蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis, Bt）是目前世界上用途最廣、產(chǎn)量最大的微生物殺蟲劑,其編碼Bt殺蟲毒蛋白基因作為主要的殺蟲基因轉(zhuǎn)入到多種作物中,在害蟲防治中成效顯著。但與此同時(shí),Bt制劑的大量使用和轉(zhuǎn)Bt作物的廣泛種植,使得Bt的抗性問題越來越嚴(yán)重。十字花科重要害蟲小菜蛾P(guān)lutella xylostella （L.）是最早被發(fā)現(xiàn)且目前僅有的6種在田間對Bt產(chǎn)生抗性的害蟲之一。但到目前為止,Bt對小菜蛾的殺蟲作用過程和小菜蛾對Bt的抗性機(jī)理,研究的仍不是完全清楚。在本研究中,我們建立了對Cry1Ac有高于5000倍抗性的近等基因系小菜蛾種群,同時(shí)研究了其相關(guān)生物學(xué)特性。同時(shí),我們首次利用shotgun HPLC-ESI-MS/MS技術(shù)對小菜蛾幼蟲中腸蛋白質(zhì)進(jìn)行了蛋白質(zhì)基因組分析。同時(shí)為了更好的揭示小菜蛾抗Cry1Ac的分子機(jī)理,我們利用iTRAQ和MRM兩種蛋白質(zhì)組分析技術(shù),對兩個種群的中腸蛋白質(zhì)組進(jìn)行了定量分析,發(fā)現(xiàn)了大量差異表達(dá)蛋白質(zhì)和可能的Bt受體。結(jié)果如下：1.小菜蛾抗CrylAc近等基因系種群的構(gòu)建我們利用弗羅里達(dá)Florida抗Cry1Ac小... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：163 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 蘇云金芽孢桿菌及小菜蛾概述
        1.1.1 蘇云金芽孢桿菌
        1.1.2 Bt晶體毒蛋白的殺蟲機(jī)理及抗性
        1.1.3 小菜蛾及其危害
        1.1.4 小菜蛾對蘇云金芽孢桿菌的抗性
    1.2 抗Bt小菜蛾的生物學(xué)研究進(jìn)展
        1.2.1 小菜蛾對Bt的交互抗性
        1.2.2 抗性遺傳方式
        1.2.3 抗性適合度代價(jià)
    1.3 昆蟲抗性近等基因系的研究
        1.3.1 近等基因系的研究
        1.3.2 昆蟲抗性近等基因系
    1.4 蛋白質(zhì)組學(xué)
        1.4.1 蛋白質(zhì)基因組簡介
        1.4.2 蛋白質(zhì)組在昆蟲中腸研究中的應(yīng)用
        1.4.3 蛋白質(zhì)組(iTRAQ)技術(shù)
        1.4.4 目標(biāo)蛋白的質(zhì)譜定量檢測技術(shù)(MRM)
    1.5 本研究目的意義和基本內(nèi)容
        1.5.1 本研究的目的意義
        1.5.2 本研究技術(shù)路線
第2章 小菜蛾抗CRY1AC近等基因系的建立與維持
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 試驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 高世代回交法構(gòu)建近等基因系種群
        2.2.2 重組自交系法構(gòu)建近等基因系種群
        2.2.3 利用ISSR評估種群近等性
    2.3 小結(jié)與討論
第3章 抗CRY1AC近等基因系小菜蛾的抗性相關(guān)生物學(xué)研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 近等基因系抗性小菜蛾與其他Cry蛋白的交互抗性
        3.2.2 抗Cry1Ac近等基因系小菜蛾的生命表
        3.2.3 抗Cry1Ac近等基因系小菜蛾的適合度
        3.2.4 利用單對雜交研究抗性遺傳方式
        3.2.5 利用死亡幾率曲線研究抗性遺傳方式
    3.3 小結(jié)與討論
第4章 小菜蛾幼蟲中腸的蛋白質(zhì)基因組學(xué)研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 試驗(yàn)方法
    4.2 結(jié)果與討論
        4.2.0 數(shù)據(jù)庫情況
        4.2.1 鑒定肽段情況
        4.2.2 與基因組注釋編碼蛋白的基因相匹配的基因
        4.2.3 與核酸序列匹配的肽段序列(GSSP)
        4.2.4 利用GSSPs修正現(xiàn)有的基因模型
        4.2.5 可變剪接數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建及研究
        4.2.6 新基因的確定
        4.2.7 小菜蛾幼蟲中腸蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)
        4.2.8 小菜蛾幼蟲中腸中高豐度蛋白質(zhì)
        4.2.9 GO分析
        4.2.10 KEGG分析
        4.2.11 假定蛋白的鑒定
        4.2.12 與殺蟲劑抗性相關(guān)的蛋白質(zhì)
    4.3 小結(jié)與討論
第5章 抗CRY1AC近等基因系小菜蛾的比較蛋白質(zhì)組研究
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試驗(yàn)材料
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.2.1 幼蟲中腸BBMV
        5.2.2 蛋白質(zhì)和肽段的鑒定
        5.2.3 差異表達(dá)蛋白質(zhì)
        5.2.4 差異表達(dá)蛋白質(zhì)GO富集分析
        5.2.5 MRM實(shí)驗(yàn)方法的建立
        5.2.6 MRM測定結(jié)果的質(zhì)控
        5.2.7 差異表達(dá)蛋白及Bt受體的MRM驗(yàn)證
    5.3 小結(jié)與討論
第6章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄 攻讀博士學(xué)位期間論文發(fā)表情況
致謝



本文編號：3569049