Rab蛋白屬于小G蛋白(small GTPase)超家族的一個(gè)亞家族,在細(xì)胞內(nèi)膜運(yùn)輸?shù)壬磉^(guò)程中起著重要的作用。近年來(lái)在果蠅和蝦等無(wú)脊椎動(dòng)物中的研究表明一些Rab蛋白參與了吞噬作用等細(xì)胞免疫反應(yīng)。本課題組在分析棉鈴蟲(chóng)(Helicoverpa armigera)的血細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組時(shí)鑒定到一個(gè)Rab基因一Rab3,命名為Ha-Rab3。Rab3在突觸囊泡的運(yùn)輸過(guò)程中起著重要的作用。最近在中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)中的一項(xiàng)研究表明Rab3可能也參與先天免疫反應(yīng)的調(diào)控。本試驗(yàn)運(yùn)用了RNAi等方法研究了Ha-Rab3基因在棉鈴蟲(chóng)先天免疫中的功能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1、棉鈴蟲(chóng)Ha-Rab3基因的克隆及序列分析 從棉鈴蟲(chóng)血細(xì)胞中克隆到Ha-Rab3基因的全長(zhǎng)序列。該序列長(zhǎng)678bp,其開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)657bp,編碼218個(gè)氨基酸殘基。序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)Rab3在不同物種中高度保守,Ha-Rab3與家蠶(Bombyx mori) Rab3相似性最高,達(dá)到96%,與哺乳動(dòng)物小鼠(Mus musculus) Rab3C的相似性也高達(dá)81%。結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)表明該蛋白無(wú)信號(hào)肽序列,含有一個(gè)Rab結(jié)構(gòu)域(...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1. 前言
    1.1 昆蟲(chóng)的免疫
        1.1.1 體液免疫
        1.1.2 細(xì)胞免疫
    1.2 小G蛋白(small GTP-binding proteins)
        1.2.1 小G蛋白的簡(jiǎn)介
        1.2.2 小G蛋白與免疫
    1.3 本研究的背景及意義
2. 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 試蟲(chóng)
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 引物序列
        2.1.4 試驗(yàn)儀器
        2.1.5 溶液和培養(yǎng)基的配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 Ha-Rab3基因的克隆
        2.2.2 序列分析
        2.2.3 組織特異表達(dá)
        2.2.4 免疫刺激后棉鈴蟲(chóng)血細(xì)胞中Ha-Rab3基因表達(dá)量的變化
        2.2.5 dsRNA的合成
        2.2.6 注射dsRNA
        2.2.7 敲降效果的檢驗(yàn)
        2.2.8 吞噬率及吞噬指數(shù)的測(cè)定
        2.2.9 菌載量的測(cè)定
        2.2.10 結(jié)節(jié)的測(cè)定
        2.2.11 漿細(xì)胞延展率的測(cè)定
        2.2.12 包囊指數(shù)的測(cè)定
3. 結(jié)果與分析
    3.1 Ha-Rab3基因的克隆
    3.2 Ha-Rab3基因的同源序列比對(duì)及分析
    3.3 Ha-Rab3基因的組織特異表達(dá)分析
    3.4 免疫刺激后棉鈴蟲(chóng)血細(xì)胞中Ha-Rab3基因表達(dá)量的變化
        3.4.1 大腸桿菌刺激對(duì)血細(xì)胞中Ha-Rab3表達(dá)量的影響
        3.4.2 金黃色葡萄球菌刺激對(duì)血細(xì)胞中Ha-Rab3表達(dá)量的影響
        3.4.3 凝膠珠刺激對(duì)血細(xì)胞中Ha-Rab3表達(dá)量的影響
    3.5 RNAi分析
        3.5.1 干擾效果的檢驗(yàn)
        3.5.2 敲降Ha-Rab3對(duì)棉鈴蟲(chóng)血細(xì)胞吞噬能力的影響
        3.5.3 敲降Ha-Rab3對(duì)棉鈴蟲(chóng)結(jié)節(jié)形成的影響
        3.5.4 敲降Ha-Rab3對(duì)棉鈴蟲(chóng)血淋巴清除細(xì)菌能力的影響
        3.5.5 敲降Ha-Rab3對(duì)棉鈴蟲(chóng)血細(xì)胞包囊能力的影響
        3.5.6 敲降Ha-Rab3對(duì)血細(xì)胞延展能力的影響
4. 討論
    4.1 干擾效果的影響因素
    4.2 Ha-Rab3參與調(diào)控棉鈴蟲(chóng)血細(xì)胞的吞噬作用
    4.3 Ha-Rab3參與調(diào)控棉鈴蟲(chóng)血細(xì)胞的包囊作用
    4.4 Ha-Rab3通過(guò)介導(dǎo)漿細(xì)胞的延展來(lái)調(diào)控棉鈴蟲(chóng)的吞噬、包囊等細(xì)胞免疫反應(yīng)
    4.5 Ha-Rab3與結(jié)節(jié)作用
    4.6 研究展望
參考文獻(xiàn)
已發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3853461