漆酶（Laccase）屬于多銅氧化酶家族。昆蟲漆酶催化兒茶酚類氧化生成醌類,使其與表皮中的蛋白質(zhì)親核側(cè)鏈形成共價(jià)交聯(lián)反應(yīng),或發(fā)生聚合使表皮脫水,從而堅(jiān)固和穩(wěn)定表皮結(jié)構(gòu),對昆蟲的生長發(fā)育十分重要。因此,漆酶可作為潛在的殺蟲劑靶標(biāo)。目前,對昆蟲漆酶全部組織和發(fā)育階段的表達(dá)模式研究較少。本文以農(nóng)藥害蟲亞洲玉米螟為研究對象,克隆了亞洲玉米螟漆酶-1和漆酶-2基因,并對它們的表達(dá)模式和生理功能進(jìn)行了研究,主要研究內(nèi)容如下：（1）通過PCR及RACE克隆獲得亞洲玉米螟漆酶-1（OfLacl）的cDNA序列,其全長為3065bp,開放閱讀框2403bp,編碼800個(gè)氨基酸,理論分子量為90.6kDa,等電點(diǎn)為5.34。氨基酸序列比對結(jié)果表明：亞洲玉米螟OfLacl與家蠶BmMCO1和煙草天蛾MsLacl的一致性較高,達(dá)到70%以上；而與黑腹果蠅DmMCO1、岡比亞按蚊AgMCO1和赤擬谷盜TcLacl的一致性較低,在50%以下。運(yùn)用半定量PCR分析了OfLacl在不同組織中的基因轉(zhuǎn)錄水平,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR研究了OfLacl在不同發(fā)育時(shí)期和蛻皮激素誘導(dǎo)下的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明,OfLacl在中腸和... 

【文章來源】：大連理工大學(xué)遼寧省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 漆酶的基本特性
        1.1.1 漆酶
        1.1.2 漆酶的結(jié)構(gòu)
        1.1.3 漆酶的催化機(jī)制
        1.1.4 漆酶的應(yīng)用
    1.2 昆蟲漆酶的研究進(jìn)展
        1.2.1 昆蟲漆酶
        1.2.2 昆蟲漆酶的分類
        1.2.3 昆蟲漆酶的理化性質(zhì)
        1.2.4 昆蟲漆酶的功能
    1.3 本論文的選題依據(jù)和研究內(nèi)容
        1.3.1 選題依據(jù)
        1.3.2 研究內(nèi)容
2 亞洲玉米螟漆酶-1基因的克隆和表達(dá)分析
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.2.1 供試?yán)ハx
        2.2.2 試劑和試劑盒
        2.2.3 總RNA提取及cDNA合成
        2.2.4 亞洲玉米螟漆酶-1基因的克隆
        2.2.5 生物信息學(xué)分析
        2.2.6 組織表達(dá)特性檢測
        2.2.7 發(fā)育表達(dá)特性檢測
        2.2.8 注射蛻皮激素后OfLac1的轉(zhuǎn)錄水平分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 亞洲玉米螟白蛹總RNA的提取
        2.3.2 亞洲玉米螟漆酶-1(OfLac1)基因的克隆
        2.3.3 洲玉米螟漆酶-1(OfLac1)基因的生物信息學(xué)分析
        2.3.4 OfLac1在不同組織中的表達(dá)模式
        2.3.5 OfLac1在不同生長發(fā)育時(shí)期的表達(dá)模式
        2.3.6 注射蛻皮激素(20E)后OfLacl的表達(dá)分析
    2.4 分析討論
    2.5 小結(jié)
3 亞洲玉米螟漆酶-2基因的克隆、表達(dá)分析及生理功能研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 亞洲玉米螟漆酶-2基因的克隆
        3.2.3 亞洲玉米螟OfLac2基因的生物信息學(xué)分析
        3.2.4 組織表達(dá)特性檢測
        3.2.5 發(fā)育表達(dá)特性檢測
        3.2.6 注射蛻皮激素后OfLac2的表達(dá)分析
        3.2.7 亞洲玉米螟OfLac2 RNA干擾后表型分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 亞洲玉米螟漆酶-2(OfLac2)基因的克隆
        3.3.2 OfLac2的生物信息學(xué)分析
        3.3.3 OfLac2在不同組織中的表達(dá)模式
        3.3.4 OfLac2在不同生長發(fā)育時(shí)期的表達(dá)模式
        3.3.5 注射蛻皮激素后OfLac2的表達(dá)分析
        3.3.6 亞洲玉米螟OfLac2 RNA干擾后表型分析
    3.4 分析討論
    3.5 小結(jié)
4 亞洲玉米螟漆酶-2的重組表達(dá)
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.2.3 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115
        4.2.4 重組畢赤酵母的誘導(dǎo)表達(dá)
        4.2.5 重組OfLac2的分離純化
        4.2.6 SDS-PAGE及Western Blot
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.3.2 OfLac2在畢赤酵母中的表達(dá)
    4.4 分析討論
    4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A OfLac1的cDNA序列與編碼的氨基酸序列
附錄B OfLac2的cDNA序列與編碼的氨基酸序列
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]飛蝗漆酶基因mRNA表達(dá)及功能研究[D]. 余志濤.山西大學(xué) 2012
[2]漆酶基因在畢赤酵母中高效表達(dá)[D]. 李劍鳳.安徽大學(xué) 2006
[3]亞洲玉米螟不同地理種群生態(tài)適應(yīng)性和種群遺傳結(jié)構(gòu)的RAPD分析[D]. 劉寧.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2003



本文編號：3632116