植物病原體和真菌的細(xì)胞壁中一般都含有大量的幾丁質(zhì),鏈霉菌（Streptomyces）是一種幾丁質(zhì)酶高產(chǎn)菌株,除了可以產(chǎn)生大量的幾丁質(zhì)酶外,其產(chǎn)生抗生素的能力在植物病害生物防治的生產(chǎn)實(shí)踐中具有巨大的應(yīng)用潛力。本研究對(duì)一株鏈霉菌EBI-001進(jìn)行產(chǎn)幾丁質(zhì)酶條件進(jìn)行優(yōu)化,在基因水平對(duì)該菌高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶進(jìn)行生物信息學(xué)分析,旨在為幾丁質(zhì)酶基因在分子生物學(xué)水平上的改造、表達(dá)載體構(gòu)建以及工程菌的開(kāi)發(fā)提供更多的科學(xué)依據(jù)與理論基礎(chǔ)。對(duì)前期篩選得到的一株具有高抑菌活性和高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶能力的生防菌株EBI-001進(jìn)行了菌株EBI-001的形態(tài)學(xué)觀察、培養(yǎng)特征學(xué)觀察以及等多種生理生化試驗(yàn)。結(jié)果表明,結(jié)合16S r DNA結(jié)果構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)及ANI分析顯示,菌株EBI-001屬于Streptomyces albidoflavus的一個(gè)亞種。為了進(jìn)一步驗(yàn)證菌株EBI-001的生物學(xué)功能,對(duì)菌株EBI-001進(jìn)行基于Illumina Mi Seq測(cè)序平臺(tái)的二代測(cè)序,結(jié)合功能蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)注釋結(jié)果可知,該菌較強(qiáng)的代謝能力使其在工程開(kāi)發(fā)方面具有較廣的應(yīng)用前景。EBI-001基因組序列經(jīng)anti SMASH分析共得到24個(gè)次級(jí)代... 

【文章來(lái)源】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：100 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 課題研究的目的和意義
    1.2 幾丁質(zhì)酶的研究進(jìn)展
        1.2.1 幾丁質(zhì)酶的分類
        1.2.2 幾丁質(zhì)酶的性質(zhì)
        1.2.3 幾丁質(zhì)酶基因的克隆
        1.2.4 幾丁質(zhì)酶基因的功能結(jié)構(gòu)
        1.2.5 幾丁質(zhì)酶的應(yīng)用
    1.3 微生物產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的研究
        1.3.1 產(chǎn)幾丁質(zhì)酶微生物的種類及分布
        1.3.2 鏈霉菌產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的研究
        1.3.3 微生物產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的發(fā)酵工藝研究進(jìn)展
    1.4 鏈霉菌的其他生物學(xué)價(jià)值
        1.4.1 抑菌活性物質(zhì)
        1.4.2 抗腫瘤細(xì)胞毒活性物質(zhì)
        1.4.3 酶活性物質(zhì)
    1.5 本文的主要研究?jī)?nèi)容及技術(shù)路線
        1.5.1 主要研究?jī)?nèi)容
        1.5.2 技術(shù)路線圖
第2章 材料與方法
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 菌種的來(lái)源
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 菌種EBI-001的活化與傳代
        2.2.2 菌株EBI-001功能活性檢測(cè)
        2.2.3 菌株EBI-001形態(tài)學(xué)觀察及培養(yǎng)特征
        2.2.4 菌株EBI-001生理生化試驗(yàn)
        2.2.5 菌株EBI-001基因組測(cè)序
        2.2.6 菌株EBI-001產(chǎn)幾丁質(zhì)酶培養(yǎng)基配方優(yōu)化
        2.2.7 菌株EBI-001產(chǎn)幾丁質(zhì)酶發(fā)酵工藝優(yōu)化
        2.2.8 菌株EBI-001幾丁質(zhì)酶酶活性質(zhì)初探
        2.2.9 菌株EBI-001幾丁質(zhì)酶家族基因生物信息學(xué)分析
        2.2.10 數(shù)據(jù)分析
第3章 菌株EBI-001菌種鑒定及基因組測(cè)序分析
    3.1 菌株EBI-001菌株鑒定
        3.1.1 菌株EBI-001的形態(tài)學(xué)特征觀察
        3.1.2 菌株EBI-001的培養(yǎng)特征觀察
        3.1.3 菌株EBI-001的生理生化特征測(cè)定結(jié)果
        3.1.4 菌株EBI-001 16S r DNA序列分析結(jié)果
    3.2 菌株EBI-001基因組二代測(cè)序分析
        3.2.1 菌株EBI-001基因組框架分析
        3.2.2 菌株EBI-001蛋白編碼基因功能注釋
        3.2.3 菌株EBI-001次級(jí)代謝產(chǎn)物合成基因簇分析
    3.3 菌株EBI-001抑菌活性研究
    3.4 菌株EBI-001產(chǎn)幾丁質(zhì)酶活性研究
    3.5 本章小結(jié)
第4章 菌株EBI-001產(chǎn)幾丁質(zhì)酶發(fā)酵優(yōu)化
    4.1 菌株產(chǎn)酶培養(yǎng)基優(yōu)化
        4.1.1 單因素實(shí)驗(yàn)
        4.1.2 Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1.3 最陡爬坡試驗(yàn)選擇最大響應(yīng)區(qū)域
        4.1.4 響應(yīng)面分析及最佳發(fā)酵培養(yǎng)基確定
    4.2 菌株EBI-001產(chǎn)酶條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)
        4.2.1 單因素實(shí)驗(yàn)
        4.2.2 響應(yīng)面分析及最佳培養(yǎng)條件確定
    4.3 幾丁質(zhì)酶的酶學(xué)性質(zhì)研究
        4.3.1 幾丁質(zhì)酶最適pH的研究
        4.3.2 幾丁質(zhì)酶最適溫度的研究
        4.3.3 金屬離子對(duì)幾丁質(zhì)酶活性的影響
        4.3.4 不同蛋白酶抑制劑對(duì)幾丁質(zhì)酶活性的影響
    4.4 本章小結(jié)
第5章 菌株EBI-001幾丁質(zhì)酶家族生物信息學(xué)分析及幾丁質(zhì)代謝通路分析
    5.1 菌株EBI-001幾丁質(zhì)酶家族預(yù)測(cè)
        5.1.1 菌株EBI-001幾丁質(zhì)酶基因家族的鑒定與分類
        5.1.2 幾丁質(zhì)酶家族理化性質(zhì)分析
        5.1.3 幾丁質(zhì)酶家族跨膜區(qū)域分析
        5.1.4 幾丁質(zhì)酶家族信號(hào)肽預(yù)測(cè)與分析
        5.1.5 幾丁質(zhì)酶家族保守結(jié)構(gòu)域分析
        5.1.6 幾丁質(zhì)酶基因家族二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析
        5.1.7 幾丁質(zhì)酶基因家族磷酸化位點(diǎn)分析
        5.1.8 幾丁質(zhì)酶基因家族三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
    5.2 菌株EBI-001體內(nèi)幾丁質(zhì)代謝流程通路預(yù)測(cè)
        5.2.1 菌株EBI-001編碼參與幾丁質(zhì)代謝的酶基因預(yù)測(cè)
        5.2.2 菌株EBI-001體內(nèi)幾丁質(zhì)代謝流程通路預(yù)測(cè)
    5.3 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文及其他成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3186045