核盤(pán)菌（Sclerotinia sclerotiorum（Lib.）de Bary）是一種死體營(yíng)養(yǎng)型植物病原真菌,可以侵染400多種植物,在世界范圍內(nèi)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。侵染墊是核盤(pán)菌重要的侵染結(jié)構(gòu),在侵入寄主組織中起決定性作用,在與寄主互作過(guò)程中,核盤(pán)菌能夠產(chǎn)生一系列的致病因子,草酸在破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),降低寄主抗性方面具有重要作用,是核盤(pán)菌的重要致病因子。在核盤(pán)菌中存在9個(gè)含有GATA鋅指結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子。其中,Ss Nsd1已有研究能夠調(diào)控菌核、子囊盤(pán)、侵染墊的形成與發(fā)育,并對(duì)核盤(pán)菌精孢子的產(chǎn)生有負(fù)調(diào)控作用。Ss AMS2也是一個(gè)GATA轉(zhuǎn)錄因子,與裂殖酵母中的Ams2具有同源性,推斷其在調(diào)控組蛋白基因轉(zhuǎn)錄起始中起重要作用。本研究克隆得到Ss Ams2基因的兩個(gè)靶序列,并連接于RNAi載體p Silent-Dual上,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入核盤(pán)菌原生質(zhì)體后對(duì)基因Ss Ams2進(jìn)行沉默,得到沉默轉(zhuǎn)化子,發(fā)現(xiàn)沉默轉(zhuǎn)化子中Ss Ams2基因的表達(dá)量顯著下降。進(jìn)一步分析沉默轉(zhuǎn)化子與野生型的表型差異,在核盤(pán)菌的生長(zhǎng)發(fā)育方面,沉默轉(zhuǎn)化子的菌絲生長(zhǎng)速率變慢,菌核形成總重量降低,菌絲彎曲,分枝顯直角,且分枝菌... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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核盤(pán)菌生活史示意圖(JeffreyA.Rollins)

.1 SsAms2 RNAi 載體構(gòu)建。A：pSilent-Dual1 載體質(zhì)粒圖譜，B：RNAi 載體構(gòu)建策略。Fig.2.1 Construction of SsAms2 RNA interference plasmid. A: pSilent-Dual1plasmid profiles, B: RNA interference plasmid construction strategy.

圖 3.1 SsAms2 保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)分析Fig.3.1 Conserved domains analysis of SsAms23.1.2 SsAMS2 轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)化分析在 NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)中對(duì) SsAMS2 蛋白序列進(jìn)行 BLAST，并進(jìn)行 SmartBLAST序列分析（圖 3.2），在模式生物斑馬魚(yú)（Danio rerio），人類(lèi)（Homo sapiens），家鼠（Mus musculus），果蠅（Drosophila melanogaster）以及裂殖酵母（S. pombe）中均有與 SsAMS2 同源的蛋白，其中裂殖酵母中的轉(zhuǎn)錄因子 Ams2 與 SsAMS2具有較高的同源性。


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