發(fā)布時間：2023-04-02 15:11

　　粘細菌是變形菌綱下δ分支的一類單細胞革蘭陰性細菌,營養(yǎng)細胞桿狀,具有復(fù)雜的多細胞行為,可以滑行運動,在營養(yǎng)貧瘠的條件下,細胞開始聚集形成多細胞團,并逐漸形成含抗逆性強的粘孢子的子實體。粘細菌廣泛分布于富含腐殖質(zhì)的土壤表層、腐敗的樹木枯枝落葉、草食類動物的糞便等環(huán)境中,其次級代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)各異、種類多樣、活性高效。粘細菌已經(jīng)被認(rèn)為是“活性微生物天然產(chǎn)物小工廠”,是篩選天然產(chǎn)物的重要資源,具有藥物先導(dǎo)分子的研究開發(fā)價值。本文采用滅活大腸桿菌和濾紙片誘導(dǎo)子實體法,從我國廣東、山東、及江西、湖南、湖北、山西等省市采集的32份土壤樣品中進行粘細菌的分離篩選,對分離的粘細菌進行子實體和菌落形態(tài)觀察、生理生化特征檢測及分子生物學(xué)鑒定,以確定這些菌株的分類地位。本次研究共分離純化出40株細菌。根據(jù)粘細菌菌落、子實體、營養(yǎng)細胞及粘孢子等形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果,初步鑒定這些粘細菌菌株分屬于粘細菌的4個屬,分別為:粘球菌屬10株;珊瑚球菌屬9株;侏囊菌屬11株和纖維堆囊菌屬10株。采用滅活大腸桿菌和濾紙片誘導(dǎo)子實體法純化得到8株粘細菌,并對這8株粘細菌進行了深層鑒定與后續(xù)研究。經(jīng)16S rDNA序列同源性分析可知,分...

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 粘細菌的概述
        1.1.1 粘細菌的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 粘細菌的研究發(fā)展
        1.1.3 粘細菌的最新研究進展
    1.2 粘細菌的特征
        1.2.1 粘細菌的生境
        1.2.2 運動特性:
        1.2.3 粘細菌的生物學(xué)特性
    1.3 粘細菌的分離純化
        1.3.1 粘細菌分離與純化障礙
        1.3.2 克服障礙的方法
        1.3.3 粘細菌的分類鑒定
    1.4 粘細菌活性次級代謝產(chǎn)物的特點及在各領(lǐng)域的應(yīng)用研究
        1.4.1 粘細菌的次級代謝產(chǎn)物的特點
        1.4.2 粘細菌生物活性物質(zhì)作用機制
        1.4.3 粘細菌活性次級代謝產(chǎn)物分離方法及手段
        1.4.4 粘細菌生物活性物質(zhì)的研究重點
    1.5 當(dāng)前研究存在的問題
    1.6 本研究目的和意義
    1.7 本研究思路
第二章 土壤中粘細菌的篩選分離
    2.1 實驗材料
        2.1.1 樣品的采集
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 儀器、材料與試劑
    2.2 方法
        2.2.1 樣品預(yù)處理
        2.2.2 土樣中粘細菌的分離(子實體誘導(dǎo)方法)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 粘細菌的篩選分離
        2.3.2 粘細菌的純化
        2.3.3 粘細菌的搖瓶發(fā)酵驗純
        2.3.4 粘細菌營養(yǎng)細胞形態(tài)及粘孢子形態(tài)
    2.4 討論
第三章 粘細菌的鑒定及生物活性
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗菌株
        3.1.2 供試細胞株
        3.1.3 供試?yán)ハx
        3.1.4 培養(yǎng)基
    3.2 實驗儀器及試劑
        3.2.1 儀器
        3.2.2 材料及試劑:
        3.2.3 其他染色試劑
    3.3 實驗方法及步驟
        3.3.1 生理生化特征
        3.3.2 分離菌株生物活性檢測
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 粘細菌的形態(tài)特征:
        3.4.2 粘細菌的生理生化特征
        3.4.3 粘細菌的分子鑒定
        3.4.4 粘細菌的生物活性檢測
    3.5 討論
第四章 菌株S22的抗腫瘤活性物質(zhì)分離
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗菌株
        4.1.2 供試細胞株
        4.1.3 培養(yǎng)基
        4.1.4 細胞培養(yǎng)基
        4.1.5 試劑及器材
    4.2 實驗方法
        4.1.1 菌株S22的活化
        4.1.2 菌株S22的大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)
        4.1.3 菌株S22發(fā)酵上清液的粗分離
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 菌株S22的在WAX板上的菌落及子實體形態(tài)
        4.3.2 菌株S22的在MD1液體培養(yǎng)基中的生長形態(tài)
        4.3.3 大孢珊瑚球菌細胞形態(tài)變化過程
        4.3.4 S22發(fā)酵上清液的活性檢測過程
        4.3.5 菌株S22發(fā)酵上清液的經(jīng)不同處理后的抗腫瘤活性
        4.3.6 菌株S22活性物質(zhì)的提取與分離:
    4.4 討論
第五章 小結(jié)與展望
參考文獻
附件: 8株粘細菌16S rDNA測序圖
縮略語表
論文發(fā)表情況
項目資助情況
致謝



本文編號：3779446