本文以渤海海泥生境細(xì)菌TCS001為研究對(duì)象,研究其生理生化性質(zhì)與系統(tǒng)分類地位,探討最佳發(fā)酵條件,揭示TCS001抑菌活性、生防作用及其初步作用機(jī)理,以期為TCS001微生物農(nóng)藥開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1、結(jié)合形態(tài)學(xué)、生理生化試驗(yàn)與gyrA分子鑒定技術(shù),對(duì)菌株TCS001進(jìn)行菌種鑒定;測定不同培養(yǎng)時(shí)間TCS001的OD₆₃₀,繪制細(xì)菌生長曲線。結(jié)果顯示TCS001為革蘭氏陽性菌,系芽孢桿菌科（Bacillaceae）芽孢桿菌屬貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis）;TCS001適宜生長期為0-52 h,對(duì)數(shù)生長期為10-20 h。2、采用平板對(duì)峙法檢測TCS001的抑菌譜,發(fā)現(xiàn)TCS001有廣譜的抑菌活性,其對(duì)黃瓜灰霉病菌（Botrytis cinerea,BC）抑菌活性最強(qiáng),為84.12±0.19%;采用單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面分析法對(duì)TCS001的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,優(yōu)化后的最佳條件為牛肉浸膏4.0 g,轉(zhuǎn)速164 rpm,溫度25℃,該條件下培養(yǎng)得到的發(fā)酵濾液,稀釋20倍后,對(duì)BC生長抑制率仍然可達(dá)89.27±2.06%。3、制備不同濃度TCS001... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

我國微生物農(nóng)藥登記情況匯總Figure1-1SummaryofmicrobialpesticideregistrationinChina注：數(shù)據(jù)摘自2019年4月4日中國農(nóng)藥工業(yè)協(xié)會(huì)《穎態(tài)分析》

圖 2-1 TCS001 在光學(xué)顯微鏡下的形態(tài)e 2-1 Morphology of strain TCS001 under an optical mic芽孢時(shí)的細(xì)胞形態(tài)；B-TCS001 產(chǎn)生芽孢后的形態(tài)；C-TCS001 游離征果見表 2-2，表明菌株 TCS001 能分解利用葡萄糖，可水解淀粉和明膠，能利用葡萄糖產(chǎn)酸，原反應(yīng)和接觸酶反應(yīng)均呈陽性，甲基紅試驗(yàn)和 H2SS001 的培養(yǎng)性狀、形態(tài)及生理生化特征，初步鑒108,109]。表 2- 2 生理生化試驗(yàn)結(jié)果e 2-2 The results of physiological and biochemical identif結(jié) 果 項(xiàng) 目 驗(yàn) + 接觸酶試驗(yàn)葡萄糖 + 硝酸鹽還原試驗(yàn)乳糖 + V-P 試驗(yàn) 蔗糖 + H2S 產(chǎn)氣試驗(yàn)果糖 + 明膠液化 木糖 - 甲基紅試驗(yàn)

甲基紅試驗(yàn)和 H2S 反應(yīng)呈陰性（圖2-2）。根據(jù)菌株 TCS001 的培養(yǎng)性狀、形態(tài)及生理生化特征，初步鑒定其為芽孢桿菌屬（Bacillus）細(xì)菌[108,109]。表 2- 2 生理生化試驗(yàn)結(jié)果Table 2-2 The results of physiological and biochemical identification項(xiàng) 目 結(jié) 果 項(xiàng) 目 結(jié) 果葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn) + 接觸酶試驗(yàn) +碳源利用試驗(yàn)葡萄糖 + 硝酸鹽還原試驗(yàn) +乳糖 + V-P 試驗(yàn) +蔗糖 + H2S 產(chǎn)氣試驗(yàn) -果糖 + 明膠液化 +木糖 - 甲基紅試驗(yàn) -麥芽糖 + 氧化酶試驗(yàn) +甘露醇+淀粉水解試驗(yàn) +檸檬酸鹽試驗(yàn) -注：a：“+”表示陽性；注：b：“-”表示陰性。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]海洋細(xì)菌GM-1-1產(chǎn)芽孢發(fā)酵培養(yǎng)基和搖瓶發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 吳海霞,陳茹,曹雪梅,李歡,暴增海,馬桂珍,王軍強(qiáng),羅志會(huì).  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2018(12)
[2]南極交替單胞菌R11-5產(chǎn)卡拉膠酶的發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 潘愛紅,李江,王蕾,宋益民.  微生物學(xué)通報(bào). 2018(09)
[3]拮抗細(xì)菌在植物病害生物防治中應(yīng)用的研究進(jìn)展[J]. 王超,郭堅(jiān)華,席運(yùn)官,田偉.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(18)
[4]貝萊斯芽孢桿菌S6拮抗物質(zhì)分離純化及抑菌機(jī)理[J]. 楊勝清,張帆,馬貴龍.  農(nóng)藥. 2017(09)
[5]Bacillomycin D發(fā)酵與純化工藝優(yōu)化及其抑菌活性初步研究[J]. 顧康博,張道敬,羅遠(yuǎn)嬋,李元廣.  農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào). 2017(04)
[6]拮抗尖孢鐮刀菌的PGPR篩選與抑菌機(jī)制的初步研究[J]. 劉東岳,李敏,孫文獻(xiàn),劉潤進(jìn).  植物病理學(xué)報(bào). 2017(05)
[7]我國微生物農(nóng)藥的應(yīng)用現(xiàn)狀及發(fā)展前景[J]. 苑麗蒲.  化工設(shè)計(jì)通訊. 2016(12)
[8]生防菌Act12鐵載體合成酶Ser基因的功能[J]. 趙玉玲,董奉鑫,李素儉,黃麗麗,顏霞.  微生物學(xué)通報(bào). 2017(01)
[9]利用響應(yīng)面法優(yōu)化固氮類芽孢桿菌Paenibacillus sp.1–49的發(fā)酵培養(yǎng)基（英文）[J]. 鄧志平,陳浩,陳三鳳.  微生物學(xué)報(bào). 2016(09)
[10]田間試驗(yàn)常見問題的表現(xiàn)及對(duì)策[J]. 師萍.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè). 2015(02)

博士論文
[1]印楝內(nèi)生放線菌抑菌活性物質(zhì)及作用機(jī)制初步研究[D]. 張麗.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014

碩士論文
[1]決明子提取物對(duì)番茄灰霉病菌的生物活性及作用機(jī)理研究[D]. 秦楠.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]普城沙雷菌A21-4對(duì)辣椒誘導(dǎo)抗性機(jī)理的初步研究[D]. 張維娜.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



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