通過敲除球孢白僵菌（Beauveria bassiana）菌株bm01的PacC基因,研究了PacC基因敲除對球孢白僵菌毒力和分生孢子萌發(fā)速率的影響。利用農(nóng)桿菌（Agrobacterium tumefaciens）介導的轉化方法轉化Bb_bm01,通過同源重組敲除Bb_bm01的PacC基因,篩選ΔPacC基因敲除菌株,獲得了遺傳穩(wěn)定的ΔPacC基因敲除菌株。通過毒力測定,對比了野生菌株和ΔPacC基因敲除菌株對家蠶和大蠟螟毒力的差異,發(fā)現(xiàn)ΔPacC基因敲除菌株對家蠶和大蠟螟毒力都減弱,差異具有統(tǒng)計學意義（p<0.01）,表明在Bb_bm01菌株中的PacC基因與它的致病性相關;另外,比較ΔPacC基因敲除菌株與野生型菌株Bb_bm01在SDB液體培養(yǎng)基中的孢子萌發(fā)率,發(fā)現(xiàn)ΔPacC基因敲除菌株孢子萌發(fā)明顯減慢,表明PacC基因參與調控孢子萌發(fā)。 

【文章來源】：基因組學與應用生物學. 2016,35(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

敲除菌株在轉錄水平的篩選與鑒定Figure 5 PCR analysis in transcriptional level

隨著絲狀真菌基因組序列的測定,以及高效分子生物學手段的發(fā)展,如RNA干擾(Fire et al.,1998;韋淑亞等,2013)、基因敲除技術(Limal et al.,2006)及酵母雜交系統(tǒng)(Duyvesteijn et al.,2005)等,為絲狀真菌的基因功能鑒定提供更有效的契機。其中,根癌農(nóng)桿菌介導的基因敲除技術能夠有效和特異性地抑制目標基因的表達,且操作易于掌握,是構建真菌基因突變體的首選技術,也廣泛應用于絲狀真菌的基因功能鑒定(Munch et al.,2011;Nakamura et al.,2012;Nai et al.,2015)。本研究采用根癌農(nóng)桿菌介導的基因敲除技術構建球孢白僵菌Bb_bm01菌株的Pac C基因敲除突變體,經(jīng)基因組水平和轉錄水平驗證,成功獲得基因敲除菌株ΔPac C。圖7 ΔPac C敲除菌株及Bb2347的孢子萌發(fā)Figure 7 Conidial germination of mutantΔPac C or Bb2347

圖1 Pac C基因上下游序列的PCR擴增產(chǎn)物Figure 1 PCR amplification product of upstream and downstream sequence of the Pac C gene圖3 Pac C基因敲除原理示意圖Figure 3 Schematic representation of the Pac C wild type(WT)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]球孢白僵菌生物學特性與其對不同昆蟲侵染差異相關性分析[J]. 曹偉平,宋健,甄偉,王金耀,馮書亮,杜立新.  中國生物防治學報. 2013(04)
[2]水稻鈣依賴型蛋白激酶OsCPK9基因RNAi表達載體的構建及遺傳轉化[J]. 韋淑亞,張瑩瑩,趙旭東,劉小東,羅青晨,衛(wèi)秋慧,陳鵬,何光源,楊廣笑.  基因組學與應用生物學. 2013(05)



本文編號：3239442