灰霉菌是一種具有廣泛非特異性寄主的死體營養(yǎng)型真菌,可侵染1000多種植物,對農(nóng)作物生產(chǎn)和采后貯藏造成重大損失,被認(rèn)為是十大病原真菌之一�；颐咕秃吮P菌在系統(tǒng)發(fā)育上具有高度的同源性,是研究腐生真菌的模式物種�；颐咕梢酝ㄟ^分泌大量的胞外蛋白,在侵染植物的過程中發(fā)揮重要作用。但是到目前為止,仍有許多分泌蛋白的功能和作用機制是未知的。因此對灰霉菌分泌蛋白開展相關(guān)研究,對進一步揭示灰霉菌致病機制和與寄主植物的互作關(guān)系具有重要意義。本課題組在之前的研究中發(fā)現(xiàn)核盤菌中編碼1個假定分泌蛋白的SS1G₀8163基因在抑制植物防御反應(yīng)和促進核盤菌侵染植物方面具有一定的作用。因此我們猜想灰霉菌中與核盤菌SS1G₀8163同源的基因是否也參與到植物-灰霉菌的互作過程。通過氨基酸序列比對,我們鑒定出了2個同源基因:BCIN₀4g00360和BCIN₀9g07100,它們與SS1G₀8163分別具有50.00%和60.87%的同源性。利用同源重組技術(shù),我們分別對BCIN₀4g003... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 灰霉菌及其危害
        1.1.1 灰霉菌生物學(xué)特性
        1.1.2 灰霉病癥狀和流行規(guī)律
    1.2 灰霉菌分泌蛋白研究進展
        1.2.1 細(xì)胞壁降解酶
        1.2.2 參與宿主蛋白質(zhì)降解的蛋白酶
        1.2.3 氧爆發(fā)相關(guān)蛋白
        1.2.4 可誘導(dǎo)植物過敏性反應(yīng)的蛋白
        1.2.5 與毒素產(chǎn)生和分泌相關(guān)的蛋白
    1.3 植物抗灰霉病機制
        1.3.1 PAMP/DAMP信號識別和傳導(dǎo)
        1.3.2 植物激素調(diào)控
        1.3.3 其它相關(guān)防御反應(yīng)
    1.4 本研究的內(nèi)容和目的
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和載體
        2.1.3 藥品和試劑
        2.1.4 化學(xué)溶液
        2.1.5 培養(yǎng)基
    2.2 實驗方法
        2.2.1 供試植物的種植和管理
        2.2.2 粗提真菌基因組DNA
        2.2.3 PCR反應(yīng)體系和條件
        2.2.4 瓊脂糖凝膠DNA回收
        2.2.5 制備灰霉菌原生質(zhì)體
        2.2.6 灰霉菌原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化
        2.2.7 菌落生長速率測定
        2.2.8 灰霉菌致病性分析
        2.2.9 RNA提取
        2.2.10 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.2.11 載體構(gòu)建
        2.2.12 制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
        2.2.13 大腸桿菌轉(zhuǎn)化
        2.2.14 細(xì)菌質(zhì)粒提取
        2.2.15 制備農(nóng)桿菌GV3101 感受態(tài)細(xì)胞
        2.2.16 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        2.2.17 煙草瞬時表達(dá)
3 結(jié)果與分析
    3.1 灰霉菌中與核盤菌SS1G_08163 同源基因的鑒定
    3.2 目的基因敲除突變體的獲得
    3.3 ΔBCIN_04g00360和ΔBCIN_09g07100 菌落生長測定
    3.4 ΔBCIN_04g00360和ΔBCIN_09g07100 致病性分析
    3.5 煙草瞬時表達(dá)載體的構(gòu)建和農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
    3.6 BCIN_04g00360和BCIN_09g07100 在煙草葉片中的亞細(xì)胞定位
    3.7 BCIN_04g00360和BCIN_09g07100 誘導(dǎo)植物細(xì)胞死亡調(diào)控分析
    3.8 BCIN_04g00360和BCIN_09g07100 干擾由INF1 介導(dǎo)的植物防衛(wèi)反應(yīng)分析
4 結(jié)論與討論
參考文獻
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3204665