內(nèi)源RNA病毒是一類能夠侵染不同生物的病毒類群,寄主范圍包括植物、真菌及卵菌。侵染寄主時不會引起寄主異常癥狀,在寄主體內(nèi)能夠持續(xù)慢性感染。基因組核酸多為線性雙鏈RNA（dsRNA）,全長在9.8-17.6 kbp之間,編碼一個大的ORF,編碼框上含有RdRp（RNA-dependent RNA polymerase）、CPS（capsular polysaccharide synthetase）、Hel（viral RNA helicase）或UGT（UDP-glycosyltransferase）等一些保守結(jié)構(gòu)域。有些內(nèi)源RNA病毒的全長基因組5?末端附近存在一個缺口（nick）,有些內(nèi)源RNA病毒基因組3?末端會檢測出一串連續(xù)的胞嘧啶堿基,它們是否在病毒的進化起到一定作用尚不清楚。此外,該類病毒不形成病毒粒子,不編碼病毒衣殼蛋白。本研究從植物和真菌兩種不同的寄主中分別發(fā)現(xiàn)了一種新內(nèi)源RNA病毒,對其分子特性及部分生物學特性進行了研究,主要結(jié)果如下:首先,白粉菌中發(fā)現(xiàn)的一種新內(nèi)源RNA病毒。白粉菌樣品采自北京地區(qū)感染白粉菌的枸杞植物,利用白粉菌ITS區(qū)域和顯微形態(tài)觀察,鑒定了白粉菌病... 

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 雙鏈RNA病毒的簡介及分類
        1.2.1 雙鏈RNA病毒的簡介
        1.2.2 雙鏈RNA病毒的分類
    1.3 內(nèi)源RNA病毒的研究進展
        1.3.1 內(nèi)源RNA病毒的發(fā)現(xiàn)和發(fā)展概況
        1.3.2 內(nèi)源RNA病毒的寄主范圍、自然分布及傳播
        1.3.3 內(nèi)源RNA病毒的分子特性及基因組結(jié)構(gòu)
    1.4 本研究的目的與意義
第2章 穆氏節(jié)絲殼內(nèi)源RNA病毒的分子特征及分類地位
    2.1 實驗材料
        2.1.1 樣品采集
        2.1.2 菌株、載體及培養(yǎng)基
        2.1.3 實驗器材及試劑
        2.1.4 RT-PCR擴增和檢測引物
        2.1.5 緩沖液及培養(yǎng)基的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 CTAB法提總DNA
        2.2.2 病毒dsRNA的大量提取
        2.2.3 白粉菌ITS區(qū)域的PCR擴增
        2.2.4 白粉菌ITS區(qū)域的克隆和測定
        2.2.5 白粉菌顯微形態(tài)觀察
        2.2.6 病毒dsRNA的回收純化
        2.2.7 病毒基因組中間序列的克隆
        2.2.8 病毒基因組末端序列克隆
        2.2.9 病毒基因組序列的拼接和結(jié)構(gòu)分析
        2.2.10 病毒的進化分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 枸杞白粉病病原菌的鑒定
        2.3.2 穆氏節(jié)絲殼中dsRNA病毒的鑒定及純化
        2.3.3 穆氏節(jié)絲殼內(nèi)源RNA病毒基因組測定
        2.3.4 穆氏節(jié)絲殼內(nèi)源RNA病毒的分子特征分析
        2.3.5 穆氏節(jié)絲殼內(nèi)源RNA病毒分類地位的確定
    2.4 小結(jié)與討論
第3章 瓠瓜內(nèi)源RNA病毒的分子特性及分類地位
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗樣品
        3.1.2 菌株、載體及培養(yǎng)基
        3.1.3 實驗器材及試劑
        3.1.4 RT-PCR擴增和檢測引物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 病毒dsRNA的大量提取
        3.2.2 病毒dsRNA的回收純化
        3.2.3 病毒基因組中間序列的克隆
        3.2.4 病毒基因組末端序列的克隆
        3.2.5 病毒基因組序列的拼接及結(jié)構(gòu)分析
        3.2.6 病毒的進化分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 瓠瓜內(nèi)源RNA病毒的鑒定及全長克隆
        3.3.2 瓠瓜內(nèi)源RNA病毒分子特征的分析
        3.3.3 瓠瓜內(nèi)源RNA病毒分類地位的確定
    3.4 小結(jié)與討論
第4章 瓠瓜內(nèi)源RNA病毒的部分生物學特性
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗樣品
        4.1.2 實驗試劑及儀器
        4.1.3 RT-PCR擴增及檢測引物
    4.2 實驗方法
        4.2.1 瓠瓜的種植及樣品的選擇
        4.2.2 Trizol法提總RNA
        4.2.3 試劑盒提植物總RNA
        4.2.4 總RNA的RT-PCR、電泳檢測
        4.2.5 qRT-PCR的數(shù)據(jù)處理及分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 瓠瓜種子攜帶內(nèi)源RNA病毒的檢測
        4.3.2 不同時期內(nèi)源RNA病毒在瓠瓜中的動態(tài)變化
        4.3.3 瓠瓜內(nèi)源RNA病毒與西瓜花葉病毒的含量變化
    4.4 小結(jié)與討論
第5章 全文結(jié)論
致謝
參考文獻
個人簡介
附錄1 緩沖液及培養(yǎng)基的配制



本文編號：3724203