豬糞豬糞堆肥土壤；養(yǎng)雞場中各樣品抽提獲得的總DNA中tet-R基因的檢出率的大小順序?yàn)槌呻u糞幼雞糞雞糞堆肥。(6)采用熒光定量PCR方法對養(yǎng)豬場和養(yǎng)雞場樣品中所含的tet(A)和tet(C)基因的含量進(jìn)行檢測,結(jié)果表明豬糞堆肥中tet(A)和tet(C)基因的含量比新鮮豬糞中的低0～3、1～4個數(shù)量級,土壤中的tet(A)和tet(C)的含量比豬糞堆肥中的均低0～1個數(shù)量級。雞糞堆肥中tet(A)和tet(C)的含量比新鮮糞便中的分別減少了0～4、1～3數(shù)量級。據(jù)此推測tet-R基因在糞便、堆肥和土壤中呈逐級降低的趨勢,堆肥過程可能有利于tet-R基因含量的降低。
【關(guān)鍵詞】：四環(huán)素耐藥基因 乳糖發(fā)酵性腸桿菌 禽畜糞便 堆肥 土壤 PCR 定量PCR
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：X713;X53
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-13
• 英文縮略詞表13-14
• 第1章 緒論14-32
• 1.1 抗生素簡介14-17
• 1.1.1 抗生素的定義14
• 1.1.2 抗生素的種類14-15
• 1.1.3 抗生素的作用機(jī)理15-16
• 1.1.4 環(huán)境中抗生素的來源16
• 1.1.5 國內(nèi)外抗生素的使用情況16-17
• 1.2 四環(huán)素類抗生素簡介17-18
• 1.3 四環(huán)素耐藥基因18-20
• 1.3.1 四環(huán)素耐藥菌的耐藥機(jī)制18-19
• 1.3.2 四環(huán)素耐藥基因的來源19-20
• 1.4 環(huán)境中四環(huán)素耐藥基因的研究情況20-23
• 1.4.1 禽畜養(yǎng)殖中四環(huán)素耐藥基因20-21
• 1.4.2 土壤環(huán)境中的四環(huán)素耐藥基因21-22
• 1.4.3 水環(huán)境中的四環(huán)素耐藥基因22-23
• 1.5 四環(huán)素耐藥基因在環(huán)境中的傳播與擴(kuò)散23-25
• 1.6 環(huán)境中四環(huán)素耐藥基因的去除25-28
• 1.6.1 污水處理廠對四環(huán)素耐藥基因的去除25-27
• 1.6.2 堆肥對四環(huán)素耐藥基因的去除27-28
• 1.7 研究背景與意義28-29
• 1.8 研究內(nèi)容與技術(shù)路線29-32
• 1.8.1 研究方法29-31
• 1.8.2 研究技術(shù)路線31-32
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法32-40
• 2.1 樣品采集32
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料32-33
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑32
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器32-33
• 2.3 定性PCR反應(yīng)33-36
• 2.3.1 培養(yǎng)基配制33-34
• 2.3.2 細(xì)菌培養(yǎng)34
• 2.3.3 細(xì)胞全基因組DNA的提取34
• 2.3.4 PCR反應(yīng)34-36
• 2.3.5 凝膠電泳實(shí)驗(yàn)36
• 2.4 熒光定量PCR36-40
• 2.4.1 樣品中總DNA的提取與DNA濃度測定36
• 2.4.2 定性PCR36
• 2.4.3 標(biāo)準(zhǔn)品濃度36
• 2.4.4 熒光定量PCR反應(yīng)36-37
• 2.4.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線37-40
• 第3章 四環(huán)素耐藥基因在豬糞、豬糞堆肥和土壤中的歸趨40-61
• 3.1 養(yǎng)豬場各樣品中的耐四環(huán)素乳糖發(fā)酵型腸桿菌40-45
• 3.1.1 細(xì)菌總數(shù)40-41
• 3.1.2 乳糖發(fā)酵型腸桿菌總數(shù)41-42
• 3.1.3 耐四環(huán)素乳糖發(fā)酵型腸桿菌總數(shù)42-43
• 3.1.4 耐四環(huán)素乳糖發(fā)酵型腸桿菌所占的百分比43-45
• 3.2 養(yǎng)豬場樣品中TR-LFE中tet-R基因型的檢出情況45-54
• 3.2.1 攜帶所檢測的tet-R基因的TR-LFE總數(shù)45
• 3.2.2 TR-LFE中所檢測tet-R基因型統(tǒng)計45-50
• 3.2.3 不同季節(jié)各樣品中tet-R基因的檢出情況50-54
• 3.3 養(yǎng)豬場各樣品總DNA中tet-R基因檢出情況54-56
• 3.4 養(yǎng)豬場各樣品中tet-R基因的豐度56-59
• 3.4.1 養(yǎng)豬場各樣品中tet(A)的含量56-58
• 3.4.2 養(yǎng)豬場各樣品中tet(C)的含量58-59
• 3.5 本章小結(jié)59-61
• 第4章 四環(huán)素耐藥基因在雞糞、雞糞堆肥中的歸趨61-76
• 4.1 養(yǎng)雞場各樣品中耐四環(huán)素乳糖發(fā)酵型腸桿菌61-64
• 4.1.1 細(xì)菌總數(shù)61-62
• 4.1.2 乳糖發(fā)酵型腸桿菌總數(shù)62
• 4.1.3 耐四環(huán)素乳糖發(fā)酵型腸桿菌總數(shù)62-63
• 4.1.4 耐四環(huán)素乳糖發(fā)酵型腸桿菌所占的百分比63-64
• 4.2 養(yǎng)雞場中TR-LFE中tet-R基因型分析64-71
• 4.2.1 攜帶所檢測tet-R基因的TR-LFE總數(shù)64-65
• 4.2.2 TR-LFE中tet-R基因型統(tǒng)計65-68
• 4.2.3 不同季節(jié)各樣品中tet-R基因的檢出情況68-71
• 4.3 養(yǎng)雞場各樣品中總DNA中tet-R基因檢出情況71-72
• 4.4 養(yǎng)雞場各樣品中tet-R基因的豐度72-75
• 4.4.1 養(yǎng)雞場各樣品中tet(A)的含量72-73
• 4.4.2 養(yǎng)雞場各樣品中tet(C)的含量73-75
• 4.5 本章小結(jié)75-76
• 第5章 總結(jié)與展望76-78
• 5.1 總結(jié)76-77
• 5.2 展望與建議77-78
• 附錄1 tet-R基因擴(kuò)增圖譜78-82
• 附錄2 各樣品TR-LFE中的tet-R基因82-93
• 參考文獻(xiàn)93-98
• 致謝98

