熱休克蛋白HSPs是一類應(yīng)激蛋白,是生物遇到不利的環(huán)境（如熱脅迫、藥物刺激等）自發(fā)產(chǎn)生的一種防御機(jī)制,能增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)外界刺激的耐受能力和恢復(fù)能力,充當(dāng)分子伴侶。其中熱休克蛋白HSP70在這一家族中最為保守（核酸與氨基酸序列均高度保守）。在生物體內(nèi)監(jiān)測(cè)熱休克蛋白HSP70的表達(dá)量的變化,可以作為一種生物指標(biāo)來(lái)對(duì)環(huán)境污染進(jìn)行評(píng)價(jià)。如今田間化學(xué)農(nóng)藥使用量很多,對(duì)害蟲(chóng)防治的同時(shí)應(yīng)該對(duì)天敵昆蟲(chóng)也有影響,因此HSP70成為天敵昆蟲(chóng)對(duì)田間應(yīng)激刺激的一種抵抗指標(biāo)。在天敵昆蟲(chóng)飼養(yǎng)或者大量釋放防治害蟲(chóng)方面,可以通過(guò)轉(zhuǎn)基因等技術(shù)使天敵昆蟲(chóng)熱休克蛋白的表達(dá)量升高,從而增強(qiáng)天敵昆蟲(chóng)對(duì)外界不利環(huán)境的防御能力,使其能夠抵御強(qiáng)烈的應(yīng)激條件,從而成功地防治害蟲(chóng)的同時(shí)保全天敵昆蟲(chóng),這也是從基因角度對(duì)天敵昆蟲(chóng)的保護(hù)。目前國(guó)內(nèi)外雖然已經(jīng)報(bào)道過(guò)一些天敵昆蟲(chóng)的熱休克蛋白基因序列,但對(duì)于豆科植物主要天敵昆蟲(chóng)葉色草蛉的HSP70的基因序列尚未見(jiàn)過(guò)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)克隆得到HSP70基因,并通過(guò)熱休克和常用大豆田農(nóng)藥處理測(cè)得HSP70表達(dá)量的變化分析HSP70對(duì)葉色草蛉應(yīng)激環(huán)境下的保護(hù)作用。葉色草蛉（Chrysopa phyllochro... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＨＳＰ７０的結(jié)構(gòu)示意圖??－

３．１葉色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０的基因保守區(qū)片段??以葉色草蛉總ＲＮＡ反轉(zhuǎn)錄成ｃＤＮＡ的第一鏈為模板，用基因特異性引物Ｈｓｐ７０－ｕｐ、ｕｐ２??和Ｈｓｐ７０－ｌｏｗ／Ｈｓｃ７０－ｕｐ、ｕｐ２和Ｈｓｃ７０－ｌｏｗ進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，特異性片段如圖３－１。經(jīng)回收純化、??連接、轉(zhuǎn)化、鑒定（酶切和ＰＣＲ方法）后測(cè)序，得到序列長(zhǎng)分別為１３９７ｂｐ和１１０８ｂｐ的葉色??草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因保守區(qū)。??Ｍ??ｆ?２０００ｂＤ—ＨＨ｜??２０００ｂＤ??ｔｏｏｏｂｏ?ｉ〇〇〇ｂ＾？ｉｒｉｉ〇８ｂＤ??Ｉ??注：Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ，?１：葉色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０分別為１３９７ｂｐ和１１０８ｂｐ保守區(qū)ＰＣＲ產(chǎn)物??圖３－１葉色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因保守區(qū)片段ＰＣＲ產(chǎn)物??Ｆｉｇ．３－１?Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０?ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ?ｒｅｇｉｏｎ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?Ｃｈｒｙｓｏｐａ?ｐｈｙｌｌｏｃｈｒｏｍａ??３．２葉色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因ｃＤＮＡ序列的３’ＲＡＣＥ??設(shè)計(jì)葉色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因的３’端序列的特異引物（見(jiàn)表２－１和２－２）?，?ＰＣＲ反應(yīng)??３０個(gè)循環(huán)，特異性片段如圖３－２。經(jīng)驗(yàn)證后送到上海生工公司測(cè)序�？寺〉玫饺~色草蛉??Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因３’端序列長(zhǎng)為５３７ｂｐ和８３１ｂｐ，?Ｂｌａｓｔ結(jié)果表明，此兩條序列分別為葉色草??蛉熱休克蛋白Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因ｃＤＮＡ片段３’端序列的一部分。??１６??

抑￣＾￡亦：７５〇ｂＤ￣￣ｆｃｍ＾３ｉｂＤ??注：Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ，１：葉色草蛉?Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０?５３７ｂｐ／８３１ｂｐ３，－ＲＡＣＥＰＣＲ?產(chǎn)物??圖３－２葉色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因３’－ＲＡＣＥ?ＰＣＲ產(chǎn)物??Ｆｉｇ．３－２?Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０?３＇－ＲＡＣＥ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?Ｃｈｒｙｓｏｐａ?ｐｈｙｌｌｏｃｈｒｏｍａ??３．３葉色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因ｃＤＮＡ序列的５’ＲＡＣＥ??設(shè)計(jì)葉色草蛉ＨｓＰ７０／ＨｓＣ７０基因的５Ｔ端序列的特異引物（見(jiàn)表２－１、２－２），特異性片段??如圖３－３。經(jīng)驗(yàn)證后送到上海生工公司測(cè)序�？寺〉玫饺~色草蛉Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因５，端序列??長(zhǎng)分別為６０３ｂｐ和４４８ｂｐ。??Ｍ??Ｍ????１??５００ｂｐ－｜ＪＪ＾Ｈ－６０３ｂｐ??■?５００ｂＤ—＾＾＾＾－４４８ｂｐ??２Ｓ０ｂｏ－ｌ??注：Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ，?ｈ?葉色草蛉?Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７〇?６０３ｂｐ／４４８ｂｐ５，－ＲＡＣＥＰＣＲ?產(chǎn)物??圖３－３葉色草蛉Ｈｓｐ７〇／Ｈｓｃ７０基因５，－ＲＡＣＥ?ＰＣＲ產(chǎn)物??Ｆｉｇ．３－３?Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０?５＇－ＲＡＣＥ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?Ｃｈｒｙｓｏｐａ?ｐｈｙｌｌｏｃｈｒｏｍａ??３．４?Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０基因ｃＤＮＡ全長(zhǎng)序列??以葉色草蛉ＨｓＰ７０／Ｈｓｃ７０ＲＴ－ＰＣＲ三個(gè)片段作為底物

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]外源物質(zhì)誘導(dǎo)家蠶小分子熱激蛋白基因HSP19.9的組織表達(dá)活性分析[J]. 王瑞嫻,高瑞娜,張婷,趙國(guó)棟,李兵,衛(wèi)正國(guó),沈衛(wèi)德.  蠶業(yè)科學(xué). 2010(05)
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碩士論文
[1]大豆蚜熱休克蛋白70基因的克隆、原核表達(dá)與定量分析[D]. 張拓.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]豆卜饃夜蛾熱休克蛋白Hsp70與Hsc70基因的克隆及原核表達(dá)[D]. 龐春杰.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]凡納濱對(duì)蝦一種HSC70的cDNA克隆，原核表達(dá)及其體內(nèi)表達(dá)分析[D]. 吳任.暨南大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3288629