在長期的進化過程中,昆蟲形成了復雜而敏銳的嗅覺系統(tǒng),藉此感受環(huán)境中大量的化學信息,并做出相應的生理和行為反應,如取食、交配和產卵。大量研究證實,氣味結合蛋白(Odorant binding protein,OBP)是高濃度存在于昆蟲觸角感器腔內的一類水溶性小分子蛋白,起到將外來脂溶性氣味物質結合并運輸?shù)礁惺苌窠?jīng)膜上的氣味受體的作用。甜菜夜蛾Spodoptera exigua屬鱗翅目、夜蛾科,是一種重要的多食性農業(yè)害蟲,對其OBP的研究,不僅有助于深入了解甜菜夜蛾的嗅覺機制,而且可以為開發(fā)基于嗅覺調控的新型防治技術提供靶標,具有非常重要的意義。本研究通過對甜菜夜蛾轉錄組數(shù)據(jù)的分析,結合分子生物學技術,從甜菜夜蛾中克隆了2個氣味結合蛋白OBP基因,測定了它們的組織及時間表達動態(tài),然后利用體外表達實驗、熒光競爭結合實驗及行為學實驗對其生理功能進行了探索。主要結果如下：1甜菜夜蛾2個OBP基因的克隆及序列分析通過轉錄組數(shù)據(jù)分析獲得了2個OBP基因的cDNA片段,然后利用RACE技術,進一步克隆了其cDNA全長序列。其中一個基因命名為SexiOBP13,GenBank登錄號KC817145；另一...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1 昆蟲嗅覺感受機制
    2 昆蟲氣味結合蛋白的概述
        2.1 昆蟲氣味結合蛋白的特征與結構
        2.2 昆蟲氣味結合蛋白的分類和分布
        2.3 昆蟲氣味結合蛋白的生理功能研究
    3 甜菜夜蛾的相關研究進展
        3.1 甜菜夜蛾的為害特點
        3.2 甜菜夜蛾的防治策略
        3.3 甜菜夜蛾氣味結合蛋白的研究
    4 本研究的目的及意義
第二章 甜菜夜蛾氣味結合蛋白的基因克隆和序列分析
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 供試昆蟲
        1.2 主要試劑及儀器設備
        1.3 昆蟲總RNA的提取
        1.4 cDNA模板的合成
        1.5 PCR引物設計、反應體系及程序
        1.6 PCR產物純化、克隆、測序和序列分析
    2 結果與分析
        2.1 甜菜夜蛾RNA的提取
        2.2 cDNA片段的克隆
        2.3 測序結果分析
        2.4 甜菜夜蛾氣味結合蛋白全長克隆與分析
    3 討論
第三章 甜菜夜蛾兩個氣味結合蛋白的組織分布
    摘要
    1 材料和方法
        1.1 供試昆蟲及組織收集
        1.2 主要試劑和儀器設備
        1.3 甜菜夜蛾不同組織、齡期、日齡總RNA提取
        1.4 cDNA模板的合成
        1.5 PCR引物設計
        1.6 實時定量PCR反應
    2 結果與分析
        2.1 甜菜夜蛾成蟲及幼蟲組織中氣味結合蛋白的表達量比較
        2.2 SexiOBP7在甜菜夜蛾成蟲及SexiOBP13在幼蟲中的時動態(tài)表達
    3 討論
第四章 甜菜夜蛾兩個氣味結合蛋白的原核表達及配體結合能力分析
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 質粒和菌株
        1.2 主要試劑和儀器設備
        1.3 昆蟲總RNA的提取
        1.4 cDNA第一鏈的合成
        1.5 引物設計及PCR擴增
        1.6 PCR產物純化、連接、轉化和測序
        1.7 原核表達載體的構建
        1.8 蛋白SexiOBP的純化
        1.9 表達蛋白的熒光測定及配體結合實驗
    2 結果與分析
        2.1 原核表達載體的構建和鑒定
        2.2 重組質粒在大腸桿菌中表達及可溶性分析
        2.3 1-NPN與甜菜夜蛾氣味結合蛋白結合曲線的測定
        2.4 SexiOBP7和SexiOBP13與氣味物質結合能力的測定
    3 討論
第五章 甜菜夜蛾幼蟲對性信息素主組分的趨向反應
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 供試昆蟲
        1.2 主要試劑及儀器設備
        1.3 氣味物質的配制
        1.4 選擇性實驗
    2. 結果與分析
    3. 討論
全文總結
參考文獻
攻讀碩士學位期間學術論文的發(fā)表情況
致謝



本文編號：3739939