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊孝臣;;污物堆肥研究[J];黑龍江醫(yī)刊;1958年02期

2 RobertaWirth,常小平,陳潔;介紹堆肥[J];環(huán)境衛(wèi)生工程;1994年02期

3 林可聰;畜禽糞便資源的高溫堆肥處理[J];中國資源綜合利用;2001年10期

4 張亞寧,李國學(xué);化肥作為補(bǔ)充N源對堆肥碳素轉(zhuǎn)化和污染物去除的影響[J];農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報;2005年01期

5 梁晶;呂子文;方海蘭;;園林綠色廢棄物堆肥處理的國外現(xiàn)狀與我國的出路[J];中國園林;2009年04期

6 王玉軍;邢志賢;張秀芳;侯志廣;趙曉松;竇森;周米平;;便攜式氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀現(xiàn)場測定畜禽糞便堆肥中揮發(fā)性有機(jī)物[J];分析化學(xué);2012年06期

7 徐鵬翔;王大鵬;田學(xué)志;齊運(yùn)才;楊明;;國內(nèi)外堆肥翻拋機(jī)發(fā)展概況與應(yīng)用[J];環(huán)境工程;2013年S1期

8 ;高溫堆肥實(shí)驗(yàn)報告[J];衛(wèi)生研究;1975年01期

9 胡宏裕,施伯成;城市生活垃圾處理機(jī)械的研制和堆肥利用探討[J];糧油加工與食品機(jī)械;1985年04期

10 彭定一;邵軍;;城市垃圾的堆肥處理[J];中國紡織大學(xué)學(xué)報;1989年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林可聰;;畜禽糞便資源的高溫堆肥處理[A];第八屆全國青年土壤暨第三屆全國青年植物營養(yǎng)與肥料科學(xué)工作者學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2002年

2 邱家洲;黃游;陳玲;;植物生長響應(yīng)與污泥堆肥施加量間的關(guān)系初探[A];2005中國可持續(xù)發(fā)展論壇——中國可持續(xù)發(fā)展研究會2005年學(xué)術(shù)年會論文集（下冊）[C];2005年

3 張瑞萍;夏美茹;任素櫻;劉雙祿;;不同堆肥材料配比對堆肥質(zhì)量的影響[A];2007自然科學(xué)學(xué)術(shù)論文（土壤肥料與農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展）[C];2007年

4 蘇紹瑋;陳尊賢;;禽畜糞堆肥品質(zhì)及施用量對水稻產(chǎn)量及銅鋅吸收量之影響[A];中國土壤學(xué)會第十一屆全國會員代表大會暨第七屆海峽兩岸土壤肥料學(xué)術(shù)交流研討會論文集（上）[C];2008年

5 馬君;;牛糞尿有氧堆肥最佳工藝參數(shù)的篩選[A];首屆中國奶業(yè)大會論文集(上冊)[C];2010年

6 黃泰祥;蘇紹瑋;張顥嚴(yán);黃正介;陳尊賢;;堆肥銅鋅施用后對小白菜及水稻質(zhì)量之影響[A];面向未來的土壤科學(xué)（上冊）——中國土壤學(xué)會第十二次全國會員代表大會暨第九屆海峽兩岸土壤肥料學(xué)術(shù)交流研討會論文集[C];2012年

