通過敲除球孢白僵菌（Beauveria bassiana）菌株bm01的PacC基因,研究了PacC基因敲除對(duì)球孢白僵菌毒力和分生孢子萌發(fā)速率的影響。利用農(nóng)桿菌（Agrobacterium tumefaciens）介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化Bb_bm01,通過同源重組敲除Bb_bm01的PacC基因,篩選ΔPacC基因敲除菌株,獲得了遺傳穩(wěn)定的ΔPacC基因敲除菌株。通過毒力測(cè)定,對(duì)比了野生菌株和ΔPacC基因敲除菌株對(duì)家蠶和大蠟螟毒力的差異,發(fā)現(xiàn)ΔPacC基因敲除菌株對(duì)家蠶和大蠟螟毒力都減弱,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）,表明在Bb_bm01菌株中的PacC基因與它的致病性相關(guān);另外,比較ΔPacC基因敲除菌株與野生型菌株Bb_bm01在SDB液體培養(yǎng)基中的孢子萌發(fā)率,發(fā)現(xiàn)ΔPacC基因敲除菌株孢子萌發(fā)明顯減慢,表明PacC基因參與調(diào)控孢子萌發(fā)。 

【文章來(lái)源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2016,35(08)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

敲除菌株在轉(zhuǎn)錄水平的篩選與鑒定Figure 5 PCR analysis in transcriptional level

隨著絲狀真菌基因組序列的測(cè)定,以及高效分子生物學(xué)手段的發(fā)展,如RNA干擾(Fire et al.,1998;韋淑亞等,2013)、基因敲除技術(shù)(Limal et al.,2006)及酵母雜交系統(tǒng)(Duyvesteijn et al.,2005)等,為絲狀真菌的基因功能鑒定提供更有效的契機(jī)。其中,根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因敲除技術(shù)能夠有效和特異性地抑制目標(biāo)基因的表達(dá),且操作易于掌握,是構(gòu)建真菌基因突變體的首選技術(shù),也廣泛應(yīng)用于絲狀真菌的基因功能鑒定(Munch et al.,2011;Nakamura et al.,2012;Nai et al.,2015)。本研究采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因敲除技術(shù)構(gòu)建球孢白僵菌Bb_bm01菌株的Pac C基因敲除突變體,經(jīng)基因組水平和轉(zhuǎn)錄水平驗(yàn)證,成功獲得基因敲除菌株ΔPac C。圖7 ΔPac C敲除菌株及Bb2347的孢子萌發(fā)Figure 7 Conidial germination of mutantΔPac C or Bb2347

圖1 Pac C基因上下游序列的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Figure 1 PCR amplification product of upstream and downstream sequence of the Pac C gene圖3 Pac C基因敲除原理示意圖Figure 3 Schematic representation of the Pac C wild type(WT)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]球孢白僵菌生物學(xué)特性與其對(duì)不同昆蟲侵染差異相關(guān)性分析[J]. 曹偉平,宋健,甄偉,王金耀,馮書亮,杜立新.  中國(guó)生物防治學(xué)報(bào). 2013(04)
[2]水稻鈣依賴型蛋白激酶OsCPK9基因RNAi表達(dá)載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化[J]. 韋淑亞,張瑩瑩,趙旭東,劉小東,羅青晨,衛(wèi)秋慧,陳鵬,何光源,楊廣笑.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2013(05)



本文編號(hào)：3239442