RNAi是由雙鏈RNA所引起的特異性基因沉默。喂食dsRNA達(dá)到RNAi效應(yīng)在很多昆蟲(chóng)上取得成功,在害蟲(chóng)防治上表現(xiàn)出廣泛的應(yīng)用潛力,但是目前缺乏對(duì)于RNAi的安全性評(píng)價(jià),因此評(píng)價(jià)RNAi包括對(duì)天敵和益蟲(chóng)等非靶標(biāo)昆蟲(chóng)的干擾效應(yīng)在內(nèi)的環(huán)境安全性具有非常重要的意義。 本研究選取橘小實(shí)蠅Bactrocera dorsalis作為靶標(biāo)昆蟲(chóng),rpl19基因作為靶標(biāo)基因,選擇近緣種柑橘大實(shí)蠅Bactrocera minax,天敵長(zhǎng)尾潛蠅繭蜂Diachasmimorpha longicaudata,益蟲(chóng)意大利蜜蜂?pis mellifera作為非靶標(biāo)生物,同時(shí)喂食小實(shí)蠅rpl19基因不同片段的dsRNA,利用Real-time PCR等分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)各個(gè)昆蟲(chóng)rpl19的表達(dá)情況,研究昆蟲(chóng)dsRNA對(duì)非靶標(biāo)昆蟲(chóng)的干擾效應(yīng),為RNAi用于害蟲(chóng)防治提供安全性評(píng)價(jià)的參考依據(jù)。主要研究結(jié)果如下： 1.成功克隆了橘小實(shí)蠅、柑橘大實(shí)蠅、長(zhǎng)尾潛蠅繭蜂和意大利蜜蜂rpl19基因cDNA全長(zhǎng)�；蛲葱苑治鼋Y(jié)果顯示橘小實(shí)蠅rpH9基因ORF區(qū)域核酸序列與柑橘大實(shí)蠅同源性高達(dá)93%,與長(zhǎng)尾潛蠅繭蜂同源性達(dá)72%,與意大...

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 RNAi
    2 RNA干擾技術(shù)在昆蟲(chóng)中的應(yīng)用
        2.1 dsRNA導(dǎo)入昆蟲(chóng)的方法
        2.2 昆蟲(chóng)對(duì)RNAi的敏感度
        2.3 RNAi在昆蟲(chóng)基因功能中研究現(xiàn)狀
        2.4 RNAi在害蟲(chóng)防治中的研究進(jìn)展
    3 Rpl19基因的功能研究
    4 橘小實(shí)蠅防治研究現(xiàn)狀
    5 橘園昆蟲(chóng)群落研究
    6 本研究?jī)?nèi)容與目的意義
        6.1 研究?jī)?nèi)容與目的意義
        6.2 技術(shù)路線
第二章 柑橘大實(shí)蠅、意大利蜜蜂、長(zhǎng)尾潛蠅繭蜂rpl19基因全長(zhǎng)克隆
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 供試?yán)ハx(chóng)
            1.1.2 常用緩沖液、培養(yǎng)基及抗生素的配制
            1.1.3 主要試劑及試劑盒
            1.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 總RNA的提取
            1.2.2 簡(jiǎn)并引物擴(kuò)增柑橘大實(shí)蠅、長(zhǎng)尾潛蠅繭蜂rpl19基因片段及基因克隆
            1.2.3 RACE擴(kuò)增柑橘大實(shí)蠅、長(zhǎng)尾潛蠅繭蜂、意大利蜜蜂3'端
            1.2.4 RACE擴(kuò)增柑橘大實(shí)蠅、長(zhǎng)尾潛蠅繭蜂、意大利蜜蜂5'端
    2 結(jié)果與分析
        2.1 總RNA的提取
        2.2 RT-PCR擴(kuò)增相關(guān)基因片段
        2.3 PCR產(chǎn)物的的克隆與測(cè)序
            2.3.1 目標(biāo)條帶的回收及重組質(zhì)粒的篩選
            2.3.2 序列結(jié)果與分析
        2.4 rpl19基因全長(zhǎng)克隆
            2.4.1 3'RACE擴(kuò)增結(jié)果
            2.4.2 3'RACE PCR產(chǎn)物的的克隆與測(cè)序
            2.4.3 5'RACE擴(kuò)增結(jié)果
            2.4.4 5'RACE PCR產(chǎn)物的的克隆
            2.4.5 序列結(jié)果與分析
        2.5 rpl19基因同源性比對(duì)
            2.5.1 rpl19基因ORF區(qū)域核酸同源性比對(duì)
            2.5.2 rpl19基因氨基酸同源性比對(duì)
    3 小結(jié)
第三章 橘小實(shí)蠅rpl19 dsRNA對(duì)非靶標(biāo)昆蟲(chóng)的RNAi效應(yīng)研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 供試?yán)ハx(chóng)
            1.1.2 主要儀器設(shè)備
            1.1.3 常用緩沖液、培養(yǎng)基及抗生素的配制
            1.1.4 菌株和質(zhì)粒
            1.1.5 主要試劑及試劑盒
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 特異性引物的設(shè)計(jì)與合成
            1.2.2 目的片段的擴(kuò)增
            1.2.3 質(zhì)粒L4440及PCR產(chǎn)物雙酶切反應(yīng)
            1.2.4 質(zhì)粒L4440與外源基因片段的連接
            1.2.5 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
            1.2.6 表達(dá)載體的篩選與鑒定
            1.2.7 dsRNA的表達(dá)
            1.2.8 RNAi干擾效應(yīng)檢測(cè)
            1.2.9 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 dsRNA表達(dá)效果檢測(cè)
        2.2 dsRNA攝入效果檢測(cè)
        2.3 喂食Bdrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 3'UTR后橘小實(shí)蠅rpl19表達(dá)量
        2.4 喂食Bmrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 3'UTR后柑橘大實(shí)蠅rpl19表達(dá)量
        2.5 喂食Dlrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 3'UTR后長(zhǎng)尾潛蠅繭蜂rpl19表達(dá)量
        2.6 喂食Amrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 CDS dsRNA、Bdrpl19 3'UTR后意大利蜜蜂rpl19表達(dá)量
    3 討論
第四章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3747742