7 陳仁炫;吳正宗;邱梅玲;;臺灣廚余之處理及廚余堆肥之質(zhì)量評估[A];面向未來的土壤科學(xué)（中冊）——中國土壤學(xué)會第十二次全國會員代表大會暨第九屆海峽兩岸土壤肥料學(xué)術(shù)交流研討會論文集[C];2012年

8 金珠理達(dá);王順利;劉克鋒;王紅利;;堆肥微生物研究進(jìn)展[A];微生物實(shí)用技術(shù)生態(tài)環(huán)境應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

9 李吉進(jìn);鄒國元;王美菊;王美玲;;雞糞高溫堆肥填充料研究[A];第九屆中國青年土壤科學(xué)工作者學(xué)術(shù)討論會暨第四屆中國青年植物營養(yǎng)與肥料科學(xué)工作者學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2004年

10 李芳;勇偉;白雪薇;劉倩;;添加微生物菌劑和尿素對落葉堆肥的影響[A];2011北京園林綠化與生物多樣性保護(hù)[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 中國農(nóng)村可再生能源考察團(tuán)提供;堆肥：畜禽糞便的好去處[N];農(nóng)民日報;2002年

2 鄭秀滿;變廢為寶——日本的堆肥好氧發(fā)酵處理技術(shù)[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2007年

3 李國江;日本奶牛場的環(huán)保型堆肥處理體系[N];東方城鄉(xiāng)報;2006年

4 王麗英;蔬菜廢棄物是資源而非廢物[N];河南科技報;2014年

5 陳伯華;畜禽糞便污染物的還田對策[N];瓜果蔬菜報.農(nóng)業(yè)信息周刊;2005年

6 本報記者 周燕芬;畜禽糞便綜合利用方法多[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報;2010年

7 記者 張翰軒;看垃圾如何變廢為寶[N];首都建設(shè)報;2010年

8 本報記者 陳凡;北京是否會變垃圾圍城[N];北京科技報;2005年

9 本報記者 侯永鋒;一個外國人在沈陽的垃圾源頭分類實(shí)驗(yàn)[N];遼寧日報;2007年

10 李季;固體廢物循環(huán)利用模式多樣[N];中國國門時報;2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊巖;蔬菜廢棄物堆肥和原位還田研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 曹云娥;秸軒生物反應(yīng)堆和堆肥改善微咸水灌溉下設(shè)施土壤和黃瓜生長的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

3 李吉進(jìn);畜禽糞便高溫堆肥機(jī)理與應(yīng)用研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

4 余震;五氯酚污染土壤的堆肥修復(fù)及其微生物群落組成研究[D];湖南大學(xué);2012年

5 肖勇;基于分子生物學(xué)技術(shù)的堆肥微生物群落、功能與應(yīng)用研究[D];湖南大學(xué);2011年

6 劉擊;堆肥對菲及三環(huán)唑污染土壤修復(fù)研究[D];浙江大學(xué);2007年

7 張璐;園林綠化廢棄物堆肥化的過程控制及其產(chǎn)品改良與應(yīng)用研究[D];北京林業(yè)大學(xué);2015年

8 王洪波;生態(tài)堆肥反應(yīng)器的污染物去除特性研究及應(yīng)用示范[D];西安建筑科技大學(xué);2009年

9 劉燦;電化學(xué)傳感器檢測堆肥微生物及幾種典型環(huán)境污染物的研究[D];湖南大學(xué);2012年

10 徐大兵;豬糞—秸稈堆肥提取液促進(jìn)植物生長和抑制土傳病原菌效果及其作用機(jī)制[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭東坡;死豬堆肥關(guān)鍵影響參數(shù)的試驗(yàn)研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

2 耿鳳展;番茄秸稈高溫堆肥基質(zhì)對番茄生長影響的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

3 馬海霞;堆肥生境微生物區(qū)系動態(tài)變化和優(yōu)勢絲狀真菌胞外酶系功能分析[D];山東大學(xué);2015年

4 姚武;畜糞蚯蚓堆肥中腐殖質(zhì)形成及其結(jié)合態(tài)重金屬變化規(guī)律和機(jī)理研究[D];杭州師范大學(xué);2015年

5 王浩;園林綠化廢棄物堆肥制備屋頂綠化栽培基質(zhì)技術(shù)初步研究[D];杭州師范大學(xué);2015年

6 崔曉文;堆肥中新菌的分離鑒定及其鉻還原特性研究[D];上海海洋大學(xué);2015年

7 涂永成;干旱礦區(qū)復(fù)合微生物菌肥土壤改良實(shí)驗(yàn)研究[D];中國礦業(yè)大學(xué);2015年

8 龔改林;貂糞堆肥微生物復(fù)合菌劑的制備及效果評價[D];大連理工大學(xué);2015年

9 張大璐;青霉素菌絲體堆肥研究[D];河北科技大學(xué);2014年

10 李思琦;應(yīng)用PCR-DGGE分析添加菌劑對堆肥微生物群落多樣性的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：四環(huán)素耐藥基因在禽畜糞便、堆肥和土壤中的歸趨，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：506830