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棒曲霉轉(zhuǎn)化子庫的構(gòu)建和產(chǎn)孢相關(guān)flbA基因的克隆及功能分析

發(fā)布時(shí)間:2021-01-31 05:51
  棒曲霉(Aspergillus clavatus)是一種常見的土壤真菌,廣泛分布于氣候較暖的土壤中,它也廣泛地分布在一些食物中,為小型絲狀真菌,屬于曲霉屬的真菌。棒曲霉在室內(nèi)的環(huán)境中其實(shí)并不常見,然而,它經(jīng)常與釀酒業(yè)聯(lián)系在一起。能夠在查氏培養(yǎng)基、PDA等上培養(yǎng)。棒曲霉代謝可以產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì)。有豐富的胞內(nèi)胞外水解酶活性。其次生代謝產(chǎn)物能夠?qū)φ婢?xì)菌產(chǎn)生一定作用的抑制,如展青霉素等。展青霉素又叫棒曲霉素,具有廣譜的抗生素特點(diǎn),F(xiàn)階段,對于棒曲霉的研究大多是其代謝方面相關(guān)。而對于產(chǎn)孢相關(guān)基因方面的研究還很少。本課題把本實(shí)驗(yàn)保藏的棒曲霉Ac-32作為研究材料,主要的研究內(nèi)容及結(jié)果如下所示。第一,克隆及分析flbA(分生孢子形成相關(guān)基因)。依照NCBI中提供的flbA基因序列,采用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)引物,然后,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,將PCR所得的產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳并對目的條帶進(jìn)行割膠回收。DNA片段進(jìn)行測序,對編碼蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)以及結(jié)構(gòu)信息進(jìn)行分析。基因長度2208 bp,核苷酸序列與構(gòu)巢曲霉的相似性為69.9%,黑曲霉為68.1%,比對棒曲霉、黑曲霉、構(gòu)巢曲霉序列發(fā)現(xiàn)同源序列低。flb... 

【文章來源】:浙江師范大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】:99 頁

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

棒曲霉轉(zhuǎn)化子庫的構(gòu)建和產(chǎn)孢相關(guān)flbA基因的克隆及功能分析


代表性曲霉菌株的菌落形態(tài)(實(shí)驗(yàn)室提供)

孢子,曲霉,足細(xì)胞,菌落


第一章文獻(xiàn)綜述21.2棒曲霉(A.clavatus)簡介和研究概況棒曲霉(Aspergillusclavatus)屬于曲霉屬的真菌,為小型絲狀真菌,是一種常見的土壤真菌,廣泛分布于氣候較暖的土壤中,它也廣泛地分布在一些食物中,尤其是谷物。棒曲霉在室內(nèi)的環(huán)境中其實(shí)并不常見,然而,它經(jīng)常與釀酒業(yè)聯(lián)系在一起。能夠在查氏培養(yǎng)基,PDA等培養(yǎng)基上培養(yǎng),菌落在早期為白色,在后期密被暗藍(lán)綠色的分生孢子,菌落的質(zhì)地絲絨狀,有環(huán)形及輻射形溝紋,沒有什么特別的氣味,有時(shí)會(huì)有滲出液,菌落的反面淡黃色或是無色。分生孢子近橢圓形,表面光滑,在頂囊上緊密排列。分生孢子頭呈棒形,近環(huán)狀排列,在早期也為白色,后期為暗藍(lán)綠色。分生孢子梗莖長短不一,比菌絲體寬,由基內(nèi)菌絲生成,分生孢子梗在營養(yǎng)菌絲上直立生長,無隔且孢子梗呈棒狀。頂囊由分生孢子梗頂端逐漸膨大成為棍棒形[1]。至今為止還沒有發(fā)現(xiàn)其有有性階段。(1)形態(tài)特征:棒曲霉是曲霉屬的一種。PDA平板上培養(yǎng)5d后,菌落呈灰藍(lán)色,邊緣白色,質(zhì)地粉狀(圖3A)。顯微鏡下觀察,典型特征是分生孢子梗頂端(頂囊)膨大成為棍棒形(圖3C)。圖1.2曲霉的菌落(A,實(shí)驗(yàn)室提供)、分生孢子頭、足細(xì)胞、分生孢子梗和分生孢子(B,C)Figure1.2ColoniesofAspergillus(A,providedbythelaboratory),conidiahead,podocytes,conidiophore,andconidia(B,C)ABC

菌落形態(tài),曲霉,菌落,實(shí)驗(yàn)室


第一章文獻(xiàn)綜述31.3棒曲霉相關(guān)代謝產(chǎn)物棒曲霉有比較好的工業(yè)應(yīng)用前景,代謝可以產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì)。棒曲霉有豐富的胞內(nèi)胞外水解酶活性,比如能夠產(chǎn)生纖維素酶、幾丁質(zhì)酶、蛋白酶、糖化酶、α-淀粉酶、DNaes、RNaes等多種酶。其次生代謝產(chǎn)物能夠?qū)φ婢?xì)菌產(chǎn)生一定作用的抑制,如展青霉素等。展青霉素又叫棒曲霉素,具有廣譜的抗生素特點(diǎn)。棒曲霉毒性代謝產(chǎn)物細(xì)胞松弛素E[2],具有很強(qiáng)的抗血管生成和細(xì)胞毒活性。2絲狀真菌模式曲霉——構(gòu)巢曲霉(Aspergillusnidulans)的分生孢子形成調(diào)控模型無性孢子形成是多種真菌的一種常見繁殖模式,包括許多醫(yī)學(xué)、工業(yè)和農(nóng)業(yè)上的重要物種。高等真菌的無性孢子被稱為分生孢子,雖然分生孢子的形態(tài)和功能多種多樣,但所有的分生孢子都代表非能動(dòng)的無性繁殖體,這些無性繁殖體不由細(xì)胞質(zhì)逐漸分裂形成,而是由產(chǎn)孢細(xì)胞的頂端或側(cè)邊。產(chǎn)生分生孢子過程不是單一的,與多因素相關(guān)。包括基因表達(dá)的時(shí)空調(diào)控、細(xì)胞間通訊等。控制這些過圖1.3棒曲霉的菌落和顯微特征(實(shí)驗(yàn)室提供)(A)菌落形態(tài);(B)分生孢子頭自然生長形態(tài);(C)棍棒形的頂囊;(D)分生孢子Figure1.3coloniesandmicroscopiccharacteristicsofAspergillusclavatus(providedbylaboratory)(A)colonymorphology;(B)thenaturalgrowthformofconidiumhead;(C)club-shapedapicalsac;(D)conidia

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]綠衣觀音土曲中棒曲霉的研究[J]. 馮春,汪光明,梁運(yùn)祥,田煥章,王麗新.  釀酒科技. 2004(05)



本文編號(hào):3010317

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