大草蛉(Chrysopapallens)作為重要的捕食性天敵昆蟲,在農(nóng)林害蟲生物防治中具有非常廣闊的應用前景。營養(yǎng)豐富且價廉的飼料與高效的飼養(yǎng)體系是實現(xiàn)大草蛉商業(yè)化生產(chǎn)的前提。目前大草蛉飼養(yǎng)過程中,當飼料營養(yǎng)不平衡時,或通過冷藏延長產(chǎn)品貨架期時,常會碰到產(chǎn)卵量減少,卵孵化率下降等問題,嚴重制約生產(chǎn)與應用。研究大草蛉生殖遺傳特性,有利于發(fā)展調(diào)控大草蛉產(chǎn)卵的技術與方法,提高飼養(yǎng)效率,促進商業(yè)化生產(chǎn)。胰島素樣肽和信號通路在昆蟲生殖、代謝等生理過程中發(fā)揮非常重要的功能。本文圍繞胰島素樣肽和信號通路調(diào)控大草蛉生殖的分子模式進行研究。所獲得的主要研究結果如下:1.牛胰島素對大草蛉產(chǎn)卵的促進作用注射牛胰島素可提高雌蟲卵黃原蛋白的表達量。首先證明了將牛胰島素注射到雌性大草蛉卵黃發(fā)生前,可以加速卵巢的成熟,增加卵黃原蛋白(Vg)的表達,提高生殖能力和增強蛋白酶活性。2.牛胰島素對冷藏后大草蛉產(chǎn)卵的恢復作用通過低溫貯藏不同天數(shù)的大草蛉的蛹,冷藏天數(shù)越多,其生殖能力越低。解剖低溫貯藏羽化第5天的大草蛉雌蟲進行卵巢觀察,未冷藏的卵巢發(fā)育已經(jīng)成熟,冷藏后的卵巢發(fā)育不均勻,極端的卵巢發(fā)育成最初未成熟的狀態(tài)。冷藏后...

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 大草蛉在害蟲生物防治中的研究進展
        1.1.1 大草蛉的生物學
        1.1.2 大草蛉人工飼養(yǎng)與釋放技術進展
        1.1.3 大草蛉規(guī)�；a(chǎn)存在的問題
    1.2 胰島素信號通路在昆蟲中的研究
        1.2.1 胰島素信號通路對昆蟲的激素調(diào)控
        1.2.2 胰島素信號通路對昆蟲的生殖研究
    1.3 昆蟲胰島素樣肽(ILPs)的研究進展
    1.4 有關昆蟲卵子發(fā)生的研究
    1.5 ILPs及其信號通路對昆蟲卵子發(fā)生的調(diào)控功能
    1.6 本研究的目的和意義
2 牛胰島素促進大草蛉卵巢發(fā)育和產(chǎn)卵作用
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 主要試劑和藥品
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要溶液的配制
        2.1.5 顯微注射
        2.1.6 檢測Vg基因的表達量
        2.1.7 觀察卵巢發(fā)育形態(tài)
        2.1.8 ELISA法測定大草蛉卵黃原蛋白的表達量
        2.1.9 大草蛉蛋白酶活性測定
    2.2 結果與分析
        2.2.1 牛胰島素促進大草蛉的生殖
        2.2.2 大草蛉卵巢的發(fā)育情況
        2.2.3 牛胰島素注射后雌蟲中Vg的表達量
        2.2.4 注射牛胰島素的大草蛉蛋白酶活性檢測
    2.3 本章小結
3 牛胰島素對冷藏大草蛉生殖力恢復的作用
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 主要試劑和藥品
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要溶液的配制
        3.1.5 大草蛉體內(nèi)ILPs表達量檢測
        3.1.6 大草蛉成蟲酶活性的檢測
        3.1.7 大草蛉生殖指標的統(tǒng)計
        3.1.8 觀察卵巢發(fā)育形態(tài)
    3.2 結果與分析
        3.2.1 冷藏對大草蛉羽化率、生殖力和壽命的影響
        3.2.2 冷藏對大草蛉卵巢發(fā)育的影響
        3.2.3 冷藏對大草蛉消化酶的影響
        3.2.4 牛胰島素對大草蛉卵巢發(fā)育的影響
        3.2.5 牛胰島素對大草蛉生殖力的恢復
        3.2.6 冷藏對ILPs表達量的影響
    3.3 本章小結
4 四個胰島素樣肽調(diào)控大草蛉生殖功能
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 dsRNA的制備
        4.1.3 dsRNA注射
        4.1.4 基因沉默效率的檢測
        4.1.5 檢測干擾基因的生物學指標
        4.1.6 卵巢的發(fā)育情況
        4.1.7 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計
    4.2 結果與分析
        4.2.1 干擾片段RT-PCR擴增
        4.2.2 dsRNA合成電泳結果
        4.2.3 基因沉默效率的分析
        4.2.4 dsCpILP1對大草蛉生殖調(diào)控的結果分析
        4.2.5 dsCpILP2對大草蛉生殖調(diào)控的結果分析
        4.2.6 dsCpILP3對大草蛉生殖調(diào)控的結果分析
        4.2.7 dsCpILP4對大草蛉生殖調(diào)控的結果分析
    4.3 本章小結
5 兩個胰島素受體對大草蛉在卵巢管中的生殖調(diào)控功能
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實驗材料
        5.1.2 dsRNA的制備
        5.1.3 RNA干擾注射
        5.1.4 基因沉默效率的檢測
        5.1.5 檢測干擾基因的生物學指標
        5.1.6 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計
    5.2 結果與分析
        5.2.1 dsRNA的合成
        5.2.2 靶標基因干擾效率的分析
        5.2.3 dsCpInR1受體干擾后結果分析
        5.2.4 dsCpInR2受體干擾后結果分析
    5.3 本章小結
6 胰島素受體下游信號通路與信使的功能研究
    6.1 材料與方法
        6.1.1 實驗材料
        6.1.2 dsRNA的制備
        6.1.3 RNA干擾注射
        6.1.4 基因沉默效率的檢測
        6.1.5 檢測干擾基因的生物學指標
        6.1.6 卵巢的發(fā)育情況
        6.1.7 大草蛉總蛋白提取技術
        6.1.8 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計
    6.2 結果與分析
        6.2.1 dsRNA的合成
        6.2.2 目的基因干擾效率的分析
        6.2.3 dsCperk干擾后表型結果與分析
        6.2.4 dsCpFoxO干擾后表型結果與分析
        6.2.5 dsCpAkt干擾后表型結果與分析
        6.2.6 卵黃原蛋白的Western blot鑒定
    6.3 本章小結
結論
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文
致謝



本文編號：3810938