植物致病真菌是造成主要糧食和經濟作物減產的頭號殺手,目前大量使用的化學農藥已經對環(huán)境和人類健康造成了巨大的負面影響。同時開發(fā)新型化學農藥的高成本及耐藥微生物的迅速出現(xiàn)等因素,引起我們對生物農藥的關注。其中,抗真菌蛋白因其來源廣泛及其獨特的作用機制,為新型抗真菌活性物質的研究提供了重要信息,并成為了研究熱點。此外,陸地生物資源已被大量開發(fā),發(fā)現(xiàn)新型抗菌物質的可能性不斷下降,迫切需要尋找新的來源。海洋提供了非常特殊的生態(tài)環(huán)境,使海洋微生物能夠進化出特殊的代謝途徑,產生更多新型的抗菌活性物質,將在植物病原菌治理及活性物質開發(fā)方面發(fā)揮重要作用,因此,從海洋微生物中分離抗真菌蛋白具有重要的研究意義。為了從海洋中尋找具有高效抗菌活性的天然產物,本研究首先采用平板稀釋法和平板擴散法從深海中篩選活性菌株。通過使用不同配方的培養(yǎng)基,對采集自各種海洋環(huán)境（大洋、北極和南極）的深海樣品進行微生物菌株的分離篩選,篩選到了300余株真菌以及大量的細菌,其中包括了許多具有抗菌活性的微生物。接著以7株植物病原真菌和7株致病細菌為指示菌進一步篩選并鑒定出具有高效抗菌活性的菌株,植物病原真菌包括宛氏擬青霉、膠孢炭疽菌、... 

【文章來源】：廈門大學福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：123 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
Content
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 真菌的危害
    1.2 微生物農藥
    1.3 海洋活性微生物資源
        1.3.1 海洋微生物的多樣性
        1.3.2 海洋微生物是新型活性物質的重要來源
    1.4 微生物來源的抗菌蛋白
        1.4.1 微生物來源抗菌蛋白的分類
        1.4.2 真菌來源抗菌蛋白的作用機制
    1.5 抗菌蛋白在農業(yè)防治中的應用
        1.5.1 利用抗菌蛋白控制植物疾病
        1.5.2 抗菌蛋白的合成
        1.5.3 利用轉基因植物表達抗菌蛋白
    1.6 本課題的研究意義和目的
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 樣品來源
        2.1.2 受試菌
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 寡核苷酸引物
        2.1.5 主要試劑及材料
        2.1.6 主要溶液
        2.1.7 主要儀器設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 菌株的初篩及保藏
        2.2.2 拮抗活性菌株的復篩
        2.2.3 拮抗活性菌株的分子生物學鑒定
        2.2.4 粗蛋白的分離
        2.2.5 色譜分析法分離抗真菌蛋白
        2.2.6 硝酸銀染色
        2.2.7 質譜分析
        2.2.8 N端測序
        2.2.9 抗真菌蛋白MIC(最低抑制濃度)測定
        2.2.10 抗真菌蛋白的理化性質分析
        2.2.11 添加營養(yǎng)源對發(fā)酵上清活性的影響
        2.2.12 抗菌物質應用于農作物病害防治
第三章 結果與分析
    3.1 抗菌活性菌株的分離篩選及初步鑒定
        3.1.1 活性菌株篩選
        3.1.2 活性菌株的鑒定與統(tǒng)計
    3.2 海洋桔青霉W1抗真菌蛋白的分離純化
        3.2.1 海洋真菌W1的鑒定
        3.2.2 海洋桔青霉W1發(fā)酵上清的抑菌活性
        3.2.3 飽和硫酸銨沉淀及抗菌物質的初步鑒定
        3.2.4 DEAE離子交換層析及活性檢測
        3.2.5 CM離子交換層析及活性檢測
        3.2.6 SDS-PAGE和硝酸銀染色
        3.2.7 抗真菌蛋白的質譜分析
        3.2.8 抗真菌蛋白的N端測序分析
    3.3 海洋桔青霉W1抗真菌蛋白的理化性質分析
        3.3.1 抗真菌蛋白的MIC(最低抑制濃度)測定
        3.3.2 紫外輻射對抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.3 溫度對抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.4 加熱時間對抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.5 金屬離子對抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.6 有機溶劑對抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.7 pH對抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.8 表面活性劑對抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.9 蛋白酶對抗真菌蛋白活性的影響
    3.4 添加營養(yǎng)源對發(fā)酵上清活性的影響
    3.5 海洋桔青霉W1在作物病害防治上的應用
第四章 小結與討論
    4.1 小結
    4.2 討論
展望
參考文獻
附錄1 第21次大洋科考采集的印度洋樣品站位信息表
附錄2 第22次大洋科考采集的南大西洋樣品站位信息表
附錄3 第26次大洋科考采集的南大西洋樣品站位信息表
附錄4 第5次北極科考采集的沉積物樣品站位信息表
附錄5 第28次南極科考采集的水樣站位信息表
附錄6 第29次南極科考采集的樣品站位信息表
碩士期間發(fā)表的研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]微生物農藥研究進展[J]. 袁兵兵,張海青,陳靜.  山東輕工業(yè)學院學報(自然科學版). 2010(01)
[2]微生物資源在現(xiàn)代農業(yè)中的應用[J]. 袁龍剛,張軍林.  陜西農業(yè)科學. 2006(05)
[3]海洋細菌B-9987菌株產生的抑菌物質及對幾種植物病原真菌的作用[J]. 田黎,顧振芳,陳杰,黃樂平,田玲.  植物病理學報. 2003(01)



本文編號：3540610