Rab蛋白屬于小G蛋白(small GTPase)超家族的一個亞家族,在細胞內(nèi)膜運輸?shù)壬磉^程中起著重要的作用。近年來在果蠅和蝦等無脊椎動物中的研究表明一些Rab蛋白參與了吞噬作用等細胞免疫反應。本課題組在分析棉鈴蟲(Helicoverpa armigera)的血細胞轉(zhuǎn)錄組時鑒定到一個Rab基因一Rab3,命名為Ha-Rab3。Rab3在突觸囊泡的運輸過程中起著重要的作用。最近在中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)中的一項研究表明Rab3可能也參與先天免疫反應的調(diào)控。本試驗運用了RNAi等方法研究了Ha-Rab3基因在棉鈴蟲先天免疫中的功能。實驗結(jié)果如下： 1、棉鈴蟲Ha-Rab3基因的克隆及序列分析 從棉鈴蟲血細胞中克隆到Ha-Rab3基因的全長序列。該序列長678bp,其開放閱讀框長657bp,編碼218個氨基酸殘基。序列比對發(fā)現(xiàn)Rab3在不同物種中高度保守,Ha-Rab3與家蠶(Bombyx mori) Rab3相似性最高,達到96%,與哺乳動物小鼠(Mus musculus) Rab3C的相似性也高達81%。結(jié)構(gòu)域預測表明該蛋白無信號肽序列,含有一個Rab結(jié)構(gòu)域(...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
1. 前言
    1.1 昆蟲的免疫
        1.1.1 體液免疫
        1.1.2 細胞免疫
    1.2 小G蛋白(small GTP-binding proteins)
        1.2.1 小G蛋白的簡介
        1.2.2 小G蛋白與免疫
    1.3 本研究的背景及意義
2. 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 試蟲
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 引物序列
        2.1.4 試驗儀器
        2.1.5 溶液和培養(yǎng)基的配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 Ha-Rab3基因的克隆
        2.2.2 序列分析
        2.2.3 組織特異表達
        2.2.4 免疫刺激后棉鈴蟲血細胞中Ha-Rab3基因表達量的變化
        2.2.5 dsRNA的合成
        2.2.6 注射dsRNA
        2.2.7 敲降效果的檢驗
        2.2.8 吞噬率及吞噬指數(shù)的測定
        2.2.9 菌載量的測定
        2.2.10 結(jié)節(jié)的測定
        2.2.11 漿細胞延展率的測定
        2.2.12 包囊指數(shù)的測定
3. 結(jié)果與分析
    3.1 Ha-Rab3基因的克隆
    3.2 Ha-Rab3基因的同源序列比對及分析
    3.3 Ha-Rab3基因的組織特異表達分析
    3.4 免疫刺激后棉鈴蟲血細胞中Ha-Rab3基因表達量的變化
        3.4.1 大腸桿菌刺激對血細胞中Ha-Rab3表達量的影響
        3.4.2 金黃色葡萄球菌刺激對血細胞中Ha-Rab3表達量的影響
        3.4.3 凝膠珠刺激對血細胞中Ha-Rab3表達量的影響
    3.5 RNAi分析
        3.5.1 干擾效果的檢驗
        3.5.2 敲降Ha-Rab3對棉鈴蟲血細胞吞噬能力的影響
        3.5.3 敲降Ha-Rab3對棉鈴蟲結(jié)節(jié)形成的影響
        3.5.4 敲降Ha-Rab3對棉鈴蟲血淋巴清除細菌能力的影響
        3.5.5 敲降Ha-Rab3對棉鈴蟲血細胞包囊能力的影響
        3.5.6 敲降Ha-Rab3對血細胞延展能力的影響
4. 討論
    4.1 干擾效果的影響因素
    4.2 Ha-Rab3參與調(diào)控棉鈴蟲血細胞的吞噬作用
    4.3 Ha-Rab3參與調(diào)控棉鈴蟲血細胞的包囊作用
    4.4 Ha-Rab3通過介導漿細胞的延展來調(diào)控棉鈴蟲的吞噬、包囊等細胞免疫反應
    4.5 Ha-Rab3與結(jié)節(jié)作用
    4.6 研究展望
參考文獻
已發(fā)表論文
致謝



本文編號：3853461