轉(zhuǎn)基因技術(shù)在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的商業(yè)化應(yīng)用加速了全球農(nóng)業(yè)產(chǎn)出,徹底顛覆了當(dāng)今世界農(nóng)業(yè)格局,已逐步成為各國(guó)農(nóng)業(yè)科技競(jìng)爭(zhēng)的焦點(diǎn)。伴隨轉(zhuǎn)基因作物種植面積的激增與技術(shù)研發(fā)投入的日益擴(kuò)大,關(guān)于轉(zhuǎn)基因植物及其制品對(duì)人體健康和生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生的潛在危害也引起了社會(huì)各界的廣泛關(guān)注。為此,世界各國(guó)紛紛加強(qiáng)了對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的法制監(jiān)管,同時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)基因檢測(cè)提出了更為嚴(yán)格的要求。當(dāng)前不同國(guó)家和地區(qū)的轉(zhuǎn)基因標(biāo)識(shí)制度、閾值范圍和管理方式上存在較大差異,直接影響了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的進(jìn)出口檢驗(yàn)、國(guó)際貿(mào)易互認(rèn)等問(wèn)題。近年來(lái),由于轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物種植面積的激增,以及非法種植與基因橫向漂移等問(wèn)題,轉(zhuǎn)基因檢測(cè)需求日趨多樣化、復(fù)雜化。然而,現(xiàn)有的以PCR為主的轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)效率低下、策略單一,存在多方面的技術(shù)局限性,很難滿足農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展的需要。尤其是轉(zhuǎn)基因盲檢技術(shù)的缺失,嚴(yán)重限制了政府監(jiān)管的能力,也制約了轉(zhuǎn)基因技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。因此開發(fā)精準(zhǔn)、高效、高通量的轉(zhuǎn)基因盲檢方法,對(duì)完善現(xiàn)有的轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)體系,促進(jìn)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的健康發(fā)展,滿足生物監(jiān)管需求以及支撐轉(zhuǎn)基因標(biāo)識(shí)管理制度等方面意義重大。本研究以轉(zhuǎn)基因大豆為研究對(duì)象,利用差減雜交策略富集外源轉(zhuǎn)基...

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 緒論
    1.1 轉(zhuǎn)基因技術(shù)應(yīng)用與轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物發(fā)展概況
    1.2 轉(zhuǎn)基因生物安全概述
        1.2.1 轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的育種優(yōu)勢(shì)
        1.2.2 轉(zhuǎn)基因技術(shù)應(yīng)用的潛在安全隱患
        1.2.3 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的標(biāo)識(shí)管理制度
    1.3 轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)狀與展望
        1.3.1 基于核酸水平的檢測(cè)
        1.3.2 基于蛋白水平的檢測(cè)
        1.3.3 轉(zhuǎn)基因檢測(cè)相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)
        1.3.4 轉(zhuǎn)基因檢測(cè)領(lǐng)域現(xiàn)階段面臨的問(wèn)題
    1.4 抑制性差減雜交
    1.5 高通量測(cè)序技術(shù)
    1.6 本研究的目的及意義
第二章 轉(zhuǎn)基因盲檢方法的初步建立
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 相關(guān)引物序列
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 大豆基因組提取
        2.2.2 基因組DNA質(zhì)量評(píng)價(jià)
        2.2.3 抑制性差減雜交
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 大豆基因組DNA純度及完整性
        2.3.2 大豆基因組酶切
        2.3.3 接頭連接效率檢測(cè)
        2.3.4 巢式PCR擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.5 富集產(chǎn)物的靈敏度檢測(cè)
    2.4 本章小結(jié)
第三章 多重轉(zhuǎn)基因大豆的混樣盲檢
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 相關(guān)引物序列
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 轉(zhuǎn)基因DNA序列數(shù)據(jù)庫(kù)的建立
        3.2.2 大豆基因組DNA的提取
        3.2.3 基因組DNA質(zhì)量評(píng)價(jià)
        3.2.4 抑制性差減雜交
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 轉(zhuǎn)基因DNA序列數(shù)據(jù)庫(kù)
        3.3.2 大豆基因組純度及完整性分析
        3.3.3 大豆基因組酶切
        3.3.4 轉(zhuǎn)基因大豆接頭連接效率檢測(cè)
        3.3.5 巢式PCR擴(kuò)增結(jié)果
        3.3.6 富集產(chǎn)物的靈敏度檢測(cè)
        3.3.7 基于PCR-free的高通量測(cè)序及生物信息學(xué)分析結(jié)果
    3.4 本章小結(jié)
第四章 轉(zhuǎn)基因盲檢技術(shù)參數(shù)的優(yōu)化
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 大豆基因組DNA的粗提與純化
        4.2.2 基因組DNA質(zhì)量評(píng)價(jià)
        4.2.3 抑制性差減雜交
        4.2.4 鏈酶親和素磁珠對(duì)富集產(chǎn)物的捕獲
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 基因組DNA質(zhì)量評(píng)價(jià)
        4.3.2 酶切驗(yàn)證
        4.3.3 接頭連接效率檢測(cè)
        4.3.4 巢式PCR擴(kuò)增
        4.3.5 高通量測(cè)序及生物信息學(xué)分析
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3821815