灰霉菌（Botrytis cinerea）是導致田間以及采后果蔬病害的重要的植物病原真菌,造成果蔬產(chǎn)量和采后供應的大量損失。本文以廣寄主的植物病原真菌灰霉菌為研究對象,開展了藍光受體基因Bcwc1的缺失突變體的篩選和Bcwc1對灰霉菌生長發(fā)育、抗逆以及致病性的影響研究,為今后深入解析灰霉菌的受體功能提供了重要的理論依據(jù)。光是一種重要的環(huán)境因子,光可以調控植物病原真菌的生長發(fā)育、生理周期、基因表達以及各種代謝活動。本實驗室前期觀察到了灰霉菌的光應答生長模式,其中藍光可以顯著抑制灰霉菌孢子的形成和黑色素的產(chǎn)生,為了解析灰霉菌對藍光下生長表型變化的原因,本研究首先從灰霉菌數(shù)據(jù)庫中獲得三個類似藍光受體基因Bcwc1、Bcwc2、Vivid的序列,應用RT-PCR分析表明這三個基因的轉錄均受光誘導,其中Bcwcl基因編碼的BcWC1屬于類藍光受體中的關鍵成員,具有接收光信號功能的LOV結構域,以及調節(jié)下游光響應基因表達的鋅指結構域。因此本文應用同源重組策略敲除Bcwc1,獲得兩株缺失突變體,將這兩株突變體分別命名為ΔBcwc1-59（WC1-59）和 ΔBcwcl-64（WC1-64）。通過突變... 

【文章來源】：華東師范大學上海市211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
綜述 藍光受體蛋白功能的研究
    1 灰霉菌概述
        1.1 灰霉菌簡介
        1.2 灰霉菌侵染過程及致病因子概述
    2 藍光受體的研究進展
        2.1 藍光對真菌的調控作用
        2.2 藍光受體的家族與分布
            2.2.1 植物的藍光受體
            2.2.2 細菌的藍光受體
            2.2.3 真菌的藍光受體
    3. 本論文研究的目的與意義
1 引言
2 材料和方法
    2.1 材料
    2.2 方法
        2.2.1 灰霉菌Bcwc1生物信息學分析
        2.2.2 半定量PCR分析
        2.2.3 灰霉菌基因組的提取
        2.2.4 融合PCR構建用于敲除灰霉菌目的基因的同源重組片段
        2.2.5 灰霉菌原生質體的制備及轉化
        2.2.6 灰霉菌轉化子篩選與鑒定
        2.2.7 灰霉菌藍光受體ΔBcwc1突變株與野生型B05.10生長發(fā)育表型研究
        2.2.8 不同光照條件下菌落生長速率和菌絲形態(tài)
        2.2.9 不同光照條件下孢子萌發(fā)和發(fā)芽管伸長
        2.2.10 不同光照條件下孢子產(chǎn)量
        2.2.11 不同光照條件下產(chǎn)孢結構
        2.2.12 不同光照條件下黑色素積累分析
        2.2.13 不同光照條件下紫外抗性分析
        2.2.14 不同光照條件下發(fā)育相關基因的表達
        2.2.15 反接種測定致病性
        2.2.16 光照和黑暗下致病性的檢測
        2.2.17 附著胞和侵染菌絲的形成
        2.2.18 DAB染色檢測發(fā)病組織活性氧水平
        2.2.19 細胞壁裂解酶的分泌檢測
3 結果與分析
    3.1 灰霉菌藍光受體基因Bcwc1的生物信息學與光照響應分析
        3.1.1 Bcwc1基因的生物學分析
        3.1.2 光照時間對Bcwc1表達的影響
        3.1.3 光照強度對Bcwc1表達的影響
    3.2 灰霉菌藍光受體Bcwc1基因敲除以及ΔBcwc1突變體的篩選鑒定
        3.2.1 ΔBcwc1突變體基因組水平的篩選鑒定
        3.2.2 ΔBcwc1突變體RT轉錄水平的鑒定
    3.3 灰霉菌野生型B05.10與ΔBcwc1突變體生長發(fā)育表型研究
        3.3.1 生長速率及菌絲形態(tài)比較
        3.3.2 菌絲量的測定
        3.3.3 不同光照條件對灰霉菌生長速率和菌絲形態(tài)的影響
        3.3.4 不同光照條件下野生型和突變體菌株孢子和發(fā)芽管伸長的比較
        3.3.5 不同光照條件對灰霉菌野生型和突變體菌株產(chǎn)孢量的影響
        3.3.6 不同光照條件下灰霉菌野生型和突變體菌株產(chǎn)孢結構的比較
        3.3.7 不同光照條件下灰霉菌野生型和突變體菌株黑色素積累的比較
        3.3.8 灰霉菌野生型和突變體抗紫外脅迫特性的研究
        3.3.9 光照和黑暗條件下發(fā)育相關基因的表達
    3.4 灰霉菌野生型B05.10與ΔBcwc1突變體的致病性分析
        3.4.1 灰霉菌野生型B05.10與ΔBcwc1突變體在不同果蔬上的致病性
        3.4.2 光照和黑暗下灰霉菌野生型B05.10與ΔBcwc1突變體致病性的探究
        3.4.3 灰霉菌野生型B05.10與ΔBcwc1突變體侵染結構的探究
        3.4.4 灰霉菌野生型B05.10與ΔBcwc1突變株活性氧分泌的能力
        3.4.5 灰霉菌野生型B05.10與ΔBcwc1突變體細胞壁裂解酶的分泌
4 討論
    4.1 灰霉菌藍光受體Bcwc1的結構信息
    4.2 灰霉菌藍光受體Bcwc1對發(fā)育的調節(jié)作用
    4.3 灰霉菌Bcwc1對致病性的調節(jié)作用
參考文獻
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]真菌發(fā)育過程中的藍光誘導[J]. 付鳴佳,查美玲,王舒,沈俊良,金華燕.  激光生物學報. 2012(01)
[2]藍光對真菌的調控作用及研究進展[J]. 蘇捷,朱俊晨,楊汝德.  微生物學雜志. 2006(02)
[3]3株抗灰霉病放線菌的分離和鑒定[J]. 吳文龍,段淑蓉,李文均,段若玲,徐麗華,姜成林.  云南大學學報(自然科學版). 2004(03)



本文編號：3643293