超氧化物歧化酶是清除自由基及抗氧化最重要的酶，是研究自由基生命科學的奠基石。本研究利用低溫PCR技術使已得到的超氧化物歧化酶基因發(fā)生隨機突變，突變酶在大腸桿菌中進行表達，鑒定酶活性，篩選高酶活菌株。主要研究內(nèi)容和成果如下： 1、將目的基因成功插入克隆載體：以本實驗室保存的質(zhì)粒pREP5N-MnSOD為模板，利用MnSOD特異性引物，通過低溫PCR方法對超氧化物歧化酶基因進行PCR擴增，將6個擴增片段分別插入PMD18-T Vector*1，構建了克隆載體。 2、構建了表達載體pPM1-pPM6：分別將克隆載體上的低溫片段經(jīng)正常退火溫度（52℃）PCR擴增，擴增產(chǎn)物與載體pREP5N分別進行雙酶切，連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.coli DH5α中，經(jīng)PCR及酶切鑒定，最終成功構建表達載體pPM1-pPM6。 3、目的基因序列及蛋白結構分析結果：將目的基因序列與已知大豆MnSOD基因序列比對分析，結果表明，基因序列一致性平均為86.57%，氨基酸序列同源性平均為82.58%。利用蛋白質(zhì)結構分析軟件對其結構進行分析，結果表明六種蛋白屬于SOD-Mn型超氧化物歧化酶蛋白。 4、獲得了E.c...

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一章 文獻綜述
    1.1 超氧化物歧化酶的概述
        1.1.1 超氧化物歧化酶的簡介
        1.1.2 超氧化物歧化酶的分類和分布
        1.1.3 超氧化物歧化酶的來源及制備
        1.1.4 超氧化物歧化酶的作用機理
    1.2 超氧化物歧化酶的分子結構及理化性質(zhì)
        1.2.1 超氧化物歧化酶的分子結構
        1.2.2 超氧化物歧化酶的理化性質(zhì)
    1.3 超氧化物歧化酶的應用
        1.3.1 超氧化物歧化酶在醫(yī)學方面的應用
        1.3.2 超氧化物歧化酶在化妝品中的應用
        1.3.3 超氧化物歧化酶在食品領域應用研究現(xiàn)狀
    1.4 酶分子的定向進化
        1.4.1 易錯 PCR 技術
        1.4.2 DNA 改組技術
        1.4.3 序列飽和突變
        1.4.4 低溫 PCR 技術
    1.5 超氧化物歧化酶的研究動態(tài)
    1.6 本研究的目的及意義
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
第三章 結果與分析
    3.1 超氧化物歧化酶基因低溫 PCR 擴增結果
    3.2 低溫 PCR 擴增產(chǎn)物表達載體的構建及鑒定
    3.3 目的基因序列，編碼序列分析以及蛋白結構分析
    3.4 目的基因在大腸桿菌中的誘導及蛋白檢測
    3.5 重組轉(zhuǎn)化子的酶活檢測
第四章 討論
第五章 結論
參考文獻
附錄A
附錄B
作者簡介
致謝



本文編號：3973371