為篩選枯草芽孢桿菌EDR4拮抗相關(guān)基因,利用轉(zhuǎn)座子TnYLB-1構(gòu)建了該菌株的插入突變體庫(kù)。通過(guò)對(duì)種子液OD₆₀₀值、轉(zhuǎn)接培養(yǎng)液一繼續(xù)培養(yǎng)OD₆₀₀值及轉(zhuǎn)接培養(yǎng)液二后的孵育時(shí)間3個(gè)因素設(shè)計(jì)正交試驗(yàn),轉(zhuǎn)化過(guò)程中加入pMarA質(zhì)粒的不同量及質(zhì)粒與感受態(tài)細(xì)胞共培養(yǎng)的不同時(shí)間研究了兩種因素對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響,確定了pMarA對(duì)EDR4的轉(zhuǎn)化體系。通過(guò)50℃高溫誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生了EDR4的插入突變體,挑取單菌落2 756個(gè),構(gòu)建了EDR4的插入突變體庫(kù),隨機(jī)挑選14株突變體經(jīng)PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)座子TnYLB-1序列,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)座子已成功插入到EDR4基因組中,進(jìn)一步通過(guò)Southern雜交驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)座子TnYLB-1主要以單拷貝形式隨機(jī)插入,也有部分多拷貝插入。以油菜菌核病菌為靶標(biāo)菌,從640株突變菌株中篩選出兩株抑菌活性明顯下降的突變株,分別為EDR4-T1272和EDR4-T1473,通過(guò)生物學(xué)特性觀察發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)座子的插入未對(duì)EDR4生物學(xué)特性產(chǎn)生影響,通過(guò)PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)座子序列發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)座子可以在突變體中穩(wěn)定遺傳。經(jīng)過(guò)反向PCR擴(kuò)增出EDR4-T1272、EDR4-T1... 

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