桔小實(shí)蠅Bactrocera dorsalis （Hendel）隸屬雙翅目Diptera、實(shí)蠅科Tephritidae,廣泛分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。桔小實(shí)蠅寄主范圍廣、適應(yīng)性、繁殖力以及擴(kuò)散能力強(qiáng),是一種重要的果蔬害蟲。該蟲成蟲產(chǎn)卵于果實(shí)內(nèi),孵化后的幼蟲通過潛居果瓤取食進(jìn)行危害,造成果實(shí)腐爛、未熟先落,使果蔬的經(jīng)濟(jì)價值和食用價值大幅度降低。桔小實(shí)蠅的防治經(jīng)歷了一個從誘集防治到化學(xué)防治的過程,目前,由于大量不合理地使用化學(xué)殺蟲劑,造成了桔小實(shí)蠅對多種常用殺蟲劑產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗藥性。昆蟲胰島素信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)可以調(diào)節(jié)機(jī)體的生長發(fā)育、代謝、生殖以及衰老等重要生理過程。因此,闡明桔小實(shí)蠅胰島素信號通路調(diào)控其變態(tài)發(fā)育的分子機(jī)制,可為尋找殺蟲劑新的作用靶標(biāo)提供理論基礎(chǔ)。本學(xué)位論文基于桔小實(shí)蠅轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫信息,運(yùn)用RT-PCR結(jié)合RACE技術(shù),從桔小實(shí)蠅體內(nèi)克隆獲得了6個胰島素信號通路基因的cDNA序列,并對其特征序列進(jìn)行注釋,利用qPCR技術(shù)解析了6個基因在桔小實(shí)蠅不同發(fā)育階段、不同組織的表達(dá)特性,以及饑餓脅迫和激素處理后基因的應(yīng)激表達(dá)模式；最后利用RNAi技術(shù)探索了胰島素受體底物蛋白（Insulin r... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 胰島素及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究概況
        1.1.1 胰島素
        1.1.2 胰島素信號通路
    1.2 昆蟲胰島素信號通路
        1.2.1 昆蟲胰島素受體及其信號通路中的其他成員
        1.2.2 昆蟲胰島素信號通路的生理功能
    1.3 饑餓與胰島素信號的關(guān)系
    1.4 昆蟲胰島素信號通路與其它昆蟲激素信號的相互作用
        1.4.1 胰島素信號與蛻皮激素的相互作用
        1.4.2 胰島素信號通路與保幼激素的相互作用
    1.5 胰島素對昆蟲脂肪體的影響
引言
第二章 桔小實(shí)蠅胰島素信號通路基因的克隆及序列分析
    2.1 材料和方法
        2.1.1 供試?yán)ハx
        2.1.2 主要儀器及試劑
        2.1.3 總RNA提取
        2.1.4 總RNA中g(shù)DNA的去除
        2.1.5 cDNA合成
        2.1.6 引物設(shè)計和合成
        2.1.7 PCR擴(kuò)增反應(yīng)
        2.1.8 克隆和測序
        2.1.9 生物信息學(xué)分析
    2.2 結(jié)果與分析
    2.3 討論
第三章 桔小實(shí)蠅胰島素信號通路基因的發(fā)育階段和組織表達(dá)特異性分析
    3.1 材料和方法
        3.1.1. 供試?yán)ハx
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
        3.1.3 總RNA提取
        3.1.4 cDNA合成
        3.1.5 引物設(shè)計和合成
        3.1.6 實(shí)時定量PCR
        3.1.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
        3.1.8 數(shù)據(jù)分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 引物擴(kuò)增效率
        3.2.2 胰島素信號通路基因在不同發(fā)育時期的表達(dá)分析
        3.2.3 胰島素信號通路基因在不同組織中的表達(dá)分析
        3.2.4 胰島素信號通路基因在成蟲不同組織中的表達(dá)分析
    3.3 討論
第四章 外源激素和饑餓對桔小實(shí)蠅胰島素信號通路基因表達(dá)的影響
    4.1 材料和方法
        4.1.1 供試?yán)ハx
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
        4.1.3 激素處理
        4.1.4 饑餓處理
        4.1.5 總RNA提取
        4.1.6 cDNA合成
        4.1.7 引物設(shè)計和合成
        4.1.8 實(shí)時定量PCR
        4.1.9 數(shù)據(jù)分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 外源激素對桔小實(shí)蠅胰島素信號通路基因表達(dá)的影響
        4.2.2 饑餓對桔小實(shí)蠅胰島素信號通路基因表達(dá)的影響
    4.3 討論
第五章 桔小實(shí)蠅IRS基因的功能分析
    5.1 材料和方法
        5.1.1 供試?yán)ハx
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
        5.1.3 dsRNA引物的設(shè)計
        5.1.4 dsRNA合成
        5.1.5 dsRNA檢測
        5.1.6 顯微注射
        5.1.7 RNA干擾水平檢測和表型觀察
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 dsRNA合成
        5.2.2 沉默效率
        5.2.3 表型變化
    5.3 討論
第六章 主要結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)及研究展望
    6.1 主要結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    6.3 展望
參考文獻(xiàn)
縮略詞表
發(fā)表論文與科研成果
致謝



本文編號：3363268