畜禽養(yǎng)殖業(yè)中抗生素濫用問題的日益突出導(dǎo)致動物腸道內(nèi)產(chǎn)生了大量的抗生素耐藥菌,這些抗生素耐藥菌成為了環(huán)境中抗生素耐藥基因的最重要來源。耐藥菌一旦隨動物糞便排放到環(huán)境中,將會造成耐藥基因迅速傳播。中國養(yǎng)豬業(yè)常通過使用四環(huán)素類抗生素實現(xiàn)治療疾病和促進(jìn)生長,從而導(dǎo)致四環(huán)素類耐藥基因在環(huán)境中頻繁檢出,對人類健康以及環(huán)境造成了巨大威脅。本研究通過對江蘇省太湖流域常州市武進(jìn)區(qū)一小型養(yǎng)豬場廢水和受其污染的下游河流水體進(jìn)行采樣,檢測樣品的水質(zhì)指標(biāo),并通過定性PCR、實時定量PCR （qPCR）及16S rRNA基因高可變區(qū)擴增測序等技術(shù)方法,分析畜禽糞便污染類型對四環(huán)素耐藥基因的影響,檢測四環(huán)素耐藥基因的種類及豐度,以及探究畜禽養(yǎng)殖廢水對河流水體菌群結(jié)構(gòu)的影響,本文的主要研究結(jié)果如下：（1）未經(jīng)處理排放的養(yǎng)豬場廢水導(dǎo)致下游河流水體各項指標(biāo)均劣于國家地表水環(huán)境V類水標(biāo)準(zhǔn),宿主特異性微生物標(biāo)記基因檢測證明豬糞是水體中唯一的糞便污染來源。qPCR定量檢測結(jié)果證明糞便污染程度沿著河流流向逐漸減輕,但最遠(yuǎn)處太滆運河點仍能檢測到10-4-10-2（拷貝數(shù)/16S rRNA基因拷貝數(shù)）水平的豬糞標(biāo)記基因。（2）微生物... 

【文章來源】：南京大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 畜禽養(yǎng)殖污染現(xiàn)狀
        1.1.1 我國畜禽養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀
        1.1.2 我國畜禽養(yǎng)殖業(yè)面源污染
        1.1.3 我國畜禽養(yǎng)殖業(yè)污染物處理現(xiàn)狀
    1.2 耐藥基因的研究進(jìn)展
        1.2.1 水環(huán)境中耐藥基因的研究進(jìn)展
        1.2.2 畜禽養(yǎng)殖廢水中四環(huán)素類耐藥基因的研究進(jìn)展
        1.2.3 抗生素耐藥基因的檢測方法
    1.3 微生物溯源方法的研究進(jìn)展
        1.3.1 微生物溯源方法學(xué)
        1.3.2 微生物溯源方法的應(yīng)用研究
    1.4 研究意義與目的
        1.4.1 研究意義
        1.4.2 研究目的
    1.5 技術(shù)路線
    參考文獻(xiàn)
第2章 基于微生物溯源的畜禽糞便污染物在受納河流中降解規(guī)律研究
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗樣品、試劑與儀器
        2.2.2 樣品DNA提取
        2.2.3 PCR
        2.2.4 凝膠電泳
        2.2.5 PCR產(chǎn)物純化
        2.2.6 克隆
        2.2.7 質(zhì)粒DNA的提取與純化
        2.2.8 實時定量PCR
        2.2.9 常規(guī)水質(zhì)指標(biāo)的檢測
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 DNA提取結(jié)果分析
        2.3.2 定性PCR檢測宿主特異性微生物標(biāo)記基因
        2.3.3 宿主特異性微生物標(biāo)記基因重組質(zhì)粒構(gòu)建及標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.3.4 宿主特異性微生物標(biāo)記基因的定量分析
        2.3.5 樣品水質(zhì)指標(biāo)的檢測
    2.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第3章 畜禽養(yǎng)殖廢水及下游河水中微生物群落結(jié)構(gòu)研究
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 DNA樣品準(zhǔn)備
        3.2.2 PCR試驗
        3.2.3 PCR凝膠電泳
        3.2.4 454焦磷酸測序
        3.2.5 454焦磷酸測序數(shù)據(jù)的前處理
        3.2.6 生物信息學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 微生物多樣性分析
        3.3.2 微生物群落結(jié)構(gòu)分析
        3.3.3 微生物群落結(jié)構(gòu)相似性分析
    3.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第4章 禽畜養(yǎng)殖廢水及下游河水中四環(huán)素類耐藥基因豐度與多樣性分析
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 樣品DNA提取
        4.2.2 四環(huán)素類耐藥基因PCR分析
        4.2.3 凝膠電泳
        4.2.4 PCR產(chǎn)物純化
        4.2.5 TA克隆
        4.2.6 質(zhì)粒DNA的提取與純化
        4.2.7 實時定量PCR
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 廢水和河水樣品中四環(huán)素耐藥基因的多樣性分析
        4.3.2 四環(huán)素耐藥基因的定量分析
        4.3.3 四環(huán)素類耐藥基因的豐度與宿主特異性微生物標(biāo)記基因相關(guān)性分析
    4.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 研究展望
創(chuàng)新點
項目支持
成果清單
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3232571