研究背景、存在的科學(xué)問(wèn)題及研究意義：昆蟲(chóng)的發(fā)育過(guò)程受到三大激素：蛻皮激素(20-羥基蛻皮酮,20-Hydroxyecdysone,20E),保幼激素(Juvenile hormone, JH)以及胰島素(insulin)共同調(diào)控。其中20E是一種重要的昆蟲(chóng)激素,它在昆蟲(chóng)蛻皮變態(tài)過(guò)程中起著重要的作用。20E以自由擴(kuò)散的方式進(jìn)入細(xì)胞核結(jié)合蛻皮激素核受體(ecdysone receptor, EcR), EcR結(jié)合超氣門蛋白(ultraspiracle protein, USP)形成異二聚體,啟動(dòng)蛻皮激素接受子3(Hormone receptor 3, HR3),以及Broad等一系列基因轉(zhuǎn)錄,經(jīng)過(guò)級(jí)聯(lián)信號(hào)傳遞啟動(dòng)蛻皮和變態(tài)的生理過(guò)程。最近的研究發(fā)現(xiàn)20E在基因組信號(hào)通路啟動(dòng)前會(huì)先啟動(dòng)G蛋白偶聯(lián)受體(G protein coupled receptors, GPCR)介導(dǎo)的非基因組信號(hào)通路,引起包括鈣離子內(nèi)流和蛋白質(zhì)磷酸化。20E通過(guò)蛻皮激素響應(yīng)的GPCR (Ecdysone response G protein coupled receptors, ErGPCR),經(jīng)過(guò)磷脂酶C以及蛋白激酶...

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 前言
    一. 激素協(xié)同調(diào)控昆蟲(chóng)的發(fā)育
        1. 蛻皮激素的核受體途徑
        2. 蛻皮激素的膜受體途徑
    二. G蛋白偶聯(lián)受體及其脫敏機(jī)制
        1. G蛋白偶聯(lián)受體
        2. GPCR的脫敏機(jī)制
        3. Arrestins在蛋白偶聯(lián)受體中的作用
    三. 胰島素信號(hào)通路
        1. 胰島素對(duì)昆蟲(chóng)發(fā)育的調(diào)控
        2. 胰島素信號(hào)途徑
    四. 本論文科學(xué)問(wèn)題、研究方案及研究意義
第二章 β-arrestin1參與棉鈴蟲(chóng)蛻皮激素信號(hào)脫敏的機(jī)理研究
    一. 前言
    二. 材料與方法
        1. 材料
        2. 方法
            2.1 qRT-PCR
            2.2 多克隆抗體的制備
            2.3 免疫印跡
            2.4 蟲(chóng)體RNA干擾和激素誘導(dǎo)
            2.5 棉鈴蟲(chóng)表皮細(xì)胞系中干擾和過(guò)表達(dá)
            2.6 免疫共沉淀
            2.7 β-arrestin1磷酸化分析
            2.8 β-arrestin1突變體磷酸化水平檢測(cè)
    三.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1. Arrestins在棉鈴蟲(chóng)中腸中的表達(dá)模式
        2. β-arrestin1生物信息學(xué)分析
        3. β-arrestin1多克隆抗體的制備
        4. β-arrestin1在變態(tài)時(shí)期高表達(dá)
        5. 篩選β-arrestin1干擾片段
        6. β-arrestin1蟲(chóng)體干擾引起變態(tài)異常
        7. β-arrestin1抑制20E信號(hào)通路基因表達(dá)
        8. 20E引起β-arrestin1移位并與ErGPCR1相互作用
        9. ErGPCR-和PKC-信號(hào)介導(dǎo)β-arrestin1磷酸化
        10. Ser170和Ser234位的磷酸化決定β-arrestin1向細(xì)胞膜遷移
    四. 討論
        1. β-arrestin1調(diào)控昆蟲(chóng)變態(tài)過(guò)程
        2. β-arrestin1調(diào)控蛻皮激素信號(hào)的終止
        3. ErGPCR-PKC通路調(diào)控β-arrestin1磷酸化和移位
第三章 蛻皮激素通過(guò)抑制Akt的磷酸化拮抗胰島素信號(hào)
    一. 前言
    二. 材料與方法
        1. 材料
        2. 方法
            2.1 組織中總RNA的提取
            2.2 第一鏈cDNA合成
            2.3 Akt開(kāi)放閱讀框的克隆
            2.4 構(gòu)建PlEx-4-Akt-RFP-HiS重組質(zhì)粒
            2.5 重組質(zhì)粒過(guò)表達(dá)
            2.6 雙鏈RNA的合成
            2.7 免疫印記
    三. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1. Akt基因克隆和序列分析
        2. 干擾Akt增強(qiáng)蛻皮激素引起棉鈴蟲(chóng)表皮細(xì)胞系的凋亡
        3. 20E通過(guò)調(diào)控Akt的磷酸化拮抗insulin途徑
        4. 20E通過(guò)上調(diào)PTEN介導(dǎo)對(duì)Akt磷酸化的抑制
        5. 20E通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子EcRB1以及USP1上調(diào)PTEN的表達(dá)
    四. 討論
        1. 20E通過(guò)上調(diào)PTEN表達(dá)抑制Akt的磷酸化拮抗胰島素途徑
        2. 胰島素信號(hào)是棉鈴蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)控的重要信號(hào)
論文創(chuàng)新點(diǎn)總結(jié)及意義
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3880928