本論文所研究的task1基因?yàn)镸APKs家族的成員，在真核細(xì)胞信號傳遞網(wǎng)中功能顯著，在前期的研究中發(fā)現(xiàn)task1對生物防治真菌的生防功能具有一定的調(diào)控作用，因此對task1深入研究有利于生物防治真菌在分子方面的內(nèi)在調(diào)節(jié)機(jī)制的剖析意義重大。棘孢木霉本身的生物防治能力突出，并含有task1，因此研究野生型棘孢木霉的task1基因表達(dá)狀況，對于棘孢木霉調(diào)節(jié)生防能力意義重大。獲得的純化的目的基因task1，成功的整合入表達(dá)載體中，構(gòu)建重組的表達(dá)載體，通過電轉(zhuǎn)化和真菌共培養(yǎng)等方法，在篩選平板上獲得諸多的陽性的轉(zhuǎn)化子。對于得到的轉(zhuǎn)化子進(jìn)行分子生物學(xué)分析，在分子鑒定后，選取其中最優(yōu)良的菌株，進(jìn)行形態(tài)學(xué)、酶學(xué)及生防特性的測定。在對于形態(tài)學(xué)的比較中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)目的基因task1在原始菌株中表達(dá)上調(diào)后，轉(zhuǎn)化子的菌絲狀態(tài)、生長和產(chǎn)孢狀況優(yōu)越于原始的野生菌株，并且菌絲纏繞密集，產(chǎn)孢數(shù)優(yōu)于原始菌株，為其2.25倍。在對兩種菌的酶活性測定中，得出轉(zhuǎn)化子的C1、濾紙酶活、CX、β-葡萄糖苷酶等酶活性影響較大，并均有很大的提升。因此，進(jìn)行了轉(zhuǎn)化子的纖維素酶的實(shí)時定量PCR，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化子的纖維素的基因的表達(dá)量也有很大的提高，... 

【文章來源】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 課題背景及研究的目的和意義
    1.2 木霉菌的生防與分子機(jī)制研究進(jìn)展
        1.2.1 木霉菌的生防機(jī)制
        1.2.2 木霉菌的生防分子機(jī)制
    1.3 絲裂原蛋白激酶與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.3.1 MAPK 蛋白激酶在真菌中的作用
        1.3.2 絲裂原蛋白激酶信號傳遞途徑
    1.4 國外對于棘孢木霉的研究
    1.5 國內(nèi)的研究現(xiàn)狀
    1.6 國內(nèi)外文獻(xiàn)綜述的簡析
    1.7 絲狀真菌轉(zhuǎn)化方法研究進(jìn)展
        1.7.1 PEG 法
        1.7.2 醋酸鋰法
        1.7.3 基因槍法
        1.7.4 REMI 法
        1.7.5 ATMT 法
    1.8 實(shí)際應(yīng)用潛在的問題
    1.9 課題的技術(shù)路線圖與主要研究內(nèi)容
        1.9.1 技術(shù)路線圖
        1.9.2 主要研究內(nèi)容
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌種及菌種樣品的來源
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 本課題所用的引物
        2.1.5 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 棘孢木霉 T4 菌株 task1 基因的獲得
        2.2.2 構(gòu)建重組質(zhì)粒 pCAMBIA1301-task1
        2.2.3 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化野生型棘孢木霉
        2.2.4 轉(zhuǎn)化子與病原菌的對峙實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 轉(zhuǎn)化子生長速率和產(chǎn)孢能力測定
        2.2.6 野生型和轉(zhuǎn)化子菌絲形態(tài)觀察
        2.2.7 轉(zhuǎn)化子酶活的測定
第3章 Task1 重組體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化子的鑒定
    3.1 引言
    3.2 棘孢木霉 T4 株 task1 基因的 PCR 及純化
    3.3 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    3.4 重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化 AGL-1
    3.5 野生型棘孢木霉 T4 對潮霉素敏感性實(shí)驗(yàn)
    3.6 棘孢木霉 T4 轉(zhuǎn)化子的 PCR 鑒定
    3.7 轉(zhuǎn)化子穩(wěn)定性的鑒定
    3.8 轉(zhuǎn)化子實(shí)時定量 PCR 鑒定
    3.9 本章小結(jié)
第4章 轉(zhuǎn)化子生防特性研究
    4.1 引言
    4.2 轉(zhuǎn)化子形態(tài)學(xué)檢測
    4.3 野生棘孢木霉與 Z4 菌絲形態(tài)觀察
    4.4 病原菌對峙實(shí)驗(yàn)
        4.4.1 棘孢木霉對峙立枯絲核菌
        4.4.2 棘孢木霉對峙鐮刀菌菌
    4.5 酶活測定
        4.5.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        4.5.2 Cx酶活性的測定
        4.5.3 C1酶活性的測定
        4.5.4 濾紙酶活性的測定
        4.5.5 β-葡萄糖苷酶活性測定
    4.6 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3164142