核盤(pán)菌（Sclerotinia sclerotiorum（Lib.）de Bary）是一種世界性分布的重要死體營(yíng)養(yǎng)型植物病原真菌,可侵染400多種植物,對(duì)農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)和產(chǎn)量造成巨大損失。病原菌在侵染過(guò)程中需抵抗或耐受由于活性氧爆發(fā)而造成的寄主氧化壓力,但到目前為止,對(duì)核盤(pán)菌抵抗氧化脅迫的機(jī)制知之甚少。本研究前期發(fā)現(xiàn)核盤(pán)菌基因SsSvf1（SS1G₀1919）在病原菌侵染寄主初期表達(dá)量顯著升高,該基因編碼一個(gè)釀酒酵母（Saccharomyes cerevisiae）存活因子1（Svf1,Survive factor 1）的同源蛋白,SVF1能幫助釀酒酵母應(yīng)對(duì)氧化脅迫并維持細(xì)胞活性。為揭示核盤(pán)菌抵御氧化壓力及致病機(jī)理,本研究對(duì)核盤(pán)菌SsSvf1基因的功能進(jìn)行了深入研究。利用生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)SsSvf1基因進(jìn)行分析,結(jié)果表明SsSvf1基因編碼區(qū)全長(zhǎng)1146bp,編碼381個(gè)氨基酸,保守結(jié)構(gòu)域分析表明其C端為存活因子1結(jié)構(gòu)域（Survival factor 1,Svf1）,通過(guò)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)發(fā)現(xiàn)SsSvf1和灰霉（Botrytis cinerea）XP₀

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1 核盤(pán)菌的研究進(jìn)展
        1.1 核盤(pán)菌及其危害
        1.2 菌核病的防治
        1.3 植物病原菌與寄主植物的互作
        1.4 核盤(pán)菌的致病機(jī)理
        1.5 SVF1 基因研究進(jìn)展
    2 本研究的目的與意義
第2章 核盤(pán)菌SsSvf1 基因基本特性研究
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 供試菌株
        1.2 試驗(yàn)相關(guān)培養(yǎng)基
        1.3 試驗(yàn)試劑及儀器
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 核盤(pán)菌SsSvf1 基因結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.2 核盤(pán)菌SsSvf1 基因在生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期的表達(dá)
        2.3 核盤(pán)菌SsSvf1 基因在氧化脅迫下的表達(dá)
        2.4 核盤(pán)菌SsSvf1 基因在致病過(guò)程中的表達(dá)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 SsSvf1 蛋白結(jié)構(gòu)分析
        3.2 核盤(pán)菌SsSvf1 基因在生長(zhǎng)發(fā)育階段的表達(dá)
        3.3 核盤(pán)菌SsSvf1 基因在氧化脅迫下的表達(dá)
        3.4 核盤(pán)菌SsSvf1 基因在致病過(guò)程中的表達(dá)
    4 討論
第3章 核盤(pán)菌Ss Svf1 基因功能研究
    1 材料
        1.1 材料
    2 方法
        2.1 SsSvf1 基因沉默載體的構(gòu)建
        2.2 核盤(pán)菌原生質(zhì)體的制備
        2.3 PEG介導(dǎo)核盤(pán)菌原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化
        2.4 SsSvf1 沉默轉(zhuǎn)化子的篩選
        2.5 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子菌絲、菌落形態(tài)及菌核形成
        2.6 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子抵抗高滲脅迫能力分析
        2.7 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子在氧化脅迫下的敏感性測(cè)定
        2.8 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子的致病力測(cè)定
        2.9 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子侵染墊形成觀察
        2.10 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子分泌草酸定量分析
        2.11 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子細(xì)胞壁完整性測(cè)定
        2.12 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子ROS染色
        2.13 抑制植物ROS產(chǎn)生對(duì)SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子致病力的影響
    3 結(jié)果與分析
        3.1 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子的獲得
        3.2 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子菌絲、菌落形態(tài)及菌核形成數(shù)量分析
        3.3 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子在氧化脅迫下的敏感性測(cè)定
        3.4 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子致病力測(cè)定
        3.5 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子侵染墊形成
        3.6 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子草酸形成測(cè)定
        3.7 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子細(xì)胞壁完整性測(cè)定
        3.8 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子抵抗高滲能力分析
        3.9 SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子產(chǎn)生ROS比較
        3.10 抑制植物ROS產(chǎn)生后SsSvf1 基因沉默轉(zhuǎn)化子的致病力測(cè)定
    4 討論
第4章 SsSvf1 調(diào)控核盤(pán)菌致病性機(jī)理研究
    1 材料
        1.1 主要材料
        1.2 儀器
    2 方法
        2.1 SsSvf1 融合FLAG標(biāo)簽表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2 SsSvf1 融合FLAG蛋白轉(zhuǎn)化子的獲取
        2.3 SsSvf1-FLAG融合蛋白轉(zhuǎn)化子的RNA水平表達(dá)鑒定
        2.4 SsSvf1-FLAG融合蛋白轉(zhuǎn)化子菌株的總蛋白的提取
        2.5 SDS-PAGE電泳
        2.6 SsSvf1-FLAG融合蛋白轉(zhuǎn)化子的蛋白水平表達(dá)鑒定
        2.7 CO-IP獲取互作蛋白
        2.8 酵母雙雜交驗(yàn)證SsSvf1 互作蛋白
    3 結(jié)果與分析
        3.1 RT-PCR驗(yàn)證SsSvf1 融合FLAG標(biāo)簽蛋白的表達(dá)
        3.2 Western blot分析SsSvf1 融合FLAG標(biāo)簽蛋白在蛋白水平的表達(dá)
        3.3 CO-IP獲取互作蛋白
        3.4 酵母雙雜交驗(yàn)證SsSvf1 互作蛋白
    4 討論
第5章 結(jié)論與展望
    1 結(jié)論
    2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄A 本論文中所用術(shù)語(yǔ)縮寫(xiě)與中英文對(duì)照
致謝
碩士期間發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]乳酸菌抗氧脅迫及有氧生長(zhǎng)的研究[D]. 付龍?jiān)?山東大學(xué) 2013

碩士論文
[1]生防菌盾殼霉LaeA基因的克隆與功能研究[D]. 郝艷飛.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]草酸在核盤(pán)菌（Sclerotinia sclerotiorum）與寄主植物互作中的生物學(xué)作用[D]. 李雙勝.浙江大學(xué) 2013
[3]核盤(pán)菌致病機(jī)制的關(guān)鍵因子分析[D]. 黃娟.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3717080