桔小實蠅Bactrocera dorsalis(Hendel)隸屬于雙翅目Diptera,實蠅科Tephritidae,果實蠅屬Bactrocera,是重要的世界性檢疫害蟲。桔小實蠅繁殖能力強(qiáng),成蟲產(chǎn)卵產(chǎn)于果實內(nèi)部,幼蟲孵化后取食果實,造成爛果及落果,嚴(yán)重影響果實的食用價值和經(jīng)濟(jì)價值。卵巢作為昆蟲雌性生殖系統(tǒng)的重要組織,與昆蟲的繁衍有著直接關(guān)系,相關(guān)研究一直是昆蟲發(fā)育領(lǐng)域的研究熱點,是探索防控害蟲新方法的重要切入點。谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-transferases,GSTs)是一類重要的超基因家族,目前對昆蟲GSTs研究主要集中在參與解毒代謝介導(dǎo)抗性形成方面,對其它生理功能的研究較少。本學(xué)位論文基于桔小實蠅基因組和轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),鑒定桔小實蠅GST基因;利用組織表達(dá)譜篩選到兩個在卵巢高表達(dá)的GST(BdGSTe1和BdGSTe10);克隆獲得了它們的開放閱讀框序列并進(jìn)行序列分析;通過構(gòu)建p ET-28a(+)原核表達(dá)載體,表達(dá)了BdGSTe1和BdGSTe10的重組蛋白;利用RT-qPCR技術(shù)解析了BdGSTe1和BdGSTe10的時空表達(dá)模式;最后通過RNAi技術(shù)探...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶
        1.1 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶分類及命名
        1.2 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶的功能
        1.3 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶在昆蟲學(xué)中的研究現(xiàn)狀
    2 昆蟲卵巢發(fā)育的研究進(jìn)展
        2.1 昆蟲卵巢簡介
        2.2 昆蟲卵子的發(fā)生
        2.3 卵巢發(fā)育過程中卵黃形成
        2.4 昆蟲卵巢發(fā)育及其影響因子
    3 學(xué)位論文的研究意義
第二章 桔小實蠅BdGSTe1和BdGSTe10的篩選和鑒定
    1 材料和方法
        1.1 供試?yán)ハx
        1.2 主要試劑和儀器
        1.3 桔小實蠅GSTs鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析
        1.4 樣品收集及總RNA提取
        1.5 基因組DNA去除及cDNA合成
        1.6 熒光定量PCR
    2 結(jié)果與分析
        2.1 桔小實蠅GSTs鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.2 桔小實蠅BdGSTs在第5日齡成蟲不同組織的表達(dá)模式
    3 討論
第三章 桔小實蠅BdGSTe1和BdGSTe10的克隆及原核表達(dá)
    1 材料和方法
        1.1 供試?yán)ハx
        1.2 主要試劑和儀器
        1.3 BdGSTe10的克隆及測序
        1.4 序列比對及分析
        1.5 表達(dá)產(chǎn)物構(gòu)建
        1.6 原核誘導(dǎo)表達(dá)
        1.7 重組蛋白純化
    2 結(jié)果與分析
        2.1 桔小實蠅BdGSTe1和BdGSTe10序列分析
        2.2 桔小實蠅BdGSTe1-pET-28a (+)和BdGSTe10-pET-28a (+)表達(dá)載體構(gòu)建
        2.3 純化后的重組蛋白SDS-PAGE電泳及活性檢測
    3 討論
第四章 桔小實蠅BdGSTe1和BdGSTe10時空表達(dá)模式解析
    1 材料和方法
        1.1 供試?yán)ハx
        1.2 主要試劑和儀器
        1.3 樣品準(zhǔn)備
        1.4 實時熒光定量PCR(RT-qPCR)
        1.5 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 BdGSTe1和BdGSTe10在桔小實蠅不同發(fā)育階段的表達(dá)模式
        2.2 BdGSTe1和BdGSTe10在桔小實蠅胚胎發(fā)育期的表達(dá)模式
        2.3 BdGSTe1和BdGSTe10在桔小實蠅不同日齡雌成蟲的表達(dá)模式
    3 討論
第五章 BdGSTe1和BdGSTe10參與桔小實蠅卵巢發(fā)育
    1 材料和方法
        1.1 供試?yán)ハx
        1.2 主要試劑和儀器
        1.3 RNAi
        1.4 表型觀察
        1.5 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 沉默效率檢測
        2.2 干擾BdGSTe1和BdGSTe10對桔小實蠅卵巢發(fā)育的影響
        2.3 干擾BdGSTe1和BdGSTe10對桔小實蠅產(chǎn)卵量的影響
        2.4 干擾BdGSTe1和BdGSTe10后卵巢活性氧水平變化
    3 討論
第六章 主要結(jié)果及研究展望
    1 主要結(jié)果
    2 研究展望
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3776177