幾丁質(zhì)由N-乙酰-D葡萄糖胺通過B-1,4-糖苷鍵聚合而成的直鏈多糖,是自然界一種重要的生物聚合物。它廣泛存在于真菌、藻類、線蟲、甲殼類動物及昆蟲體內(nèi)。在昆蟲體內(nèi),幾丁質(zhì)是表皮和圍食膜的關(guān)鍵組成部分。昆蟲幾丁質(zhì)酶是一類由單基因編碼的水解幾丁質(zhì)中的p-1,4-糖苷鍵的糖苷水解酶,屬于糖苷水解酶18家族,在昆蟲的消化、蛻皮、變態(tài)及侵染等生理過程中發(fā)揮著非常重要的作用。昆蟲體內(nèi)包含多個幾丁質(zhì)酶的編碼基因,它們的結(jié)構(gòu)域組成、生化性質(zhì)和生理功能存在一定差異。目前,鑒于其能夠降解幾丁質(zhì)的特性,昆蟲幾丁質(zhì)酶已經(jīng)被應(yīng)用于病蟲害防治和疾病控制等方面。本研究建立了舞毒蛾飼養(yǎng)過程中從卵的孵化、幼蟲的發(fā)育、蛹的形成到成蟲的生長及傳代的完整循環(huán)周期。隨后,對使用人工飼料飼喂的舞毒蛾幼蟲的各個齡期的發(fā)育天數(shù)進(jìn)行了統(tǒng)計,獲得了舞毒蛾各齡期幼蟲發(fā)育歷期,為后續(xù)研究Ⅰ型幾丁質(zhì)酶基因（LdCht5）和Ⅱ型幾丁質(zhì)酶基因（dCht10）在舞毒蛾幼蟲體內(nèi)的齡期表達(dá)模式提供了依據(jù)。本研究克隆得到舞毒蛾LdCht10基因的關(guān)鍵序列2057bp,編碼685個氨基酸,其中包括一個完整的催化區(qū)和幾丁質(zhì)結(jié)合區(qū)序列。另外,克隆獲得了內(nèi)參基因... 

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 舞毒蛾概述
        1.1.1 舞毒蛾分布、習(xí)性及特征
        1.1.2 舞毒蛾的治理
    1.2 昆蟲幾丁質(zhì)和幾丁質(zhì)酶
        1.2.1 昆蟲幾丁質(zhì)
        1.2.2 昆蟲幾丁質(zhì)酶
        1.2.3 昆蟲幾丁質(zhì)酶的應(yīng)用
    1.3 RNA干擾及其在昆蟲功能基因研究中的應(yīng)用
    1.4 本論文的研究目的和意義
    1.5 本研究課題的來源及主要研究內(nèi)容
第二章 舞毒蛾的人工飼養(yǎng)及發(fā)育齡期統(tǒng)計
    2.1 試蟲來源
    2.2 舞毒蛾的飼養(yǎng)
    2.3 舞毒蛾幼蟲各齡期的發(fā)育天數(shù)統(tǒng)計
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 舞毒蛾幼蟲各個齡期的形態(tài)特征
        2.4.2 舞毒蛾幼蟲各齡期發(fā)育天數(shù)
    2.5 討論
第三章 舞毒蛾Ⅱ型幾丁質(zhì)酶關(guān)鍵序列的克隆和生物信息學(xué)分析及內(nèi)參基因的克隆
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗昆蟲
        3.1.2 實驗試劑及試劑盒
        3.1.3 儀器設(shè)備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 舞毒蛾Ⅱ型幾丁質(zhì)酶基因關(guān)鍵序列的獲取
        3.2.2 舞毒蛾內(nèi)參基因18S rRNA和β-actin的克隆
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 舞毒蛾Ⅱ型幾丁質(zhì)酶基因關(guān)鍵序列的拼接與及生物信息學(xué)分析
        3.3.2 舞毒蛾18S rRNA的克隆與序列分析
        3.3.3 舞毒蛾內(nèi)參基因β-actin的克隆
    3.4 討論
第四章 舞毒蛾Ⅰ和Ⅱ型幾丁質(zhì)酶基因的時空表達(dá)
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗試蟲
        4.1.2 實驗試劑及儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 不同齡期舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型幾丁質(zhì)酶基因的表達(dá)
        4.2.2 不同組織舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型幾丁質(zhì)酶基因的表達(dá)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 不同齡期舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型幾丁質(zhì)酶基因的表達(dá)分析
        4.3.2 舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型幾丁質(zhì)酶基因的不同組織部位表達(dá)分析
    4.4 討論
第五章 舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型幾丁質(zhì)酶基因的功能分析
    5.1 材料與試劑
        5.1.1 試驗昆蟲
        5.1.2 試劑與儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 dsRNA的體外合成
        5.2.2 dsRNA的注射與觀察
        5.2.3 RNAi結(jié)果觀察
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 舞毒蛾Ⅰ型幾丁質(zhì)酶基因的功能分析
        5.3.2 舞毒蛾Ⅱ型幾丁質(zhì)酶基因的功能分析
    5.4 討論
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同人工飼料對舞毒蛾幼蟲生長發(fā)育的影響[J]. 梁洪柱,陳倩,田會鵬,梁曉梅.  中國森林病蟲. 2013(06)
[2]昆蟲的RNA干擾[J]. 楊廣,尤民生,趙伊英,劉春輝.  昆蟲學(xué)報. 2009(10)
[3]昆蟲RNAi技術(shù)及其應(yīng)用[J]. 何正波,陳斌,馮國忠.  昆蟲知識. 2009(04)
[4]舞毒蛾的發(fā)生與防治技術(shù)[J]. 王清樹,慈維華.  現(xiàn)代化農(nóng)業(yè). 2007(07)
[5]人工飼料飼養(yǎng)舞毒蛾的試驗[J]. 王志英,王秀國,王麗君.  東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2004(06)
[6]不同食料植物對舞毒蛾生長發(fā)育的影響[J]. 石娟,王月,徐洪儒,閆國增,梁洪柱,張秋霜.  北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2003(05)
[7]舞毒蛾生物防治研究進(jìn)展[J]. 胡春祥.  東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2002(04)
[8]幾丁質(zhì)的研究與進(jìn)展[J]. 陳西廣,劉萬順,劉晨光.  生物工程進(jìn)展. 1997(03)
[9]化學(xué)藥劑防治舞毒蛾幼蟲試驗研究[J]. 趙方桂，劉元鉛，李濤，席永華，閡祥宏.  山東林業(yè)科技. 1994(05)
[10]中國舞毒蛾天敵昆蟲名錄[J]. 嚴(yán)靜君，姚德富，劉后平，李廣武.  林業(yè)科技通訊. 1994(05)

碩士論文
[1]舞毒蛾Ⅰ型幾丁質(zhì)酶基因的克隆、序列分析及真核表達(dá)[D]. 宋志芳.太原理工大學(xué) 2013
[2]亞洲玉米螟幾丁質(zhì)水解酶的克隆表達(dá)與生化性質(zhì)表征[D]. 吳青悅.大連理工大學(xué) 2012
[3]飛蝗幾丁質(zhì)酶基因的功能研究[D]. 李大琪.山西大學(xué) 2011



本文編號：3703607