內(nèi)源RNA病毒是一類能夠侵染不同生物的病毒類群,寄主范圍包括植物、真菌及卵菌。侵染寄主時(shí)不會(huì)引起寄主異常癥狀,在寄主體內(nèi)能夠持續(xù)慢性感染�；蚪M核酸多為線性雙鏈RNA（dsRNA）,全長在9.8-17.6 kbp之間,編碼一個(gè)大的ORF,編碼框上含有RdRp（RNA-dependent RNA polymerase）、CPS（capsular polysaccharide synthetase）、Hel（viral RNA helicase）或UGT（UDP-glycosyltransferase）等一些保守結(jié)構(gòu)域。有些內(nèi)源RNA病毒的全長基因組5?末端附近存在一個(gè)缺口（nick）,有些內(nèi)源RNA病毒基因組3?末端會(huì)檢測(cè)出一串連續(xù)的胞嘧啶堿基,它們是否在病毒的進(jìn)化起到一定作用尚不清楚。此外,該類病毒不形成病毒粒子,不編碼病毒衣殼蛋白。本研究從植物和真菌兩種不同的寄主中分別發(fā)現(xiàn)了一種新內(nèi)源RNA病毒,對(duì)其分子特性及部分生物學(xué)特性進(jìn)行了研究,主要結(jié)果如下:首先,白粉菌中發(fā)現(xiàn)的一種新內(nèi)源RNA病毒。白粉菌樣品采自北京地區(qū)感染白粉菌的枸杞植物,利用白粉菌ITS區(qū)域和顯微形態(tài)觀察,鑒定了白粉菌病... 

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 雙鏈RNA病毒的簡介及分類
        1.2.1 雙鏈RNA病毒的簡介
        1.2.2 雙鏈RNA病毒的分類
    1.3 內(nèi)源RNA病毒的研究進(jìn)展
        1.3.1 內(nèi)源RNA病毒的發(fā)現(xiàn)和發(fā)展概況
        1.3.2 內(nèi)源RNA病毒的寄主范圍、自然分布及傳播
        1.3.3 內(nèi)源RNA病毒的分子特性及基因組結(jié)構(gòu)
    1.4 本研究的目的與意義
第2章 穆氏節(jié)絲殼內(nèi)源RNA病毒的分子特征及分類地位
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 樣品采集
        2.1.2 菌株、載體及培養(yǎng)基
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)器材及試劑
        2.1.4 RT-PCR擴(kuò)增和檢測(cè)引物
        2.1.5 緩沖液及培養(yǎng)基的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 CTAB法提總DNA
        2.2.2 病毒dsRNA的大量提取
        2.2.3 白粉菌ITS區(qū)域的PCR擴(kuò)增
        2.2.4 白粉菌ITS區(qū)域的克隆和測(cè)定
        2.2.5 白粉菌顯微形態(tài)觀察
        2.2.6 病毒dsRNA的回收純化
        2.2.7 病毒基因組中間序列的克隆
        2.2.8 病毒基因組末端序列克隆
        2.2.9 病毒基因組序列的拼接和結(jié)構(gòu)分析
        2.2.10 病毒的進(jìn)化分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 枸杞白粉病病原菌的鑒定
        2.3.2 穆氏節(jié)絲殼中dsRNA病毒的鑒定及純化
        2.3.3 穆氏節(jié)絲殼內(nèi)源RNA病毒基因組測(cè)定
        2.3.4 穆氏節(jié)絲殼內(nèi)源RNA病毒的分子特征分析
        2.3.5 穆氏節(jié)絲殼內(nèi)源RNA病毒分類地位的確定
    2.4 小結(jié)與討論
第3章 瓠瓜內(nèi)源RNA病毒的分子特性及分類地位
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品
        3.1.2 菌株、載體及培養(yǎng)基
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)器材及試劑
        3.1.4 RT-PCR擴(kuò)增和檢測(cè)引物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 病毒dsRNA的大量提取
        3.2.2 病毒dsRNA的回收純化
        3.2.3 病毒基因組中間序列的克隆
        3.2.4 病毒基因組末端序列的克隆
        3.2.5 病毒基因組序列的拼接及結(jié)構(gòu)分析
        3.2.6 病毒的進(jìn)化分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 瓠瓜內(nèi)源RNA病毒的鑒定及全長克隆
        3.3.2 瓠瓜內(nèi)源RNA病毒分子特征的分析
        3.3.3 瓠瓜內(nèi)源RNA病毒分類地位的確定
    3.4 小結(jié)與討論
第4章 瓠瓜內(nèi)源RNA病毒的部分生物學(xué)特性
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
        4.1.3 RT-PCR擴(kuò)增及檢測(cè)引物
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 瓠瓜的種植及樣品的選擇
        4.2.2 Trizol法提總RNA
        4.2.3 試劑盒提植物總RNA
        4.2.4 總RNA的RT-PCR、電泳檢測(cè)
        4.2.5 qRT-PCR的數(shù)據(jù)處理及分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 瓠瓜種子攜帶內(nèi)源RNA病毒的檢測(cè)
        4.3.2 不同時(shí)期內(nèi)源RNA病毒在瓠瓜中的動(dòng)態(tài)變化
        4.3.3 瓠瓜內(nèi)源RNA病毒與西瓜花葉病毒的含量變化
    4.4 小結(jié)與討論
第5章 全文結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡介
附錄1 緩沖液及培養(yǎng)基的配制



本文編號(hào)：3724203