發(fā)布時(shí)間：2023-02-10 21:24

　　在長(zhǎng)期的進(jìn)化過程中,昆蟲形成了復(fù)雜而敏銳的嗅覺系統(tǒng),藉此感受環(huán)境中大量的化學(xué)信息,并做出相應(yīng)的生理和行為反應(yīng),如取食、交配和產(chǎn)卵。大量研究證實(shí),氣味結(jié)合蛋白(Odorant binding protein,OBP)是高濃度存在于昆蟲觸角感器腔內(nèi)的一類水溶性小分子蛋白,起到將外來脂溶性氣味物質(zhì)結(jié)合并運(yùn)輸?shù)礁惺苌窠?jīng)膜上的氣味受體的作用。甜菜夜蛾Spodoptera exigua屬鱗翅目、夜蛾科,是一種重要的多食性農(nóng)業(yè)害蟲,對(duì)其OBP的研究,不僅有助于深入了解甜菜夜蛾的嗅覺機(jī)制,而且可以為開發(fā)基于嗅覺調(diào)控的新型防治技術(shù)提供靶標(biāo),具有非常重要的意義。本研究通過對(duì)甜菜夜蛾轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析,結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù),從甜菜夜蛾中克隆了2個(gè)氣味結(jié)合蛋白OBP基因,測(cè)定了它們的組織及時(shí)間表達(dá)動(dòng)態(tài),然后利用體外表達(dá)實(shí)驗(yàn)、熒光競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)及行為學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)其生理功能進(jìn)行了探索。主要結(jié)果如下：1甜菜夜蛾2個(gè)OBP基因的克隆及序列分析通過轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析獲得了2個(gè)OBP基因的cDNA片段,然后利用RACE技術(shù),進(jìn)一步克隆了其cDNA全長(zhǎng)序列。其中一個(gè)基因命名為SexiOBP13,GenBank登錄號(hào)KC817145；另一...

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 昆蟲嗅覺感受機(jī)制
    2 昆蟲氣味結(jié)合蛋白的概述
        2.1 昆蟲氣味結(jié)合蛋白的特征與結(jié)構(gòu)
        2.2 昆蟲氣味結(jié)合蛋白的分類和分布
        2.3 昆蟲氣味結(jié)合蛋白的生理功能研究
    3 甜菜夜蛾的相關(guān)研究進(jìn)展
        3.1 甜菜夜蛾的為害特點(diǎn)
        3.2 甜菜夜蛾的防治策略
        3.3 甜菜夜蛾氣味結(jié)合蛋白的研究
    4 本研究的目的及意義
第二章 甜菜夜蛾氣味結(jié)合蛋白的基因克隆和序列分析
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 供試?yán)ハx
        1.2 主要試劑及儀器設(shè)備
        1.3 昆蟲總RNA的提取
        1.4 cDNA模板的合成
        1.5 PCR引物設(shè)計(jì)、反應(yīng)體系及程序
        1.6 PCR產(chǎn)物純化、克隆、測(cè)序和序列分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 甜菜夜蛾RNA的提取
        2.2 cDNA片段的克隆
        2.3 測(cè)序結(jié)果分析
        2.4 甜菜夜蛾氣味結(jié)合蛋白全長(zhǎng)克隆與分析
    3 討論
第三章 甜菜夜蛾兩個(gè)氣味結(jié)合蛋白的組織分布
    摘要
    1 材料和方法
        1.1 供試?yán)ハx及組織收集
        1.2 主要試劑和儀器設(shè)備
        1.3 甜菜夜蛾不同組織、齡期、日齡總RNA提取
        1.4 cDNA模板的合成
        1.5 PCR引物設(shè)計(jì)
        1.6 實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 甜菜夜蛾成蟲及幼蟲組織中氣味結(jié)合蛋白的表達(dá)量比較
        2.2 SexiOBP7在甜菜夜蛾成蟲及SexiOBP13在幼蟲中的時(shí)動(dòng)態(tài)表達(dá)
    3 討論
第四章 甜菜夜蛾兩個(gè)氣味結(jié)合蛋白的原核表達(dá)及配體結(jié)合能力分析
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 質(zhì)粒和菌株
        1.2 主要試劑和儀器設(shè)備
        1.3 昆蟲總RNA的提取
        1.4 cDNA第一鏈的合成
        1.5 引物設(shè)計(jì)及PCR擴(kuò)增
        1.6 PCR產(chǎn)物純化、連接、轉(zhuǎn)化和測(cè)序
        1.7 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.8 蛋白SexiOBP的純化
        1.9 表達(dá)蛋白的熒光測(cè)定及配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 原核表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定
        2.2 重組質(zhì)粒在大腸桿菌中表達(dá)及可溶性分析
        2.3 1-NPN與甜菜夜蛾氣味結(jié)合蛋白結(jié)合曲線的測(cè)定
        2.4 SexiOBP7和SexiOBP13與氣味物質(zhì)結(jié)合能力的測(cè)定
    3 討論
第五章 甜菜夜蛾幼蟲對(duì)性信息素主組分的趨向反應(yīng)
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 供試?yán)ハx
        1.2 主要試劑及儀器設(shè)備
        1.3 氣味物質(zhì)的配制
        1.4 選擇性實(shí)驗(yàn)
    2. 結(jié)果與分析
    3. 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間學(xué)術(shù)論文的發(fā)表情況
致謝



本文編號(hào)：3739939