發(fā)布時(shí)間：2023-10-11 22:19

　　微生物溯源(Microbial Source Tracking, MST)是指通過比較被污染樣品和可能污染源中的糞便污染指示微生物的差異或某種生物標(biāo)記的有無來判斷被污染樣品和可能污染源之間存在的聯(lián)系，從而確定污染來源的方法。本文以畜禽養(yǎng)殖污染中的豬源污染為研究對(duì)象，分別研究了定量檢測水體中豬源宿主擬桿菌生物標(biāo)記的方法，分析了生物標(biāo)記Pig-2-Bac的穩(wěn)定性，通過構(gòu)建微系統(tǒng)和地表徑流實(shí)驗(yàn)分別研究了不同溫度條件儲(chǔ)存下和在地表徑流過程中Pig-2-Bac與各污染指標(biāo)的相關(guān)性。 首先以豬排泄物構(gòu)建的污染水體為研究對(duì)象，通過寄主特異性引物識(shí)別構(gòu)建污染水體中豬源擬桿菌16S rRNA基因的特異性基因標(biāo)記(又稱為特異性生物標(biāo)記),并根據(jù)特異性生物標(biāo)記的定量檢測，確定糞便擬桿菌的污染量。在比較了3種不同的DNA提取方法的基礎(chǔ)上，選擇了基于CTAB的提取方法，并通過該方法的改進(jìn)，建立了一種適合水樣中提取豬排泄物總DNA的改良CTAB法。3對(duì)不同的豬源寄主特異性引物專一性驗(yàn)證結(jié)果表明，引物3(Bac41F/Bac163R)的特異性好于引物1(Bac41F/PS183R)和引物2(Bac32F/Bac10...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 緒論
    1.1 畜禽養(yǎng)殖對(duì)我國水體污染及微生物溯源應(yīng)用現(xiàn)狀
        1.1.1 畜禽養(yǎng)殖對(duì)我國水體污染現(xiàn)狀和主要問題
        1.1.2 微生物溯源技術(shù)在水體糞便污染溯源中的應(yīng)用現(xiàn)狀
    1.2 微生物溯源技術(shù)的研究進(jìn)展
        1.2.1 微生物溯源主要技術(shù)和方法
        1.2.2 擬桿菌糞便溯源技術(shù)的研究進(jìn)展
    1.3 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)在檢測環(huán)境微生物中的應(yīng)用現(xiàn)狀
        1.3.1 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 簡介
        1.3.2 利用 qPCR 對(duì)環(huán)境微生物進(jìn)行檢測的研究進(jìn)展
    1.4 本研究的目的意義及主要內(nèi)容
        1.4.1 研究的目的及意義
        1.4.2 研究的主要內(nèi)容與技術(shù)路線
第二章 利用 qPCR 定量檢測豬場廢水中擬桿菌生物標(biāo)記方法的建立
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 試劑與儀器
        2.2.2 樣品采集
        2.2.3 樣品預(yù)處理及總基因組提取
        2.2.4 以豬為宿主擬桿菌特異性生物標(biāo)記的 PCR 擴(kuò)增
        2.2.5 PCR 產(chǎn)物測序比對(duì)驗(yàn)證引物特異性
        2.2.6 以豬為宿主擬桿菌特異性生物標(biāo)記的 qPCR 擴(kuò)增
        2.2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作及擴(kuò)增效率的確定
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 基因組提取結(jié)果
        2.3.2 不同引物特異性驗(yàn)證結(jié)果
        2.2.3 qPCR 檢測方法靈敏性分析結(jié)果
        2.3.4 qPCR 檢測混合污水中以豬為宿主擬桿菌特異性生物標(biāo)記結(jié)果
    2.4 討論與結(jié)論
第三章 光照和溫度對(duì)微系統(tǒng)中 Pig-2-Bac 穩(wěn)定性影響分析
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)微系統(tǒng)設(shè)計(jì)
        3.2.2 樣品采集
        3.2.3 豬源宿主擬桿菌特異性生物標(biāo)記 Pig-2-Bac 的檢測
        3.2.4 分析方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 光照對(duì) Pig-2-Bac 穩(wěn)定性的影響分析
        3.3.2 溫度對(duì) Pig-2-Bac 穩(wěn)定性的影響分析
    3.4 討論與結(jié)論
第四章 微系統(tǒng)中 Pig-2-Bac 與各污染指標(biāo)的相關(guān)性分析
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)微系統(tǒng)的設(shè)計(jì)及樣品采集
        4.2.2 可培養(yǎng)微生物數(shù)量測定
        4.2.3 化學(xué)指標(biāo)的測定
        4.2.4 生物標(biāo)記 Pig-2-Bac 拷貝數(shù)的測定
        4.2.5 分析方法
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 Pig-2-Bac 拷貝數(shù)及可培養(yǎng)微生物的變化規(guī)律
        4.3.2 各溫度處理微系統(tǒng)中化學(xué)指標(biāo)的變化規(guī)律
        4.3.3 各溫度處理微系統(tǒng)中 Pig-2-Bac 拷貝數(shù)與各指標(biāo)的相關(guān)性
    4.4 討論與結(jié)論
第五章 豬場廢水在地表流動(dòng)過程中 Pig-2-Bac 與各污染指標(biāo)的相關(guān)性分析
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        5.2.2 測定指標(biāo)及方法
        5.2.3 數(shù)據(jù)分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 采樣期內(nèi)天氣情況
        5.3.2 取樣點(diǎn)位置設(shè)定
        5.3.3 各指標(biāo)測定結(jié)果及變化規(guī)律分析
        5.3.4 特異性生物標(biāo)記與各化學(xué)指標(biāo)在兩個(gè)過程中的相關(guān)性分析
    5.4 討論
第六章 全文結(jié)論
第七章 研究展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號(hào)：3852899