產(chǎn)堿性磷酸酶乳桿菌的篩
發(fā)布時(shí)間：2021-02-02 00:24
我國(guó)是一個(gè)農(nóng)業(yè)大國(guó),農(nóng)作物產(chǎn)量的提高以及農(nóng)作物病蟲(chóng)害防治均離不開(kāi)農(nóng)藥,但農(nóng)藥的不合理施用在一定程度上引起了許多環(huán)境及健康問(wèn)題。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)堿性磷酸酶在有機(jī)磷農(nóng)藥降解方面發(fā)揮著重要作用。堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase,EC 3.1.3.1,簡(jiǎn)稱ALP）是一類非特異性磷酸單酯酶,在堿性條件下具有最佳活性,廣泛存在于生命體中,參與體內(nèi)多種生化反應(yīng)和過(guò)程。本試驗(yàn)從78株乳酸菌中篩選出一株高產(chǎn)ALP的乳桿菌,在確定其種屬后,優(yōu)化了目的菌株中ALP的提取條件并純化ALP,探究其酶學(xué)特性及其降解有機(jī)磷農(nóng)藥的作用。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.利用傳統(tǒng)培養(yǎng)方法從78株乳酸菌中,篩選出一株高產(chǎn)ALP的乳桿菌,將其命名為菌株Z23,酶活力為2.35±0.12U/mL。經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定,菌株Z23為鼠李糖乳桿菌,16Sr RNA基因序列長(zhǎng)度為1473 bp,基因登錄號(hào)為MN582955。2.通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),優(yōu)化了 ALP的提取條件,最佳提取條件為:細(xì)胞破碎時(shí)間15 min,破碎功率450W,料液比（g/mL）1:6,提取液pH值10.0,該條件下酶活力為4.95±0.26 ...
【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)
【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖３樣品采集地點(diǎn)??Ｆｉｇ．３?Ｓａｍｐｌｅ?ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ?ｌｏｃａｔｉｏｎ??
?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文?２３??３廠??２?５?□胞內(nèi)酶活?ｆ??ｅ?０胞外酶活?＠??２?■?ａ?ｄ?：??■■?■秘?１?－?？??一?Ｃ?ｒ＾ｉ??，１．５?－?ｍ??ｐ?：?ｂ??Ｓ?１?■??鍇?：．：??０．５?－?Ｄ?ｔ，?〇Ｅ?ｃ?ｅ??．．＿?．ｎｉｌ?．?＿?Ａ?ｐ－，?Ｆ＂??ｑ?＿?，?�。唬�？．｜：?，?？?．?ｒｎ?，?ＩＪ?．?＿ｉ??Ｂ４?Ｈ２?Ｑ７?Ｒ５?Ｔ２２?Ｚ２３??菌株編號(hào)??圖４產(chǎn)酶菌株的復(fù)篩??Ｆｉｇ．４?Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ?ｏｆ?ｅｎｚｙｍｅ?ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ?ｓｔｒａｉｎｓ??注：不同字母間表示差異顯著（Ｐ＜〇．〇５）。??由圖４可知，復(fù)篩得到的６株乳酸菌在胞內(nèi)和胞外均可檢測(cè)出酶活，且胞內(nèi)酶活??均大于胞外酶活，其中菌株Ｚ２３的胞內(nèi)酶活最高，為２．３５±０．１２Ｕ／ｍＬ。王政等［９Ｑ］對(duì)接??種５種乳酸菌的脫脂乳中磷酸酶活性大小測(cè)定表明，活性最高的為鼠李糖乳桿菌，酶??活大小為〇．〇９７Ｕ／ｍＬ，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果大于此文獻(xiàn)中鼠李糖乳桿菌中磷酸酶的酶活。因此??選取菌株Ｚ２３為本次實(shí)驗(yàn)的供試菌株，并對(duì)其進(jìn)行菌種鑒定，用于后續(xù)各項(xiàng)研宄。??３．１．３對(duì)硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制??根據(jù)無(wú)色對(duì)硝基苯酚與堿性磷酸酶反應(yīng)可生成黃色對(duì)硝基苯酚，取濃度分別為??１．２５、２．５、５、１０、２０、４０，ｏｌ／Ｌ的對(duì)硝基苯酚溶液，以對(duì)硝基苯酚的濃度為橫坐??標(biāo)，４０５ｎｍ波長(zhǎng)下的吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見(jiàn)圖５。??
２４?產(chǎn)堿性磷酸酶乳桿菌的篩癬酶學(xué)性質(zhì)及降解有機(jī)磷作用研究???１．２?ｒ??ｙ?＝?０．０２４２ｘ－０．００４１??１?￣?Ｒ２?＝?０．９９８５?．??Ｉ?０?６?－??°?０．４??°?２??０??１?１?１?＇??０?１０?２０?３０?４０??對(duì)硝基苯酌濃度（ｇｍｏｌ／Ｌ）??圖５對(duì)硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線??Ｆｉｇ．５?ｐ?－?ＮＰＰ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ??由圖５可知，對(duì)硝基苯酚濃度在０－４０?ｐｍｏｌ／Ｌ之間標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為ｙ?＝??０．０２４２Ｘ－?０．００４１，０．９９８５，這表明對(duì)硝基苯酚濃度在該濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系較??好，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出ＡＬＰ的酶活性大校??３．１．４牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制??配制不同濃度的牛血清蛋白溶液，采用考馬斯亮藍(lán)法繪制蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，以濃??度為橫坐標(biāo)，５９５ｎｍ波長(zhǎng)下的吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見(jiàn)圖６。??
本文編號(hào)：3013701
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【學(xué)位級(jí)別】：碩士
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圖３樣品采集地點(diǎn)??Ｆｉｇ．３?Ｓａｍｐｌｅ?ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ?ｌｏｃａｔｉｏｎ??
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２４?產(chǎn)堿性磷酸酶乳桿菌的篩癬酶學(xué)性質(zhì)及降解有機(jī)磷作用研究???１．２?ｒ??ｙ?＝?０．０２４２ｘ－０．００４１??１?￣?Ｒ２?＝?０．９９８５?．??Ｉ?０?６?－??°?０．４??°?２??０??１?１?１?＇??０?１０?２０?３０?４０??對(duì)硝基苯酌濃度（ｇｍｏｌ／Ｌ）??圖５對(duì)硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線??Ｆｉｇ．５?ｐ?－?ＮＰＰ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ??由圖５可知，對(duì)硝基苯酚濃度在０－４０?ｐｍｏｌ／Ｌ之間標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為ｙ?＝??０．０２４２Ｘ－?０．００４１，０．９９８５，這表明對(duì)硝基苯酚濃度在該濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系較??好，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出ＡＬＰ的酶活性大校??３．１．４牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制??配制不同濃度的牛血清蛋白溶液，采用考馬斯亮藍(lán)法繪制蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，以濃??度為橫坐標(biāo)，５９５ｎｍ波長(zhǎng)下的吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見(jiàn)圖６。??
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