蝗蟲微孢子蟲（Nosema locusta）屬單細胞原生動物，是直翅目昆蟲中蝗蟲的專性寄生物�；认x微孢子蟲在蝗蟲防治實踐中可誘發(fā)蟲病流行起到持續(xù)性壓低種群密度的效果,作為一種昆蟲病原微生物具不污染環(huán)境、對人畜無毒等優(yōu)點，從而使得對蝗蟲微孢子蟲的致病機理研究及防治應(yīng)用成為研究的重點。微孢子蟲（microsporidia）的孢壁是與宿主最先直接接觸的部分，其中的孢壁蛋白（spore wall protein）在感染宿主的過程中扮演著重要的角色，因此孢壁蛋白成為微孢子蟲研究的熱點。目前報道的微孢子蟲孢壁蛋白有13種，但其作用機制及具體的功能尚不清楚。本研究在已鑒定出的5種蝗蟲微孢子蟲假定孢壁蛋白的基礎(chǔ)上，選取其中1種假定孢壁蛋白（ALSWP2）進行了研究，包括序列特征及轉(zhuǎn)錄分析、基因克隆及原核表達、該蛋白的功能以及侵染和增殖過程中的作用進行了初步的探討，為蝗蟲的生物防治提供作用靶標和理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：1. ALSWP2的序列分析及轉(zhuǎn)錄分析運用生物學(xué)軟件和在線預(yù)測方法進行初步分析，發(fā)現(xiàn)它的大小約23KD，N-糖基化位點有兩個，O-糖基化位點有一個，并且在N端有XBBXBX基本類型的肝... 

【文章來源】：黑龍江大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 概述
    1.2 蝗蟲微孢子蟲的研究進展
        1.2.1 蝗蟲微孢子蟲的生活史及形態(tài)特征
        1.2.2 蝗蟲微孢子蟲分類地位
        1.2.3 蝗蟲微孢子蟲的侵染機制
        1.2.4 蝗蟲微孢子蟲目前研究進展
    1.3 孢壁蛋白的研究進展
    1.4 研究的目的意義
    1.5 主要研究內(nèi)容
    1.6 實驗技術(shù)路線
第2章 ALSWP2 的序列及轉(zhuǎn)錄分析
    2.1 實驗材料、試劑及儀器設(shè)備
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑與儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 序列分析
        2.2.2 蝗蟲微孢子蟲及被感染蝗蟲中腸組織及脂肪體組織的提取
        2.2.3 感染蝗蟲微孢子蟲蝗蟲中腸及脂肪體 RNA 的提取
        2.2.4 RNA 中基因組 DNA 的去除
        2.2.5 第 1 鏈 cDNA 的制備
        2.2.6 蝗蟲微孢子蟲 ALSWP2 的 RT-PCR 檢測
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 蝗蟲微孢子蟲 ALSWP2 的鑒定
        2.3.2 蝗蟲微孢子蟲 ALSWP2 序列分析
        2.3.3 蝗蟲微孢子蟲 ALSWP2 轉(zhuǎn)錄分析
    2.4 結(jié)果與討論
第3章 ALSWP2 基因克隆、原核表達及純化
    3.1 實驗材料、試劑及儀器設(shè)備
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 儀器設(shè)備
        3.1.3 試劑及配方
    3.2 實驗方法
        3.2.1 蝗蟲微孢子蟲總 RNA 的提取
        3.2.2 RNA 中基因組 DNA 的去除
        3.2.3 第 1 鏈 cDNA 的制備
        3.2.4 ALSWP2 基因片段的擴增
        3.2.5 ALSWP2 基因的克隆
        3.2.6 重組 ALSWP2 在大腸桿菌中的原核表達
        3.2.7 重組 ALSWP2 的純化
        3.2.8 重組 ALSWP2 的免疫印跡檢測
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 蝗蟲微孢子蟲基因組 RNA 的提取
        3.3.2 ALSWP2 基因的克隆和載體連接
        3.3.3 孢壁蛋白 ALSWP2 原核表達及表達產(chǎn)物的純化
        3.3.4 western blot 檢測
    3.4 結(jié)果與討論
第4章 孢壁蛋白 ALSWP2 功能的初步探討
    4.1 實驗材料、試劑及儀器設(shè)備
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 主要試劑與儀器設(shè)備
    4.2 實驗方法
        4.2.1 RNAi 注射
        4.2.2 RNAi 試驗中蝗蟲微孢子蟲 ALSWP2 基因的 RT-PCR 擴增
        4.2.3 室內(nèi)生物測定
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 雙鏈 RNA 的制備和純化
        4.3.2 RNAi 后沉默效率的檢測
        4.3.3 RNAi 后 RT-PCR 結(jié)果
        4.3.4 RNAi 后蝗蟲死亡率檢測
    4.4 結(jié)果與討論
第5章 結(jié)論
論文的創(chuàng)新點
參考文獻
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]微孢子蟲蛋白質(zhì)及其與宿主互作的研究進展[J]. 吳正理,李艷紅,宋元達.  蠶業(yè)科學(xué). 2009(04)
[2]蝗蟲微孢子蟲與綠僵菌協(xié)調(diào)使用對東亞飛蝗的毒力測定[J]. 丁曉宇,張龍.  北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報. 2009(01)
[3]家蠶病原性微孢子蟲的超微結(jié)構(gòu)研究[J]. 高永珍,黃可威.  蠶業(yè)科學(xué). 1999(03)
[4]家蠶病原性微孢子蟲孢子表面蛋白的選擇性分離與總蛋白比較分析[J]. 郭錫杰,黃可威.  蠶業(yè)科學(xué). 1995(04)
[5]蝗蟲微孢子蟲對東亞飛蝗的實驗感染[J]. 王麗英,嚴毓驊,管致和.  昆蟲學(xué)報. 1990(01)
[6]微孢子蟲在害蟲防治中的應(yīng)用和研究[J]. 王麗英,嚴毓驊.  生物防治通報. 1988(01)

博士論文
[1]家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis）孢壁蛋白SWP26的研究[D]. 李艷紅.西南大學(xué) 2008

碩士論文
[1]蝗蟲微孢子蟲孢壁蛋白的鑒定及功能分析[D]. 冷赫.黑龍江大學(xué) 2012



本文編號：3266649