粘細(xì)菌是變形菌綱下δ分支的一類單細(xì)胞革蘭陰性細(xì)菌,營養(yǎng)細(xì)胞桿狀,具有復(fù)雜的多細(xì)胞行為,可以滑行運動,在營養(yǎng)貧瘠的條件下,細(xì)胞開始聚集形成多細(xì)胞團(tuán),并逐漸形成含抗逆性強的粘孢子的子實體。粘細(xì)菌廣泛分布于富含腐殖質(zhì)的土壤表層、腐敗的樹木枯枝落葉、草食類動物的糞便等環(huán)境中,其次級代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)各異、種類多樣、活性高效。粘細(xì)菌已經(jīng)被認(rèn)為是“活性微生物天然產(chǎn)物小工廠”,是篩選天然產(chǎn)物的重要資源,具有藥物先導(dǎo)分子的研究開發(fā)價值。本文采用滅活大腸桿菌和濾紙片誘導(dǎo)子實體法,從我國廣東、山東、及江西、湖南、湖北、山西等省市采集的32份土壤樣品中進(jìn)行粘細(xì)菌的分離篩選,對分離的粘細(xì)菌進(jìn)行子實體和菌落形態(tài)觀察、生理生化特征檢測及分子生物學(xué)鑒定,以確定這些菌株的分類地位。本次研究共分離純化出40株細(xì)菌。根據(jù)粘細(xì)菌菌落、子實體、營養(yǎng)細(xì)胞及粘孢子等形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果,初步鑒定這些粘細(xì)菌菌株分屬于粘細(xì)菌的4個屬,分別為:粘球菌屬10株;珊瑚球菌屬9株;侏囊菌屬11株和纖維堆囊菌屬10株。采用滅活大腸桿菌和濾紙片誘導(dǎo)子實體法純化得到8株粘細(xì)菌,并對這8株粘細(xì)菌進(jìn)行了深層鑒定與后續(xù)研究。經(jīng)16S rDNA序列同源性分析可知,分...

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 粘細(xì)菌的概述
        1.1.1 粘細(xì)菌的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 粘細(xì)菌的研究發(fā)展
        1.1.3 粘細(xì)菌的最新研究進(jìn)展
    1.2 粘細(xì)菌的特征
        1.2.1 粘細(xì)菌的生境
        1.2.2 運動特性:
        1.2.3 粘細(xì)菌的生物學(xué)特性
    1.3 粘細(xì)菌的分離純化
        1.3.1 粘細(xì)菌分離與純化障礙
        1.3.2 克服障礙的方法
        1.3.3 粘細(xì)菌的分類鑒定
    1.4 粘細(xì)菌活性次級代謝產(chǎn)物的特點及在各領(lǐng)域的應(yīng)用研究
        1.4.1 粘細(xì)菌的次級代謝產(chǎn)物的特點
        1.4.2 粘細(xì)菌生物活性物質(zhì)作用機制
        1.4.3 粘細(xì)菌活性次級代謝產(chǎn)物分離方法及手段
        1.4.4 粘細(xì)菌生物活性物質(zhì)的研究重點
    1.5 當(dāng)前研究存在的問題
    1.6 本研究目的和意義
    1.7 本研究思路
第二章 土壤中粘細(xì)菌的篩選分離
    2.1 實驗材料
        2.1.1 樣品的采集
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 儀器、材料與試劑
    2.2 方法
        2.2.1 樣品預(yù)處理
        2.2.2 土樣中粘細(xì)菌的分離(子實體誘導(dǎo)方法)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 粘細(xì)菌的篩選分離
        2.3.2 粘細(xì)菌的純化
        2.3.3 粘細(xì)菌的搖瓶發(fā)酵驗純
        2.3.4 粘細(xì)菌營養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)及粘孢子形態(tài)
    2.4 討論
第三章 粘細(xì)菌的鑒定及生物活性
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗菌株
        3.1.2 供試細(xì)胞株
        3.1.3 供試?yán)ハx
        3.1.4 培養(yǎng)基
    3.2 實驗儀器及試劑
        3.2.1 儀器
        3.2.2 材料及試劑:
        3.2.3 其他染色試劑
    3.3 實驗方法及步驟
        3.3.1 生理生化特征
        3.3.2 分離菌株生物活性檢測
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 粘細(xì)菌的形態(tài)特征:
        3.4.2 粘細(xì)菌的生理生化特征
        3.4.3 粘細(xì)菌的分子鑒定
        3.4.4 粘細(xì)菌的生物活性檢測
    3.5 討論
第四章 菌株S22的抗腫瘤活性物質(zhì)分離
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗菌株
        4.1.2 供試細(xì)胞株
        4.1.3 培養(yǎng)基
        4.1.4 細(xì)胞培養(yǎng)基
        4.1.5 試劑及器材
    4.2 實驗方法
        4.1.1 菌株S22的活化
        4.1.2 菌株S22的大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)
        4.1.3 菌株S22發(fā)酵上清液的粗分離
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 菌株S22的在WAX板上的菌落及子實體形態(tài)
        4.3.2 菌株S22的在MD1液體培養(yǎng)基中的生長形態(tài)
        4.3.3 大孢珊瑚球菌細(xì)胞形態(tài)變化過程
        4.3.4 S22發(fā)酵上清液的活性檢測過程
        4.3.5 菌株S22發(fā)酵上清液的經(jīng)不同處理后的抗腫瘤活性
        4.3.6 菌株S22活性物質(zhì)的提取與分離:
    4.4 討論
第五章 小結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附件: 8株粘細(xì)菌16S rDNA測序圖
縮略語表
論文發(fā)表情況
項目資助情況
致謝



本文編號：3779446